国家自然科学基金(30600024)
- 作品数：13 被引量：116H指数：7
- 相关作者：陈泽良黄留玉王玉飞乔凤赵瑾更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 不同因素对绵羊同期发情的影响被引量：15
- 2008年
- 用CIDR(阴道栓)和PMSG(孕马血清促性腺激素)处理小尾寒羊、蒙古绵羊、小尾寒羊和东北绵羊的杂交品种,注射PMSG后24h引入试情公羊,以便确定母羊是否发情。实验结果表明:在繁殖季节,不同品种绵羊的同期发情率无显著差异(P>0.05);季节影响小尾寒羊的同期发情效果;阴道栓放置时间的长短影响同期发情率,以12～14d为宜;用450UPMSG处理羊比400U的只平均排卵数稍高(1.545±0.741n=299,1.505±0.647n=88),但不存在统计学上的差异(P>0.05).
- 李秋艳阎凤祥侯健关宏陈永福安晓荣
- 关键词：绵羊PMSG阴道栓同期发情
- 布鲁氏菌BP26基因标记疫苗株的构建及鉴别PCR方法的建立被引量：9
- 2009年
- 【目的】由于现有的减毒活疫苗仍存在较强的毒力,因抗原与毒株的差异不大而很难区分疫苗免疫和自然感染等缺点,限制了现有布鲁氏菌减毒活疫苗的广泛应用。本文拟对布鲁氏菌的减毒活疫苗株M5进行遗传改造,克服这些缺点。【方法】本研究利用同源重组的方法,用卡那抗性基因替换了布鲁氏菌减毒疫苗株M5的BP26基因,得到了新的标记疫苗株M5ΔBP26。分别用标记疫苗株和野生株侵染巨噬细胞和感染小鼠,比较分析标记株在细胞内和小鼠体内的存活能力。根据种特异性保守基因dnaK和缺失的BP26基因设计引物,建立双重PCR,用于区分标记株与野生株。【结果】成功构建了BP26基因标记疫苗株,细胞实验和动物实验结果表明,标记株仍能在胞内和小鼠内存活,具备作为减毒活疫苗的特性。小鼠实验结果显示,感染后两周野生株的细菌数为102.9,而突变株为101.1(P<0.01),至第3周野生株的细菌数为102.2,而突变株未能检出,表明与原疫苗株相比,标记株的感染力进一步减弱。根据DNA序列的差异,建立了能够区分标记疫苗株与野生株的双重PCR方法,标记株因只能扩增出一条带而能与野生株和毒株相区分,从而可以区分自然感染和疫苗免疫。【结论】基因标记疫苗株的构建及鉴别PCR方法的建立,为布鲁氏菌疫苗的进一步研发奠定了基础。
- 汪舟佳甄清乔凤王玉飞杜昕颖钟志军赵瑾于雅琴黄留玉孙岩松陈泽良
- 关键词：布鲁氏菌
- 布鲁氏菌胞内生存机制研究进展被引量：18
- 2007年
- 布鲁氏菌是一种胞内寄生菌,可以在专业和非专业吞噬细胞内生存和复制。当布鲁氏菌与细胞接触时,细菌可以通过受体分子进入细胞。布鲁氏菌在细胞内首先定位于早期吞噬体,然后,在胞内改变其运输方向,最终抵达其胞内复制部位内质网,开始大量复制。这种复制既不影响细胞的基本功能,也不诱导细胞的损伤。主要综述了布鲁氏菌对细胞的侵袭、胞内运输和复制的相关研究进展。
- 王玉飞陈泽良黄留玉
- 关键词：布鲁氏菌细菌侵袭
- DNA测序对Ⅱ型单纯疱疹病毒进行分型鉴定的方法研究被引量：7
- 2008年
- 目的建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法。方法从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组。根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合成了一对能够同时扩增两个型的病毒引物,PCR扩增感染物中病毒的序列,PCR产物克隆到pMD18-T载体,然后进行序列测定,测定序列与数据库比对,根据比对结果确定HSV的型。结果用PCR成功扩增出200bp大小的片段;测定序列与数据库的比对结果显示,该序列与HSV-2的gD基因同源性最高,表明在标本中有HSV-2病毒。测定的gD序列与国外分离株的序列存在一定的差异。结论通过PCR扩增和产物的克隆测序,能够实现对临床上难以区分的HSV-1和HSV-2的分型鉴定。
- 汪舟佳刘意贾雷立任翊孙岩松黄留玉陈泽良
- 关键词：疱疹病毒2型聚合酶链反应DNA
- 奇异变形菌基因组文库的构建及标识序列的发现被引量：2
- 2008年
- 目的：构建用于筛选奇异变形菌的特异序列的基因组文库，并从中筛选变形杆菌特异的标识序列。方法：提取奇异变形菌的基因组DNA，用Sau3AI部分酶切，回收酶切产物，然后与BamHI酶切的pUC19质粒连接，转化JM109，构建奇异变形菌的基因组文库。随机挑取抗性克隆，用位于质粒上的引物进行扩增，确定插入片段的大小及分布情况。DNA测序确定部分克隆中插入的序列，根据序列设计引物，分析这些序列在奇异变形菌临床分离株中的分布，验证序列的特异性。结果：成功构建了奇异变形菌的基因组文库，库容量达到1.1×10^5CFU。阳性克隆的比例为95％，插入片段大小主要分布在200～500bp的范围。对其中14个克隆进行了序列测定，其中5个片段与已知序列有一定的同源性，另外9个与已知序列没有同源性，特异性分析发现了几个较好的标识序列。结论：成功构建了奇异变形菌的基因组文库，利用该文库发现了奇异变形菌特异的序列。
- 赵瑾陈泽良王玉飞乔凤杜昕颖张伶黄留玉
- 关键词：基因组文库
- 布氏杆菌病致病因子及防治研究进展被引量：14
- 2008年
- 布氏杆菌是引起动物布氏杆菌病的病原。这类胞内病原菌表达一系列的因子,包括脂多糖类、毒力调节蛋白和磷酸卵磷酯等来保证其毒力。有些毒力因子是侵袭宿主所必须的,而其他的毒力因子对逃脱宿主的清除是必须的。它们允许布氏杆菌在复制泡内生存和增殖,逃脱宿主免疫系统的检测。了解其毒力可为疫苗研制提供依据,也可促使新的抗生素研制。在动物布病防治中生产兽用疫苗来预防该病,但还没有合适的疫苗防治人布病,可能是人布病复杂的病理生理学不同于动物模型。本文就布氏杆菌毒力因子以及如何操纵在宿主细胞中运输进行综述。
- 钟志军陈泽良黄克和乔凤王玉飞赵瑾汪舟佳徐杰曲勍黄留玉
- 关键词：布氏杆菌病致病因子
- PCR产物直接测序快速识别病原菌被引量：2
- 2008年
- [目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法。[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌。[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增。[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法。
- 陈泽良王玉飞赵瑾赵红庆苑锡铜贾雷立杜昕颖刘京梅宋宏彬张伶黄留玉
- 关键词：布鲁氏菌PCRDNA测序病原细菌
- 布鲁菌外膜蛋白Omp31原核表达及抗原性分析被引量：7
- 2010年
- 克隆羊布鲁菌的外膜蛋白Omp31基因,在大肠埃希菌中表达、纯化,并对Omp31蛋白的抗原性进行分析。以羊布鲁菌的染色体DNA为模板,扩增Omp31基因,双酶切后克隆至pET32a上,在大肠埃希菌ER2566(DE3)中诱导表达,组氨酸结合树脂柱纯化,Western blot鉴定Omp31蛋白的抗原性。将Omp31克隆至载体pET32a,提取的重组质粒经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序分析确定目的基因成功插入到了克隆载体中。将重组质粒转化于大肠埃希菌ER2566(DE3)中表达获得HIS融合蛋白,SDS-PAGE分析证明,表达产物为43 ku的融合蛋白。Western blot结果表明,表达的蛋白具有与布鲁菌外膜蛋白相同的抗原性。
- 徐杰王玉飞汪舟佳乔凤钟志军杜昕颖赵瑾曲勍高岚陈泽良
- 关键词：布鲁菌原核表达抗原性
- 三重PCR鉴别牛、羊和猪3个布氏杆菌种的方法研究被引量：7
- 2009年
- 杜昕颖汪舟佳王玉飞甄清乔凤钟志军赵瑾孙岩松陈泽良黄留玉
- 关键词：布氏杆菌三重PCR
- pUC19K质粒的构建及其在布鲁氏菌突变株构建中的应用被引量：13
- 2007年
- 突变株的构建是细菌基因功能研究的前提。构建了一个可用于布鲁氏菌突变株构建的自杀质粒。在pUC19质粒的多克隆位点插入卡那霉素抗性基因,在该基因两侧添加多个酶切位点,构建成为pUC19K。利用该质粒,构建了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因的突变株。结果表明,利用该自杀质粒,通过一轮筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株。pUC19K质粒的构建及成功应用,为布鲁氏菌突变株的构建提供了一个快速有效的手段,也为布鲁氏菌的基因功能研究奠定了基础。
- 乔凤陈泽良王玉飞赵瑾杜昕颖于雅琴黄留玉
- 关键词：布鲁氏菌
