上海市科学技术发展基金(02ZB14078)
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成年犬骨骼肌成肌细胞的培养纯化、鉴定及生长特性的研究
- 2006年
- 目的建立简便、有效的成年犬骨骼肌成肌细胞(skeletal myoblast cells,SMCs)体外分离培养、纯化和鉴定的方法,并观察犬SMCs的生长特性。方法采用机械分解法与IA型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合,分离消化法培养获取犬SMCs,用DMEM培养液培养,以Ficoll梯度液纯化,进行Desmin免疫组化鉴定,并观察细胞形态、生长特性。结果犬SMCs培养后经台盼蓝检查成活率达95％以上,在接种后4～5 d增殖达高峰,细胞生长旺盛;Ficoll分离纯化的SMCs纯度较高;Desmin免疫细胞化学染色有97％的SMCs胞浆呈阳性反应。结论改良方法获得的SMCs具有良好的增殖、分化能力;采用Ficoll纯化以血清培养,即可获得高产量高纯度的SMCs。
- 汪进益范慧敏刘中民马亮丁一李杨
- 关键词：骨骼肌成肌细胞细胞培养纯化免疫细胞化学
- 人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43的构建及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的构建人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43,为研究连接蛋白Cx43在心肌细胞间通讯、心脏胚胎发育及心肌细胞分化中的作用机制提供物质基础。方法从质粒p18-T上用限制性内切酶BamH1、Xho1切下Cx43cDNA片断,进行琼脂糖电泳,割胶回收纯化;限制性内切酶BamH1、Xho1酶切质粒pENTR11,将线形化的载体与回收的Cx43cDNA片断用T4DNA连接酶连接,测序后通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中。结果凝胶电泳和测序结果均证明已将人类Cx43cDNA克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中。结论成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43。
- 范慧敏李阳刘中民
- 关键词：连接蛋白43慢病毒属真核细胞
- Cx43转基因自体成肌细胞移植对犬急性心肌梗死后心肌结构和心功能的影响被引量：11
- 2006年
- 目的移植Cx43转基因自体成肌细胞（Cx43 SMC）到犬急性心肌梗死（AMI）区内，观察移植Cx43 SMC对心肌结构和心功能的影响。方法将24条健康杂种犬采用计算器随机法分为3组（n=8），即成肌细胞（SMC）移植组、Cx43 SMC移植组和对照组。取犬自体骨骼肌，经体外分离、培养和转化，将质粒载体pLenti6／V5-DEST-Cx43转入骨骼肌成肌细胞。利用结扎左前降支（LAD）的方法建立AMI动物模型，经LAD和梗死区多点注射的方法将实验组犬注射SMC或Cx43 SMC（细胞总数2×10^6个），对照组注射等量的细胞培养液。分别在AMI前1d、AMI后4周、细胞移植4周后，用超声心动图（UC／3）测量左室射血分数（LVEF）、左室舒张末期内径（LVDD）和左室收缩末期内径（LVSD）；并进行心肌组织的光镜和电镜的病理学检查。结果AMI前UCG检查犬左室形态和收缩功能正常，结扎LAD4周后，LVEF降低、LVDD和LVSD均增加（P〈0．05）。移植后4周，与对照组和移植前比较，SMC和Cx43 SMC移植组的LVEF升高、LVDD和LVSD减少（P〈0.05），其中Cx43 SMC移植组较SMC移植组为显著（P〈0．05）。组织病理学检查亦显示移入的Cx43 SMC在宿主心肌组织中排列有序，与宿主心肌细胞的排列方向一致，其间有闰盘形成。结论Cx43 SMC梗死区心肌移植后可减轻心室重构的进程，增加心肌的收缩力，改善心功能。
- 范慧敏汪进益刘中民洪暄孔祥赵曙光丁一
- 关键词：骨骼肌细胞连接蛋白43心肌梗死细胞移植
- 犬心肌缺血再灌注损伤心电图Ⅱ导联QRS波群的演变被引量：3
- 2007年
- 目的观察杂种犬心肌缺血再灌注损伤过程心电图(ECG)的动态变化规律,为研究干细胞移植对犬心肌缺血再灌注损伤后的治疗作用提供基础。方法选用杂种犬24只,结扎冠状动脉左前降支中远1/3处,分3组分别于30min、60min、90min后松开。应用MPA-2000生物信号分析系统,在结扎前后及松开后连续动态记录ECGII导联QRS波群的变化。结果在开始结扎阻断冠状动脉血流时,QRS主波向上Rs型;重新开放血流血管再通之初,83.3%(20/24)的犬QRS波表现为主波向下rS型或QS型,伴QRS波增宽,然后r波波幅逐渐增大,逐渐演变成主波向上的Rs型,QRS时程恢复正常。15min、30min和大于30min的演变率分别为25.00%(6/24)、41.7%(10/24)和16.7%(4/24);且演变率与冠脉阻断时间相关。结论犬心肌缺血再灌注后ECG变化有一定规律,QRS波群变化趋势有可能作为心肌细胞功能恢复程度以及心肌保护效果较为直观的判断指标。
- 汪进益范慧敏刘中民
- 关键词：缺血再灌注损伤QRS心肌功能
