湖南省自然科学基金(09JJ6047)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 幽门螺杆菌CagA基因的原核表达及抗原性测定
- 2010年
- 目的:合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性。方法:选取前期研究确定的与胃癌相关的H.pylori CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-Ca-gA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性。结果:设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列(AF289435)基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100%;含pET32a-CagA的BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后能表达CagA融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,融合蛋白相对分子质量大小与预期一致(45 kD);Western印迹检测结果显示该融合蛋白可与抗H.pylori全菌抗体结合反应。结论:本实验构建的原核表达系统表达的CagA融合蛋白具有良好的抗原性,为临床胃癌相关H.pylori菌株的筛选和针对性治疗奠定了基础。
- 陈雄徐灿霞王芬沈守荣贾燕
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA基因原核表达抗原性
- 湖南地区幽门螺杆菌CagA基因3'端多态性与胃十二指肠疾病的关系被引量：4
- 2010年
- 目的探讨湖南地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因(CagA基因)3'端可变区序列特征及其与胃十二指肠疾病的关系。方法本地区有明显上消化道症状患者235例,其中慢性胃炎(CG)57例,胃溃疡(GU)62例,十二指肠溃疡(DU)70例,胃癌(GC)46例。于胃镜检查时用灭菌活检钳取胃窦组织1块,分离培养出H.pylori 89株,用PCR法对上述菌株的CagA基因扩增及测序,并通过生物信息学软件进行多重序列比对和相似性分析。结果 H.pylori培养阳性率为37.9%(89/235),其中H.pylori CagA阳性者占91.7%(77/84),GU组、DU组和GC组CagA阳性率高于CG组,其差异有统计学意义(P<0.05)。77株H.pylori CagA基因3'端均具有3个EPIYA重复序列,其中第2个EPIYA序列存在3种突变型,占18.2%(14/77)。H.pylori CagA基因3'端序列特征以东亚型为主,占88.3%(68/77),东亚型的CagA阳性菌株在GU组、DU组及GC组高于CG组(P<0.05)。所有东亚型CagA阳性菌株CagA序列特征类似于Yamaoka报道的A型。结论湖南地区H.pylori CagA阳性菌株以东亚型为主,均具有3个EPIYA重复序列,其中第2个序列存在3种突变型,其与消化性溃疡和胃癌发生有关。
- 陈玉林徐灿霞陈雄
- 关键词：幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A多态性胃十二指肠疾病
- 不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞Cx32、Cx43表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察不同类型幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞间隙连接蛋白(Connexin,Cx)32和43表达的影响,探讨与Cx32、Cx43表达异常有关的H.pylori菌株类型。方法将临床培养分离的不同H.pylori菌株类型包括东亚型CagA+H.pylori、西方型CagA+H.pylori及CagA-H.pylori与GES-1细胞共培养24 h及48 h,对照组不加H.pylori培养24 h及48 h。采用间接免疫荧光方法(IIF)及计算机图像分析技术检测GES-1细胞Cx32、Cx43表达。结果对照组24 h和48 h及加H.pylori各组24 h GES-1细胞Cx32、Cx43表达阳性率均为100%,东亚型CagA+H.pylori组48 h Cx32、Cx43表达阳性率均低于对照组、CagA-H.pylori组和西方型CagA+H.pylori组(P<0.05);对照组24 h和48 h Cx32、Cx43绿色荧光位于细胞膜,西方型CagA+H.pylori组和东亚型CagA+H.pylori组24 h和48 h Cx32绿色荧光大部分位于细胞膜,少部分位于细胞浆,Cx43绿色荧光大部分位于细胞浆,少部分位于细胞膜;东亚型CagA+H.pylori组和西方型CagA+H.pylori组24 h及48 hCx32、Cx43表达强度低于对照组和CagA-H.pylori组(P<0.05),且东亚型CagA+H.pylori组较西方型CagA+H.py-lori组减弱更明显(P<0.05)。结论 H.pylori下调GES-1细胞Cx32、Cx43表达,以CagA+H.pylori菌株特别是东亚型CagA+H.pylori菌株作用更明显。
- 徐灿霞陈玉林邹惠芳陈雄
- 关键词：幽门螺杆菌间隙连接蛋白
