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P25蛋白在重症肌无力患者中的低表达及组织和种属特异性的研究被引量：13: 2004年; 目的　探讨重症肌无力 (MG)相关蛋白P2 5在MG患者骨骼肌中表达减少的特异性并探讨其组织及种属特异性。方法　用免疫组织化学检测P2 5在正常人和MG患者骨骼肌中的表达 ;用免疫印迹检测其在 2 8例MG患者、2 4名正常人和 10例其他肌肉疾病 (OMD)患者骨骼肌中的表达差异 ,及其在 8种不同人体组织和 8种不同动物骨骼肌中的表达。结果　P2 5蛋白在MG患者骨骼肌中免疫组织化学染色强度明显低于正常人 ;免疫印迹显示 ,MG患者、正常人和OMD患者骨骼肌中相对谱带密度分别为 1.0 4± 0 .18、1.2 7± 0 .2 1和 1.2 1± 0 .15 ;MG患者中P2 5蛋白水平明显低于正常人及OMD患者 ,正常人和OMD患者之间差异无显著意义 ;MG患者的不同临床类型和胸腺病理类型之间P2 5蛋白的表达差异无显著意义。P2 5蛋白在人体组织中仅表达于骨骼肌 ;在 8种动物中仅猪有表达。结论　P2 5蛋白在MG患者骨骼肌中表达降低并具有组织和种属特异性。; 都爱莲任惠民吕传真黄俊; 关键词：重症肌无力种属特异性免疫印迹法乙酰胆碱受体

25kD蛋白在人骨骼肌中的定位及在人其他组织中的表达被引量：7: 2004年; 25 k D蛋白是一种新的与重症肌无力相关的蛋白质。为了检测该蛋白在人体不同组织中的表达并明确其在人骨骼肌中的亚细胞定位。本研究提取和纯化 2 5 k D蛋白 ,免疫小鼠制备了 2 5 k D蛋白的抗体 ;用免疫印迹方法验证了抗体的特异性并检测2 5 k D蛋白在成年人及胎儿 8种不同组织中的表达 ;用免疫组化和免疫电镜方法明确了 2 5 k D蛋白在骨骼肌中的细胞及亚细胞定位。结果显示 ,2 5 k D蛋白抗体只与肌肉匀浆样品中 2 5 k D蛋白特异性反应。在成年人及胎儿 8种不同组织中 ,2 5 k D蛋白只见于骨骼肌。免疫组化可见在肌膜下和横纹上有不均匀的免疫染色 ;免疫电镜显示在肌膜下有电子致密物沉积 ,肌丝中未见有电子致密物沉积。这些结果表明 :2 5 k D蛋白抗体具有很高的特异性 ,2 5 k D蛋白只表达于人骨骼肌中 ,其亚细胞定位在骨骼肌的肌膜下。; 都爱莲任惠民吕传真卢家红赵重波朱雯华; 关键词：骨骼肌免疫电镜抗体重症肌无力

重症肌无力患者骨骼肌中减少的25000蛋白即为碳酸酐酶Ⅲ的论证被引量：10: 2005年; 目的论证重症肌无力(MG)患者骨骼肌中特异性减少的25000蛋白为碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)分子。方法用双向电泳结合免疫Western blot分析25000蛋白抗体和CAⅢ抗体有免疫反应的蛋白质分子的物化特征,分别用免疫Dot blot与免疫Western blot观察两种抗体对纯化的25000蛋白及骨骼肌蛋白匀浆的竞争结合,用免疫Western blot分析健康人与MG患者骨骼肌CAⅢ的蛋白表达。结果双向电泳结合免疫Western blot显示,25000蛋白抗体和CAⅢ抗体识别的蛋白质具有相同的相对分子质量和等电点;免疫Dot blot与免疫Western blot的竞争结合证实25000蛋白与CAⅢ为同一物质;免疫Western blot表明,用25000蛋白抗体与CAⅢ抗体检测健康人与MG患者骨骼肌25000蛋白表达的结果亦几乎是相同的。结论MG患者骨骼肌特异减少的25000蛋白分子就是CAⅢ,这为进一步深入研究CAⅢ与MG的发病奠定了基础。; 任惠民涂江龙都爱莲黄俊吕传真; 关键词：重症肌无力蛋白质类

重症肌无力骨骼肌减少的25000蛋白分子鉴定被引量：9: 2006年; 目的:解析重症肌无力(MG)骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子结构。方法:用双向电泳分离纯化骨骼肌25000蛋白,电喷射离子化质谱和Edman降解法分别测定其精确分子质量和N端部分氨基酸序列,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定其肽指纹图谱,在上述基础上,用ImmunoWesternblot分析骨骼肌蛋白与25000蛋白抗体及碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)抗体的结合。结果:质谱和N端部分氨基酸序列的测定表明,电泳显示的表观相对分子质量为25000的蛋白其精确分子质量为29632.05,该蛋白的N端氨基酸可能是酰基化的;肽指纹图谱解析和蛋白资料库查询结果,结合对25000蛋白生化和生物学特征的了解,发现25000蛋白与CAⅢ的分子是非常相似的。结论:MG骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子很可能是已知的蛋白质CAⅢ,该活性物质与MG发病的关系值得进一步研究。; 任惠民都爱莲涂江龙吕传真; 关键词：重症肌无力骨骼肌肽指纹图谱

去神经对大鼠骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ表达和磷酸酶活性的影响被引量：1: 2011年; 目的观察去神经对骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ（carbonic anhydrase Ⅲ,CAⅢ）表达及其磷酸酶（phosphatase）活性的影响,探讨神经冲动受阻是否为重症肌无力（myasthenia gravis,MG）骨骼肌CAⅢ减少的原因.方法定向切断支配大鼠趾长伸肌（extensor digitorum longus,EDL）和比目鱼肌（soleus,Sol）的神经纤维,术后第7、14、28和56天用Western blot分析EDL和Sol的CAⅢ水平,用固相膜上原位酶活性染色方法评估CAⅢ的磷酸酶活性.结果（1）正常侧（即去神经对侧）Sol的CAⅢ水平远高于EDL,并且两者都表现出随时间增加（动物年龄增长）而增加的趋势.去神经后,EDL的CAⅢ水平随时间的延长而逐渐增加;Sol的CAⅢ水平则以14 d为分界先增加后降低.（2）正常侧Sol的CAⅢ的磷酸酶活性[随时间增加（动物年龄增长）呈逐渐增加的趋势]均高于EDL（变化不明显）.去神经后,Sol的CAⅢ磷酸酶活性（第14、28、56天分别为14.39±1.93、11.48±1.46、9.04±1.46）明显低于正常侧（22.75±1.80、25.26±3.15、25.82±2.97,t=0.002、0.005、0.002,均P＜0.05）,EDL的CAⅢ磷酸酶活性与正常侧相比亦是降低,但差异无统计学意义.（3）正常侧EDL和Sol的CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性相一致;去神经后CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性发生了背离,即CAⅢ蛋白表达水平增加,但其磷酸酶活性却降低.结论去神经所致的神经冲动传递障碍与MG自身抗体所致的神经冲动传递障碍对骨骼肌CAⅢ表达水平的影响不同,MG骨骼肌CAⅢ表达水平减少并非是其自身抗体所致的神经冲动传递障碍造成.; 黄河任惠民; 关键词：去神经支配重症肌无力

骨骼肌25 000蛋白分布于Ⅰ型肌纤维被引量：9: 2005年; 目的:探讨骨骼肌25 000蛋白分布与肌纤维类型的关系。方法:分别对正常人及重症肌无力患者骨骼肌相邻的连续冰冻切片进行ATPase染色及25 000蛋白的免疫组化染色,阐明25 000蛋白在骨骼肌的分布及与骨骼肌纤维类型的关系。用免疫印迹方法观察以Ⅰ型纤维为主的比目鱼肌和以Ⅱ型纤维为主的肱三头肌中25 000蛋白表达的差异。结果:相邻冰冻切片ATPase染包和25 000蛋白免疫组化的结果表明,无论是正常人还是MG患者的骨骼肌,25 000蛋白均存在于胞质内,并主要分布在Ⅰ型纤维;在相同免疫染色条件下,该蛋白在MG骨骼肌的染色强度明显低于正常人。免疫印迹显示,在相同的骨骼肌总蛋白量中,比目鱼肌的25 000蛋白表达水平明显高于肱三头肌,进一步证实了25 000蛋白主要分布在Ⅰ型纤维。结论:25 000蛋白主要在骨骼肌Ⅰ型纤维中表达,MG患者骨骼肌的易疲劳和收缩无力可能与该蛋白在Ⅰ型纤维中低表达有关。; 涂江龙任惠民吕传真; 关键词：骨骼肌肌纤维比目鱼肌冰冻切片免疫染色免疫印迹

重症肌无力血清中碳酸酐酶Ⅲ及其抗体的检测被引量：2: 2008年; 目的:检测重症肌无力(MG)患者血清中碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)及其抗体水平,探讨MG骨骼肌减少的CAⅢ是否参与MG的免疫发病。方法:用Western blot检测18例MG患者、16例其他神经肌肉疾病(ONMD)患者和15名健康人血清中CAⅢ水平;用Western blot与酶联免疫吸附测定(ELISA)检测上述血清中抗CAⅢ的抗体水平。结果:Western blot显示,正常人、MG和ONMD患者血清中都存在CAⅢ,但该蛋白的谱带密度在3组人的血清中差异无统计学意义(P>0.05);Western blot与ELISA表明,上述血清中不存在抗CAⅢ的抗体。结论:正常人、MG和ONMD患者血清中均存在CAⅢ蛋白,但不存在抗该蛋白的抗体,说明MG骨骼肌减少的CAⅢ蛋白可能没有直接参与MG的免疫发病。; 涂江龙任惠民; 关键词：重症肌无力血清

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国家自然科学基金(30170329)

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