重庆市教委科研基金(KJ100504)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 抑制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用RT-PCR和Western blot检测Pygo2 shRNA对U251细胞Pygo2 mRNA和蛋白的干扰效果,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,BrdU掺入法检测DNA合成。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2 shRNA显著抑制了其mRNA和蛋白的表达,MTT分析其细胞增殖也被显著抑制(P<0.01)。与scr shRNA组的克隆形成数(78.9±6.8)%相比,Pygo2 shRNA组克隆数(55.4±5.2)%显著减少(P<0.05)。与对照组的BrdU掺入率(20.96±2.19)%相比,Pygo2 shRNA组的BrdU掺入率(8.81±0.56)%显著减少(P<0.05),而scr shRNA组的BrdU掺入率是(20.35±1.73)%无显著变化。而且,Pygo2 shRNA使U251细胞处于S期百分比显著减少、G1期显著增加(P<0.01),致细胞周期阻滞于G1期。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体,下调Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,使细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖。
- 陈玉英王海东王占祥谭国伟刘希尧沈上杭
- 关键词：PYGO2胶质瘤细胞增殖短发夹RNA
- Pygo2在脑胶质瘤组织和细胞的表达及临床意义被引量：3
- 2011年
- 目的:检测Pygo2在脑胶质瘤组织和细胞中的表达,并探讨其临床意义。方法:采用RT-PCR检测5种胶质瘤细胞株Pygo2 mRNA表达,Real-time PCR检测67例Ⅱ～Ⅳ级脑胶质瘤组织中Pygo2 mRNA表达,免疫组织化学SP法检测80例脑胶质瘤组织中Pygo2的蛋白表达。结果:Pygo2 mRNA在5种胶质瘤细胞株中均有表达,其中U251细胞中最高,C6细胞中最低。Pygo2mRNA在正常脑组织中表达极低,而在脑胶质瘤Ⅱ～Ⅳ级表达显著增高,且Pygo2 mRNA表达随肿瘤分级的增高而显著增强(P<0.05)。Pygo2在脑胶质瘤组织细胞中定位于胞核,在正常脑组织中表达呈阴性,而在脑胶质瘤组织中约有65.0%阳性表达,两者差异显著(P<0.01)。Pygo2表达Ⅱ级(WHOⅡ)中低,Ⅳ级(WHOⅣ)中高。Pygo2在脑胶质瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中表达阳性率分别是5/13(38.5%)、12/26(46.2%)、15/19(78.9%)、20/22(90.9%),Pygo2蛋白表达与肿瘤分级密切相关(P<0.01)。此外,Pygo2蛋白表达水平与患者的性别、年龄均无显著性差异(P>0.05)。结论:Pygo2在正常脑组织中呈阴性,在脑胶质瘤组织和细胞中均高表达,且在组织中其表达随胶质瘤级别增高而显著增强,提示Pygo2可能在脑胶质瘤的发生、恶性演进中起了重要作用。
- 王海东陈玉英王占祥刘希尧谭国伟沈上杭
- 关键词：REAL-TIME
- 下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。
- 陈玉英王海东王占祥刘希尧谭国伟沈上杭
- 关键词：PYGO2胶质瘤细胞增殖短发夹RNA
- Pygo2、cyclinD1在胶质瘤中的表达及Pygo2对C6细胞增殖的作用
- ＜正＞Pygopus2（Pygo2）蛋白是Wnt信号系统新成员,参与调控基因的转录,与恶性肿瘤的发生密切相关,具有促进乳腺癌增殖的作用。cyclinD1是Wnt通路下游的关键的靶基因,在多种肿瘤发生发展及浸润转移中扮演重...
- 王占祥王海东陈玉英谭国伟刘希尧马永会沈上杭
- 文献传递
- Pygo2过表达促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖被引量：4
- 2012年
- 目的通过构建过表达Pygo2的重组体上调Pygo2表达,探讨其在大鼠胶质瘤C6细胞增殖中的作用及机制。方法重组体经EcoR I和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染大鼠胶质瘤C6细胞,采用Western blot检测外源Pygo2蛋白表达,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测过表达Pygo2对C6细胞中cyclinD1、β-catenin水平的影响,并采用细胞免疫荧光法检测其对C6细胞中cyclinD1、β-catenin亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定结果证实插入序列正确,重组体能有效上调Pygo2表达。将重组体转染C6细胞上调Pygo2表达后,细胞的生长增殖被显著促进,克隆形成显著增多,细胞周期进程从G1期至S期转变显著增强;且cyclinD1水平随之增高,亚定位无改变,β-catenin水平和亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了过表达Pygo2的重组体,过表达Pygo2通过增高cyclinD1水平,促进细胞从G1期进入S期,从而促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖。
- 陈玉英王海东王占祥谭国伟刘希尧沈上杭
- 关键词：PYGO2胶质瘤细胞增殖CYCLIND1
