国家教育部博士点基金(20060023013)
- 作品数：10 被引量：36H指数：3
- 相关作者：陈杰卢朝辉马怡晖张婷婷于双妮更多>>
- 相关机构：北京协和医院郑州大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-23a-27a表达载体构建及功能初探
- 2012年
- 目的构建miR-23a-27a簇真核表达载体并初步探讨该簇的靶基因及其功能。方法应用分子克隆的方法构建联合表达pre—miR-23a-27a簇及单独表达pre—miR-23a、pre—miR-27a的真核载体，应用双荧光素酶报告基因试验和real—timePCR验证该载体表达的有效性，应用microRNA靶基因预测软件和双荧光素酶报告基因试验寻找及鉴定pre—miR-23a．27a的靶基因，应用Westernblot和real．timePCR的方法在乳腺癌细胞MCF-7中初步探讨miR-27a的功能。结果（1）pre-miR-23a-27a—pcDNA3．1、pre-miR-23a-pcDNA3．1、pre—miR-27a—pcDNA3．1重组质粒能够在真核细胞HEK293T中有效转录加工出相应的miR-23a和miR-27a；（2）miR-23a和miR-27a能够同连有Sprouty2基因MRE序列的pRL—TK重组质粒作用，但是只有miR-27a能够同连有Sprouty2基因3’-非翻译区（UTR）全长序列的pRL—TK重组质粒作用，而将Sprouty2基因3’-UTR中同miR-27a结合位点定点突变后，miR-27a无法同其作用；（3）在人乳腺癌细胞MCF-7中转染pre—miR-27a—pcDNA3．1真核表达载体，能够在蛋白水平显著影响Sprouty2基因的表达，但是对其RNA水平没有显著影响。结论Sprouty2可能是miR-27a的功能靶基因，pre—miR-23a-27a—pcDNA3．1、pre—miR-23a—pcDNA3．1、pre-miR-27a-pcDNA3．1载体的构建为下-步深入研究miR-23a和miR-27a的功能奠定了基础。
- 马怡晖于双妮卢朝辉陈杰
- 关键词：微RNAS细胞系肿瘤
- Twist转录因子、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白在乳腺癌中的表达及意义被引量：14
- 2010年
- 目的观察上皮间质转化因子Twist转录因子（简称Twist）和相关蛋白E-和N-钙黏蛋白（cadherin）在乳腺癌中的表达及其与患者临床病理指标的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测56例浸润性导管癌、38例浸润性小叶癌和41例导管内癌以及10例正常乳腺组织中Twist、E-和N—eadherin的表达。结果（1）三种病理类型乳腺癌组织中，Twist阳性率分别为46．4％（26／56）、79．0％（30／38）和26．8％（11／41），其中浸润性小叶癌中Twist阳性率显著高于浸润性导管癌和导管内癌（分别P=0．002、0．000）；E—cadherin阳性率分别为78．6％（44／56）、29．0％（11／38）和80．5％（33／41），其中浸润性导管癌和导管内癌中E—cadherin阳性率显著高于浸润性小叶癌（均P=0．000）；N—eadherin阳性率分别为53．6％（30／56）、68．4％（30／56）和31．7％（13／41），其中在浸润性导管癌和浸润性小叶癌中的阳性表达显著高于导管内癌（分别P=0．033、0．001）。（2）135例乳腺癌组织中Twist和E—eadherin表达呈显著负相关性（P=0．005，Spearman相关系数-0．239）；Twist和N—cadherin表达呈显著正相关性（P=0．000，Spearman相关系数0．319）。（3）乳腺浸润性导管癌差分化组中N．cadherin阳性率显著高于中分化和高分化组（P=0．004）。（4）乳腺浸润性小叶癌淋巴结转移组中Twist阳性率显著高于淋巴结未转移组（P=0．037）。结论三种蛋白在三种乳腺癌组织中的表达差异较大。Twist阳性表达与乳腺浸润性小叶癌淋巴结转移相关。N—cadherin阳性率与乳腺浸润性导管癌组织学分级相关。检测这三个指标可为研究乳腺癌的进展和转移机制及评判其生物学行为提供有价值的参考。
- 马怡晖王凯李磊卢朝辉陈杰
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移TWIST转录因子钙黏着糖蛋白类
- 消化系统恶性肿瘤miRNA研究的新进展被引量：2
- 2010年
- microRNA（miRNA）是一类存在于真核生物中长度约22bp的非编码小RNA分子。miRNA通过与靶基因mRNA的3’端非编码区（3’UTR）结合，在转录后水平调控基因表达，来参与机体不同时期不同组织生长发育的重要过程。已知有一些miRNA基因定位在染色体脆性位点，还有部分miRNA基因存在于一些与肿瘤相关的基因组序列中，
- 朱玥璐陈杰
- 关键词：消化系统恶性肿瘤染色体脆性位点基因MRNA调控基因表达RNA分子
- 人胰腺癌中miRNA的差异表达及部分功能研究被引量：2
- 2011年
- 胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度侵袭性，它的预后差，患者5年生存率不到5％，因此，对于胰腺癌发病机制及其新的治疗靶点的研究，是众多学者研究的热点。miRNA是由21—25个核苷酸组成的非编码RNA，它作为一种转录后调节分子通过与靶基因的3’-UTR配对，促进mRNA的降解或抑制翻译，从而抑制其靶基因的表达。近年的研究显示，大多数肿瘤都存在miRNA表达谱的改变，
- 陈杰于双妮马怡晖赵武干卢朝辉
- 关键词：MIRNA人胰腺癌非编码RNA高度侵袭性转录后调节
- 伴破骨细胞样巨细胞的上皮性肿瘤被引量：8
- 2010年
- 伴有破骨细胞样巨细胞肿瘤的共同特征是间质中存在破骨细胞样巨细胞（osteoclast-likegiantcells，OGC）。可见于身体的各个部位，最常见于骨、肌腱（腱鞘）和软组织，其次是泌尿道、乳腺及胰腺（表1），通常称之为“伴OGC的肿瘤”或“巨细胞肿瘤”。本文将就伴有OGC的上皮性肿瘤进行介绍。
- 孟云霄姜英卢朝辉陈杰
- 关键词：上皮性肿瘤软组织泌尿道
- 胰腺癌中miR-27a靶基因PSMA1的预测及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的 软件预测并筛选miR-27a可能的靶基因,结合胰腺癌比较蛋白质组学结果中表达下调的蛋白,进一步检测胰腺癌中miR-27a的靶基因并进行验证.方法 采用生物信息学预测软件TargetScan、PicTar以及miranda预测miR-27a的靶基因,结合前期比较蛋白质组学的结果,筛选出miR-27a的可能靶基因；构建靶基因3＇非翻译区（UTR）的表达载体,双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-27a对靶基因的靶向作用；胰腺癌肿瘤细胞系PANC-1和BxPC-3中转染miR-27a mimics或微小RNA阴性对照序列,Western blot检测靶蛋白的表达情况.结果 软件预测与蛋白质组学分析结合筛选出miR-27a的靶基因为PSMAl.双荧光素酶报告基因检测系统显示,与对照组相比miR-27a对野生型PSMA1的3＇UTR具有靶向作用,实验组较阴性对照组相对活性值下降19.14％,差异具有统计学意义（P=0.016）；而对突变型PSMA1 3＇UTR的靶向作用消失,实验组与阴性对照组相比差异无统计学意义（P=0.249）.Western blot分析显示转染miR-27a mimics组PSMA1蛋白的相对表达量明显低于阴性对照组,PANC-1细胞实验组的PSMA1相对表达量为0.71±0.01;BxPC-3细胞实验组的PSMA1相对表达量为0.58±.0.04,P值均＜0.01.结论 胰腺癌中PSMA1是miR-27a的直接靶基因.
- 张婷婷孙洋贾丛伟于双妮卢朝辉陈杰
- 关键词：胰腺肿瘤微RNAS
- 靶向敲减Ras癌蛋白融合型泛素连接酶E3的构建
- 2012年
- 目的应用蛋白质敲减技术原理,构建理论上能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合型泛素连接酶E3的真核表达载体。方法选取Raf-1、PI3K、RalGDS中能够与Ras蛋白相互作用的结合结构域和具有泛素连接酶活性的F-Box及U-Box作为功能结构域,采用分子克隆技术依次将其连入pcDNA3.1中构建融合蛋白表达载体,双酶切、PCR和测序技术检测连入核苷酸片段的正确性,Western blot检测融合蛋白表达载体在真核细胞内表达的正确性和作用有效性。结果成功获得6个融合蛋白E3表达载体,5个能够在真核细胞内有效表达,其中(RBD+CRD)Raf-1-U-Box-pcDNA3.1能够敲减人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中Ras蛋白。结论成功构建能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合蛋白表达载体,为下一步应用蛋白质敲减技术奠定了实验基础。
- 马怡晖张强谷雨妹卢朝辉陈杰
- 关键词：泛素蛋白酶体泛素连接酶
- miR-150—5p抑制胰腺癌细胞生长被引量：4
- 2013年
- 目的探讨miR-150-5p对胰腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法即时定量PCR（qRT-PCR）法检On．011例胰腺癌及对应癌旁正常组织和4个胰腺癌细胞系中miR-150-5p的表达，脂质体介导的化学合成miR-150-5p类似物转染PANC-1、MIAPaCa-2、BxPC-3和AsPC-1细胞系，并采用qRT-PCR法在PANC-1、MIAPaCa-2细胞系中检测转染效率；采用CCK-8检测miR-150-5p对胰腺癌细胞生长的影响；在PANC-1和MIAPaCa-2中分别使用PI／FITC双染法和PI单染，流式细胞术检测miR-150-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果miR-150-5p在11例胰腺癌组织中的表达低于癌旁正常胰腺组织，在4种细胞系中的表达低于正常胰腺组织（均P〈0．05）。转染miR-150-5pmimics可有效提高4种胰腺癌细胞中miR-150-5pRNA量（P〈0．01）。转染72h后miR-150-5p可显著抑制AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2和PANC-1细胞生长，与正常对照组相比，抑制率分别为50．7％、48．6％、30．8％和42．3％（P〈0．01）。与对照组比miR-150-5p能够促进胰腺癌细胞凋亡（P〈0．01）。MIAPaCa-2中与对照组比miR-150-5p能够显著升高G1期细胞百分比（P〈0．01），MIAPaCa-2和PANC-1中与对照组比miR-150-5p能够显著降低s期细胞百分比（均P〈0．01）。结论miR-150-5p在胰腺癌中表达下调，过表达miR-150-5p可以抑制胰腺癌细胞生长，阻断细胞周期，促进细胞凋亡。
- 孙洋金香兰张婷婷贾从伟陈杰
- 关键词：胰腺肿瘤微RNAS肿瘤细胞
- 微小RNA与肿瘤关系研究新进展被引量：2
- 2013年
- 微小RNA（microRNA，miRNA）是一类非编码小分子RNA，20世纪90年代初被发现，随后不断有新的miRNA分子被发现，并且诸多的研究提示，miRNA广泛参与了细胞的生长、分化、增殖和凋亡以及代谢、免疫反应等过程。肿瘤的发生发展是细胞功能紊乱、正常生命活动调节受阻，导致细胞恶性增长的结果。对肿瘤中miRNA表达谱的分析揭示，多数类型肿瘤中都存在miRNA表达谱的改变，并且有学者研究报道miRNA基因多位于肿瘤相关的染色体脆性位点区。通过对miRNA功能的探索得知，miRNA通过5’端2～8核苷酸（nt）的“种子”序列与mRNA3’非翻译区（3’-UTR）互补配对，进而在RNA诱导的基因沉默复合物（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC）的作用下，导致靶基因的翻译抑制或降解，从而实现miRNA在转录后水平对基因表达的调控。每个miRNA可作用于多个靶基因，而同一个靶基因也可能受到多个miRNA的调节，其在不同肿瘤中的作用不尽相同。下面我们将对目前已经研究的miRNA在肿瘤中的作用进行综述。
- 张婷婷陈杰
- 关键词：微小RNA肿瘤细胞功能紊乱染色体脆性位点非翻译区RNA分子
- 胰腺伴破骨样巨细胞的肿瘤被引量：3
- 2009年
- 胰腺伴有破骨样巨细胞的肿瘤非常罕见,组织学形态上与骨的巨细胞肿瘤很类似;主要包括两种:伴有破骨样巨细胞的胰腺未分化癌和伴有破骨样巨细胞的胰腺粘液性囊性肿瘤。本文将就这两种肿瘤的临床及形态特征、组织学来源、诊断、鉴别诊断及预后做一综述。
- 孟云霄陈杰
- 关键词：胰腺未分化癌粘液性肿瘤
