国家自然科学基金(31025021)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：叶恭银方琦朱洋铿胡萃王欢更多>>
- 相关机构：浙江大学东华大学上海农林职业技术学院更多>>
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- 菜粉蝶丝氨酸蛋白酶基因Pr-SP1的克隆及其表达谱分析被引量：7
- 2011年
- 昆虫主要依靠先天免疫反应来抵御外源异物的入侵,而与血淋巴黑化及抗菌肽合成等过程密切相关的丝氨酸蛋白酶激活级联反应在其中起着重要作用。为阐明丝氨酸蛋白酶在菜粉蝶Pieris rapae免疫中的作用,本文通过简并引物RT-PCR克隆获得了菜粉蝶丝氨酸蛋白酶家族基因Pr-SP1的cDNA片段,并利用RACE法扩增获得其全序列。该cDNA序列长1489bp,其中开放阅读框长1059bp,共编码353个氨基酸残基。Pr-SP1含一长度为20个氨基酸残基的信号肽序列,其蛋白理论分子量为36.85kDa,理论等电点为6.41。多序列比对结果表明,Pr-SP1与其他昆虫的同源蛋白基因序列上存在较高一致性,在N端有一个发夹结构域,而C端是一个具有催化活性的结构域。实时荧光定量RT-PCR及免疫印迹结果表明,蛹期Pr-SP1主要在颗粒血细胞内进行转录,其蛋白产物主要定位在血浆;Pr-SP1在不同虫态及虫龄都有转录,其蛋白产物在不同虫态及虫龄都有表达,其中5龄幼虫最高,卵期最低;Pr-SP1的转录水平及其蛋白产物的表达水平均会被大肠杆菌Escherichia coli、藤黄微球菌Micrococcus luteus和巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris诱导。根据这些结果分析认为,Pr-SP1属于Sptzle蛋白酶前体激活酶,并参与菜粉蝶的先天免疫反应。
- 朱洋铿方琦胡萃叶恭银
- 关键词：菜粉蝶丝氨酸蛋白酶先天免疫表达谱
- 蝶蛹金小蜂热激蛋白家族基因表达与热保护功能被引量：3
- 2012年
- 作为分子伴侣,热激蛋白可起修复变性蛋白与阻止其他蛋白质聚集的作用。为进一步理解蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum热激蛋白家族的分子伴侣功能,本研究对来自该寄生蜂的热激蛋白Pphsp90,Pphsp70,Pphsc70,Pphsp60,Pphsp40和Pphsp20的基因在大肠杆菌Escherichia coli BL21菌株中进行了过表达。结果表明:除Pphsp40外,其余5个基因均得到高效表达,且表达的重组热激蛋白在高温下(80℃)具可溶性与热稳定性。其中,Pphsp20与Pphsp90在大肠杆菌中的表达显著提高了高温下(50℃,1h)细胞的存活率。离体活性实验证实,利用纯化的融合蛋白Pphsp20可减少高温下荧光素酶的聚集现象。据此认为,Pphsp20与Pphsp90均具有大肠杆菌细胞的热保护功能,但Pphsp20可以单独发挥作用,而Pphsp90可能需其他因子协同作用才有保护活性。
- 王欢李凯方琦叶恭银
- 关键词：蝶蛹金小蜂热激蛋白基因表达蛋白纯化
