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松弛素抑制肝星状细胞胶原合成的体外研究: 2011年; 肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经中间环节,尽早阻止甚至逆转肝纤维化对于改善各种慢性肝病的预后、延缓肝硬化的发生具有重要意义.目前认为,肝星状细胞（HSC）的激活是肝纤维化发生的中心环节,转化生长因子-β1（TGF-β1）是HSC激活的最强因子,而SKi相关新颖N蛋白（Ski-related novel protein N,SnoN）是TGF-β1/Smad信号通路中最重要的负性调控因子.临床研究发现,松弛素有松弛盆腔韧带和扩张子宫颈而利于妊娠和分娩的作用,另外尚有抗肝纤维化作用.本实验通过观察松弛素对体外分离的大鼠HSC内TGF-β1和SnoN蛋白表达的影响,以及PC Ⅲ、HA含量的变化,了解松弛素抗肝纤维化的作用及可能机制.; 董培红俞富军范栩妃王晓峰陈永平李骥; 关键词：肝星状细胞松弛素体外研究胶原合成抗肝纤维化作用 SMAD信号通路

miR-29b抗肝纤维化的机制研究被引量：3: 2013年; 目的:研究miR-29b对肝星状细胞(HSC)中TGF-βⅠ型受体(TGF-βⅠR)表达的调节作用。方法:生物信息学方法预测miR-29b靶基因为TGF-βⅠR。将靶基因3'端非编码区片段克隆至pMIR-re-porter载体构建重组质粒,然后和pRL-TK、miRNA前体共转染入HSC,检测荧光素酶的表达。将miRNA前体转染HSC后检测TGF-βⅠR的mRNA和蛋白质水平。结果:酶切和测序证实重组质粒构建成功;过表达miR-29b时,共转染pMIR-TGF-βⅠR质粒的细胞相对荧光素酶活性较相应过表达miR-NC组明显降低(P<0.05);而共转染pMIR-空载体质粒的细胞相对荧光素酶活性较相应过表达miR-NC组无显著差异(P>0.05);上调miR-29b水平后,TGF-βⅠR mRNA和蛋白的相对表达较转染miR-NC组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-βⅠR是miR-29b的靶基因。miR-29b通过负向调控TGF-βⅠR表达而起抗肝纤维化作用。; 俞富军郑建建高申孟董培红; 关键词：肝星状细胞

原发性肝癌血清中高尔基体蛋白73的表达及其与预后的关系被引量：8: 2013年; 原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，在我国发病及病死率相当高。由于肝癌组织血供丰富，很多患者术前就已存在微转移，术后就更容易发生复发转移。因此，只有早期诊断及早期治疗才能改善肝癌患者预后。高尔基体蛋白73（Golgiprotein-73，GP73）是近年来发现的有关肝损害的新指标，尤其在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中改变特别明显，甚至有文献报道GP73可以作为HCC的标志物。本研究探讨血清GP73蛋白水平与原发性肝癌肝损害严重程度、术后复发及生存预后的关系，为临床上及时有效的治疗提供一定的实验基础。一。; 郑建建董缪武董培红俞富军; 关键词：蛋白水平生存预后高尔基体血清 CARCINOMA

结直肠癌患者血浆中的miR-106a表达及其与预后的关系被引量：3: 2012年; 目的:探讨血浆miR-106a水平与结直肠癌(CRC)患者预后生存的相关性。方法:收集60例健康体检志愿者(对照组),103例就诊我院的CRC患者(病例组),对所有人均进行血浆miR-106a实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测,同时采用Kaplan-Meier进行生存分析。结果:①血浆miR-106a在CRC组较对照组表达明显升高(P=0.004),与是否发生淋巴结转移有关(P=0.033);且患者术后miR-106a明显降低(P<0.001)。②对入院时CRC患者根据miR-106a相对值进行分组,miR-106a高值组术后3年内癌复发率高于低值组(P<0.001);K-M分析则显示高值组术后3年生存率低于低值组(P=0.003)。结论:血浆miR-106a的测定有助于CRC的诊断,且与CRC的复发转移有一定关系。; 郑建建俞富军董培红陈必成; 关键词：结直肠癌实时荧光定量聚合酶链反应

纳米壳聚糖携带miR-29b转染肝星状细胞的实验研究被引量：1: 2013年; 目的:观察纳米壳聚糖携带miR-29b表达质粒对大鼠肝星状细胞的转染效率和治疗效果。方法:制备载miR-29b表达质粒的纳米壳聚糖,并转染大鼠肝星状细胞,荧光显微镜和流式细胞仪观察转染效率,实时荧光定量RT-PCR分析Ⅰ型胶原α1链mRNA的表达水平。结果:紫外分光光度计分析纳米壳聚糖的载药率为91.56%。凝胶电泳阻滞实验显示纳米壳聚糖与质粒结合较好。纳米壳聚糖携带miR-29b表达质粒的转染效率为31.9%,脂质体的转染效率为35.1%,两者差别无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,纳米壳聚糖组和脂质体组Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平明显下降,分别为29%和32%,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:纳米壳聚糖载体具有较高的转染效率,携带miR-29b具有较好的抗肝纤维化效果。我们的研究为肝纤维化基因治疗提供了一种新型载体。; 董培红郑建建卢中秋洪巧高申孟俞富军; 关键词：肝星状细胞

慢性乙型肝炎患者血清GP73与肝纤维化的相关性被引量：5: 2012年; 目的:探讨慢乙肝患者血清GP73与肝纤维化的相关性。方法:收集40例健康志愿者,110例慢乙肝患者进行血清GP73检测,同时病患组均进行HBeAg及肝功能等测定,并对结果进行统计。结果:1.肝纤维化各组较正常组均明显增高(P<0.01),随着纤维化的进展,肝纤维化分期组间也存在明显差别(P<0.01)。45例入院确诊为肝硬化的患者经扶正化瘀等治疗后,第7、30天复查GP73均较治疗前明显减低(P<0.05)且治疗后第30天与第7天相比也有明显差别(P<0.01)。2.所有肝硬化患者经child-pugh分级并与其GP73值进行相关分析,发现两者高度正相关(相关系数为r=0.922,P<0.01)。3.所有患者根据HBeAg阴、阳性进行分组,HBeAg(+)组GP73明显高于HBeAg(-)组(P<0.01)。结论:血清GP73的测定有助于肝纤维化病的诊断和肝损害情况的判断。; 郑建建钱琼信王斯璐丁赛丹俞富军陈必成; 关键词：肝纤维化 GP73 肝损伤酶联免疫吸附试验

TGF-β ⅡR单链抗体／轻链恒定区／鱼精蛋白截短体融合蛋白携带miR-29b抗肝纤维化的研究: 2012年; 目的观察TGF-β ⅡR单链抗体／轻链恒定区／鱼精蛋白截短体融合蛋白（简称新型载体）携带miR-29b对体外培养肝星状细胞（HSC）的转染效率和治疗效果，为今后肝纤维化基因治疗提供新裁体。方法脂质体、新型载体和慢病毒携带miR-29b治疗体外培养的HSC，荧光显微镜和流式细胞术观察转染效率，实时荧光定量RT-PCR和WesternBlot技术分析collagen αl（I）mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较，慢病毒组的转染效率最高，为70％；其次为新型载体组，为58％；最后为脂质体组，为29％。各载体组collagen αl（I）mRNA表现出不同的下降，与对照组比较，慢病毒组下降70％（t=6．316，P〈0．01），新型载体组为50％（t=4．082，P〈0．01），脂质体组为38％（t=3．014，P〈0．05）。各载体组collagen αl（I）蛋白也表现出不同的下降，慢病毒组下降为59％（t=4．209，P〈0．01）；新型载体组为41％（t=4．033，P〈0．01；）；脂质体组为27％（t=2．842，P〈0．05）。结论笔者构建的新型载体具有较高的转染效率，并且携带miR-29b具有较好的抗肝纤维化效果。; 俞富军郑建建高申孟董培红; 关键词：鱼精蛋白类遗传学重组融合蛋白质类遗传学微RNAS

结直肠癌患者血浆中miR-221的临床价值: 2012年; 目的:探究结直肠癌(CRC)患者血浆中miR-221的临床价值。方法:收集60例正常健康体检志愿者(对照组),80例就诊我院的CRC患者(病例组),对所有入选者均进行血浆miR-221实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测。结果:(1)血浆miR-221含量在CRC组织较对照组表达明显升高(P<0.001),并随着duke分期的发展呈现递增的趋势(P<0.01)。(2)患者入院后均符合手术治疗条件,并于术后第7天复查miR-221含量,发现较治疗前明显减低(P<0.01)。3.对入院时CRC患者根据血浆miR-221相对值进行分组,miR-221高值组术后2年内发生癌复发的发生率高于低值组(P<0.001)。结论:血浆miR-221的测定有助于CRC的诊断,并对病情的估计和预后的判断有一定的帮助。; 郑建建杨云秀郭勇俞富军洪炜龙张行陈必成; 关键词：结直肠癌 MIR-221 实时荧光定量聚合酶链反应

脂联素抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6的Ⅲ型前胶原和透明质酸的表达被引量：2: 2011年; 目的观察脂联素对肝星状细胞（HSCs）分泌结缔组织生长因子（CTGF）的影响,并观察Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）含量的变化.方法把大鼠HSCs分成5组,其中4组分别加入不同浓度的脂联素,另外1组作对照.通过RT-PCR和Western Blot技术分析CTGF mRNA和蛋白表达水平,ELISA法检测上清液PCⅢ、HA含量.结果与对照组比较,A、B、C、D组脂联素HSCs内CTGF mRNA表达均下降,吸光度比值分别为1.54±0.18、1.21±0.14、0.96±0.10、0.79±0.08,其中以D组下降最明显（t=2.42,P＜0.05;t=2.73,P＜0.05;t=3.28,P＜0.01;t=4.67,P＜0.01）;CTGF蛋白表达也抑制,积分吸光度比值分别为1.54±0.18、1.21±0.14、0.96±0.10、0.79±0.08,其中以D组抑制最明显（t=2.84,P＜0.01;t=4.05,P＜0.01;t=6.25,P＜0.01;t=9.72,P＜0.01）;上清液PCⅢ、HA含量也下降,随脂联素浓度增加,下降越明显.结论脂联素能够抑制HSCs分泌PCⅢ、HA;脂联素可通过抑制HSCs内CTGF表达而发挥抗纤维化作用.; 俞富军董培红范栩妃陈永平李骥

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王宝恩肝纤维化研究基金(20100002)

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