广东省自然科学基金(990508)
- 作品数：5 被引量：84H指数：3
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- 两种重组真菌植酸酶的纯化及其酶学性质比较被引量：8
- 2007年
- 对相同表达系统中产生的黑曲霉植酸酶(r-Anp)与烟曲霉植酸酶(r-Afp)的酶学特性进行了比较.两者的Km值都较低,但r-Anp的Vmax值远高于r-Afp(102.5 vs.29.5μmol.mg-1.min-1,P<0.05).r-Anp在pH 2.5仍具有植酸酶活力,而r-Afp则丧失全部活性.差示扫描量热法(DSC)研究发现r-Afp的蛋白质解链温度(Tm)低于r-Anp(59.1℃vs.62.1℃),但经热处理(90℃,20 min)后,前者残余更多的相对酶活(81%vs.38%,P<0.05).两种植酸酶对胃蛋白酶都有较高的耐受性,但r-Anp对胰蛋白酶的耐受性却不如r-Afp.当溶液中胰蛋白酶与植酸酶的质量之比为0.02时,r-Anp完全失活,而r-Afp则仍保留76.9%的相对酶活.结果表明两种植酸酶的性质具有明显的互补性.
- 陈庄付捷贝锦龙刘世贵
- 关键词：植酸酶黑曲霉烟曲霉纯化酶学性质
- 毕赤酵母植酸酶基因工程菌高密度培养及诱导表达被引量：3
- 2009年
- 研究了毕赤酵母基因工程菌高密度发酵培养方式和植酸酶基因高效表达策略。采用逐步增加流加方式进行高密度培养,结果发酵液中细胞干重达到64 g/L。通过在线检测细胞消耗甲醇的MSUR,估算细胞在单位时间内对甲醇需求量,从而确定甲醇流加速率,采用此种方法可使重组毕赤酵母高水平表达植酸酶,最终发酵上清液中总蛋白量为8.58 g/L,植酸酶活力达到853 U/mL。
- 王志林陈庄朱选蒋宗勇
- 真菌嵌合体植酸酶的构建及其抗蛋白酶水解特性研究被引量：4
- 2008年
- 在烟曲霉植酸酶（Afp）的基因上，通过PCR逐步将编码1—47、178—237及338—381多肽序列的DNA片段置换为黑曲霉NRRL3135植酸酶（Anp）中的对应片段，构建了3个嵌合体（嵌合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ）基因，并在毕赤酵母中将其成功表达及纯化。所有的嵌合体和亲本植酸酶均能抵抗胃蛋白酶。在m（胰蛋白酶）／m（植酸酶）为0．1时，Anp完全失活；但Afp与所有嵌合体的活性仅损失13％-23％。胰蛋白酶水解产物的SDS—PAGE结果显示嵌合体Ⅱ与Ⅲ也能被胰蛋白酶严重水解，但非变性PAGE结果却表明它们在水解后仍能保持结构完整。嵌合体也具有一些与Anp及Alp相异的新pH曲线及耐热性。实验表明，通过替换基因片段改良真菌植酸酶可行。
- 陈庄贝锦龙廖玲刘世贵
- 关键词：植酸酶烟曲霉蛋白酶水解蛋白质工程
- 市售商品植酸酶的作用效果评定被引量：2
- 2009年
- 在国标条件下比较了5种市售商品植酸酶(编号为A、B、C、D、E)的酶活力、最适pH、最适温度、酸碱耐受性、耐热性及蛋白酶耐受性,结果表明,A、B、D植酸酶的酶活力与标示值相近;A、B植酸酶在偏碱条件下具有相对高活性,C、D、E植酸酶在酸性与偏碱环境下均具有较高活力;A、B、C、D、E植酸酶最适温度在50～60℃之间;80℃热处理3 min后,A、B、E植酸酶的剩余酶活有80%以上,C、D植酸酶则仅剩余40%以下;经胃蛋白酶处理后,A、B、D、E植酸酶的剩余酶活50%以上,C植酸酶仅残余8%,而经胰蛋白酶处理后,C、D、E植酸酶剩余酶活70%以上。研究结果表明,5种商品植酸酶各有优点,但并不完全符合"理想"植酸酶的要求。
- 何前贝锦龙容庭张洁陈庄
- 关键词：植酸酶国标法
- 人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达被引量：76
- 2001年
- 本文以黑曲霉 (Aspergillusniger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象 ,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列 ,换用在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因 (PhyA as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS PAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达 ,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌 ,其中SPAN Ⅲ菌株达到了在摇床培养条件下 ,每毫升发酵液产生 16 5 0 0 0u植酸酶的水平 。
- 贝锦龙陈庄杨林廖玲王珣章蒋宗勇
- 关键词：植酸酶基因毕赤酵母表达系统
