国家自然科学基金(30772250)
- 作品数：10 被引量：43H指数：4
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- 胰岛素对烧伤后心肌细胞损伤保护的初步研究被引量：3
- 2020年
- 目的观察胰岛素对烧伤后乳鼠心肌细胞的保护作用。方法原代培养出生2 d SD乳鼠心肌细胞,并分为假伤组(Sham组)、烧伤组、胰岛素组和胰岛素活化抑制剂LY294002预处理组(LY组)。制备清洁级3月龄SD大鼠烧伤血清〔30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤大鼠,术后6 h取腹主动脉血清〕诱导的SD乳鼠心肌细胞损伤模型;胰岛素组在细胞培养基中同时加入10%烧伤大鼠血清和10 U/L胰岛素;LY组先加入50μmol/L的LY294002后30 min,再加入烧伤血清和胰岛素。Sham组仅给予10%假伤大鼠血清(假伤大鼠仅置于37℃温水中)。各组细胞继续培养12 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定心肌细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和肌酸激酶(CK)含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测心肌细胞肌钙蛋白T(cTnT)蛋白表达;采用Hoechst 33258染色法检测心肌细胞凋亡情况。结果与Sham组比较,经烧伤血清诱导后,心肌细胞发生炎症反应及损伤,表现为TNF-α、IL-6、CK含量升高〔TNF-α(ng/L):273±48比21±6,IL-6(ng/L):416±83比44±11,CK(U/L):1.44±0.24比0.14±0.08,均P<0.01〕,cTnT蛋白表达下调(cTnT/β-actin:0.12±0.04比0.86±0.34,P<0.01),凋亡细胞增多〔(19.1±5.6)%比(5.2±1.3)%,P<0.01〕;胰岛素能够明显减轻烧伤血清诱导的心肌细胞损伤,TNF-α、IL-6和CK含量均较烧伤组明显降低〔TNF-α(ng/L):105±37比273±48,IL-6(ng/L):176±77比416±83,CK(U/L):0.82±0.26比1.44±0.24,均P<0.05〕,且cTnT蛋白表达明显上调(cTnT/β-actin:0.41±0.16比0.12±0.04,P<0.05),凋亡细胞明显减少〔(10.7±3.2)%比(19.1±5.6)%,P<0.05〕;而胰岛素活化抑制剂LY294002能够明显抑制胰岛素对损伤心肌的保护作用。结论在烧伤血清诱导的乳鼠心肌细胞损伤模型中,胰岛素可能通过抗炎、抗损伤和抑制凋亡等发挥细胞保护作用。
- 吕根法郑宏智石宏伟任罗达
- 关键词：烧伤血清心肌细胞胰岛素
- 烧伤血清作用下心肌细胞蛋白激酶B和p38丝裂原活化蛋白激酶通路的交叉对话研究被引量：4
- 2008年
- 目的了解在烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞内是否存在磷脂酰肌醇3-激酶（Pl3K）／蛋白激酶B（Akt）与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK，以下简称p38）信号通路的交叉对话，探讨此二通路在烧伤后心肌细胞损伤中的作用。方法建立烧伤血清刺激下的大鼠心肌细胞模型。（1）检测体积分数10％的烧伤血清刺激不同时间后，心肌细胞内磷酸化p38（p-p38）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达水平。（2）检测在不同体积分数（5％、10％、20％）的烧伤血清或体积分数10％烧伤血清＋胰岛素（1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8mol／L）作用下，心肌细胞内p-p38和p-Akt的表达水平，并测定细胞培养上清液中肌酸激酶（CK）的含量。（3）采用p38MAPK通路抑制剂SB203580、P13K／Akt通路抑制剂LY294002进行阻断实验，测定心肌细胞内p-p38和p-Akt的表达水平及细胞培养上清液中CK的含量。结果（1）体积分数10％烧伤血清作用1、3、6、12、24h时，心肌细胞p-p38水平分别为4．0±0．8、3．6±0．8、5．1±1.6、2．4±0．5、3．0±0．6，较作用0h时（加入血清后即刻）的水平（1．0）明显增高（P〈0．01）；而p-Akt表达水平分别为0．15±0．07、0．64±0．10、0．26±0．08、0．38±0．11、0．59±0．13，较作用0h时水平（1．00）明显降低（P〈0．01）。（2）不同浓度烧伤血清或烧伤血清＋胰岛索作用下，p-p38和p-Akt的表达水平呈相反变化趋势；心肌细胞CK的释放量随烧伤血清浓度升高而增高，胰岛素对此有明显的抑制作用（P〈0．05或P〈0．01）。（3）LY294002能够升高烧伤血清导致的低p—p38水平，抵消胰岛素的保护作用（P〈0．01）；SB203580能使烧伤血清所致的低p-Akt水平得以回升（P〈0．01），抑制烧伤血清引起的CK释放。结论烧伤血清作用下的心肌细胞存在Pl3K／Akt和p38信号通路的交叉对话，并可能对心肌细胞产生调控作�
- 吕根法陈璧张万福王耘川朱雄翔胡大海
- 关键词：烧伤P38丝裂原活化蛋白激酶类蛋白激酶B烧伤血清
- 胰岛素对烧伤血清致心肌细胞凋亡的保护作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨胰岛素对烧伤血清致心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法通过烧伤血清作用的心肌细胞模型，用胰岛素及其信号通路抑制剂SB203580、LY294002进行干预。蛋白质免疫印迹法检测心肌细胞内活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（cleaved—caspase-3）、Bax和磷酸化核转录因子-KB抑制因子仅（p-IKBα）的表达；定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因表达；Hoechst33258核染色法检测心肌细胞凋亡。同时通过阻断实验，初步研究胰岛素保护心肌细胞作用的信号通路。结果胰岛素能够明显降低烧伤血清作用的心肌细胞cleaved—caspase一3（2．22-I-0．30比4．84±0．74，P〈0．01）、Bax（1．33±0．35比3．74±0．65，P〈0．01）和p-IKBα（1．43±0．62比3．62±0．74，P〈0．01）的表达；显著抑制TNF-α表达（0．72±0．27比2．02±0．63，P〈0．01）；降低心肌细胞的凋亡率[（9．4±3．4）％比（19．1±5．6）％，P〈0．01]。阻断实验结果显示，胰岛素活化磷酯酰肌醇-3-激酶／蛋白丝氨酸／苏氨酸激酶（P13K／Akt）通路的抑制剂LY294002能够抵消胰岛素的保护作用；而p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）通路活化抑制剂SB203580则能够抑制烧伤血清引起的心肌细胞损害，与胰岛素作用相当。结论在烧伤血清作用的心肌细胞模型，胰岛素可能通过对P13K／Akt和p38MAPK通路的调控发挥其对心肌细胞的抗炎、抗凋亡作用。
- 吕根法石宏伟王光远樊磊胡大海陈璧
- 关键词：胰岛素烧伤心肌细胞凋亡肿瘤坏死因子-Α
- 强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用
- 2008年
- 目的探讨强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用及其可能机制。方法健康雄性SD大鼠18只,右颈静脉及左心室插管,随机均分为3组:假伤组,大鼠给以假烫;烧伤组,制作30%TBSAⅢ度烫伤后,常规给以液体复苏;强化组,烫伤后给以强化胰岛素治疗,液体总量同烫伤组。测定伤后0、1、2、3、4、5、6h的血糖及左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LV-EDP)。伤后6h处死动物,留取左心室组织,分别用ELISA和定量PCR法测定TNF-α蛋白及其mRNA水平,Westernblot观察p-IκBα和IκBα变化。同时用烧伤血清培养新生鼠心肌细胞,观察胰岛素及其活化抑制剂LY294002对p-IκBα水平的影响。结果与假伤组比较,烧伤组动物伤后出现应激性高血糖反应,LVSP降低,LVEDP升高,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平升高,p-IκBα蛋白表达增高,IκBα蛋白表达降低(P<0.05或0.01)。烧伤大鼠经强化胰岛素治疗后,血糖维持在4.5～5.2mmol/L之间,左心室功能得到明显改善,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平显著降低,κBα的磷酸化和降解明显减轻(P<0.05或0.01)。LY294002能够消除胰岛素对烧伤血清培养心肌细胞κBα磷酸化的抑制作用。结论强化胰岛素可能通过减少IκBα的磷酸化降解而降低NF-κB活化,进而抑制心肌细胞TNF-α的转录与表达,发挥改善心肌功能的作用。
- 吕根法陈璧王耘川张万福董茂龙汤朝武胡大海
- 关键词：胰岛素IΚBΑ
- 离体角质形成细胞热损伤模型建立及细胞凋亡观察被引量：7
- 2009年
- 目的建立离体KC热损伤模型，了解不同温度热损伤后KC凋亡情况。方法体外培养人KC，分别以37、41、43、45、48、51℃孵育KC10min。用锥虫蓝染色初步观察KC死亡情况，Hoeehst33258荧光染色检测细胞凋亡情况，应用流式细胞仪对细胞凋亡和死亡情况进行定量分析。采用噻唑蓝法检测热损伤对KC增殖活性的影响。结果锥虫蓝染色、Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测结果显示，随着热损伤温度的升高，KC中凋亡和死亡细胞逐渐增加；45oC时KC凋亡率和死亡率分别为（12．3±3．2）％、（14．1±1．6）％，48℃时各为（27．7±5．1）％、（58．0±4．2）％，51℃时KC死亡率高达（83．0±5．3）％。噻唑蓝法检测结果显示，45℃热损伤条件下KC生长出现平台期。结论热损伤能造成离体KC凋亡、生长受抑制，45℃孵育10min为构建KC热损伤模型的较好条件。该模型可用于研究KC热损伤后的凋亡情况及其生物学特性。
- 白晓智吕根法谢松涛胡大海朱雄翔汤朝武
- 关键词：细胞凋亡角质形成细胞热损伤细胞模型
- 胰岛素强化治疗拮抗烫伤大鼠心肌细胞凋亡的机制研究被引量：6
- 2011年
- 目的探讨大鼠重度烫伤后胰岛素强化治疗拮抗心肌细胞凋亡的作用及机制。方法将18只SD大鼠按随机数字表法分为假伤组、烫伤组和胰岛素强化治疗组（强化治疗组），每组6只。制作30％总体表面积（TBSA）Ⅲ度烫伤模型及胰岛素强化治疗模型。伤后6h取大鼠左室心肌组织，采用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡，用免疫组化和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）分别观察3种凋亡相关基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果与假伤组比较，烫伤后心肌凋亡细胞明显增多（（13．1±3．4）％比（0．6±0．4）％，P〈0．01]caspase-3、Bax的蛋白表达明显增高（免疫组化caspase-3：13．72±4．13比1．36±0．95，Bax：29．64±5．42比2．24±1．04；Westernblottingcaspase-3：5．72±2．13比1，Bax：4．64±1．42比1），而Bcl-2表达水平显著降低（免疫组化：3．39±1．52比8．01±2．56；Westernblotting：0．69±0．42比1，均P〈O．01）。经胰岛素强化治疗后，心肌细胞的凋亡率较烫伤组明显降低[（6．7±1．8）％比（13．1±3．4）％，P〈0．01]，3种凋亡相关基因的蛋白表达水平正好与烫伤组的变化相反（免疫组化caspase-3：8．88±3．36比13．72±4．13，Bax：14．43±3．69比29．64±5．42，Bcl-2：8．61±3．72比3．39±1．52；Westernblottingcaspase-3：2．18±0．86比5．72±2．13，Bax：2．87±1．35比4．64±1．42，Bcl-2：3．57±1．70比0．69±0．42，P〈0．05或P〈0．01）。结论胰岛素强化治疗可能通过调节caspase-3、Bax和Bcl-23种细胞凋亡相关基因的表达，对烫伤后心肌细胞发挥抗凋亡作用。
- 吕根法石宏伟樊磊冯忠明王光远
- 关键词：烫伤胰岛素强化治疗心肌细胞凋亡
- 强化胰岛素治疗拮抗严重烫伤大鼠心肌细胞凋亡的作用被引量：1
- 2008年
- 目的了解强化胰岛素治疗对重度烫伤大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及机制。方法将18只SD大鼠分为3组，每组6只。烫伤组及强化组大鼠背部脱毛后造成30％TBSA的Ⅲ度烫伤。强化组伤后静脉注射胰岛素等渗盐水（15mU·kg^-1·min^-1）和100g／L葡萄糖；烫伤组给予等渗盐水（2mL·kg^-1·1％TBSA^-1·8h^-1）；假伤组模拟烫伤，伤后给予生理量的液体。记录3组大鼠伤后6h的左心室压力最大上升／下降速率（±dp／dt max）；采用原位末端标记法和DNA梯带法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况；蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、Bcl-2的表达水平。结果假伤组、强化组、烫伤组大鼠＋dp／dtmax值分别为（5．5±0．5）×10^3、（3．4±0.4）
×10^3、（2．5±0．5）×10^3mmHg／s（1mmHg=0．133kPa）；-dp／dt max值分别为（4．55±0．34）×10^3、（2．94±0．22）×10^3、（2．05±0．19）×10^3mmHg／s。烫伤组大鼠±dp／dtmax均低于强化组（P〈0．01）。烫伤组大鼠心肌细胞凋亡指数[AI，（13、1±3．4）％]明显高于假伤组[（0．6±0．4）％，P〈0，01]；强化组AI为（6．7±1．8）％，明显低于烫伤组（P〈0．01）。假伤组大鼠心肌组织未见DNA断裂条带，烫伤组可见明显的DNA断裂形成梯带，而强化组梯带形成不明显，表示其凋亡细胞明显少于烫伤组。烫伤组心肌组织内p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平明显低于强化组。结论强化胰岛素治疗通过上调Akt活性，增加Bcl-2的表达，可能是其抗心肌细胞凋亡、保护心功能的机制之一。
- 吕根法陈璧张万福董茂龙朱雄翔胡大海
- 关键词：胰岛素肌细胞细胞凋亡
- 胰岛素对烧伤血清诱导血管内皮细胞凋亡的影响及机制被引量：6
- 2009年
- 目的探讨胰岛素对烧伤血清诱导血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法体外常规培养内皮细胞系ECV304，随机分为正常对照组（n=6），体积分数15％（V/V）正常大鼠血清培养；烧伤血清刺激组（n=6），体积分数15％（V/V）自制烧伤大鼠血清培养，血清采自背部30％TBSAⅢ°烫伤大鼠模型；胰岛素处理组（n=6），体积分数15％（V/V）自制烧伤大鼠血清中加入10^-7M／L胰岛素培养；刺激6h后采用原位末端标记法（TUNEL）观察内皮细胞凋亡、免疫组织化学染色和蛋白印迹法检测抗凋亡蛋白bel-2及eNOS的蛋白表达变化，数据以表示，均数比较采用单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与正常对照组比较，烧伤血清促进内皮细胞凋亡（18．5％±3．1％），免疫组化染色bcl-2平均吸光度低（0．14±0．02），蛋白印迹实验显示bel-2（0．36±0．12）和p-eNOS（0．55±O．28）表达降低（P〈0．01）。相对于烧伤血清刺激组，胰岛素处理组细胞凋亡显著减少（9．6±2．8％），免疫组化染色bel-2平均吸光度升高（0．21±0．03），蛋白印迹实验显示bcl-2（0．94±0．25）和p-eNOS（O．89±0．16）表达明显恢复（P〈0．01）。eNOS在各组中无明显变化。结论胰岛素明显抑制烧伤血清诱导下的内皮细胞凋亡并增加抗凋亡蛋白bel-2的表达，此作用可能与eNOS的磷酸化有关。
- 张万福胡大海吕根法王耘川朱雄翔高峰
- 关键词：胰岛素烧伤内皮细胞凋亡
- 中草药拮抗内毒素作用机制研究进展被引量：14
- 2010年
- 目的介绍中草药在拮抗内毒素机制方面的研究进展。方法查阅国内外相关文献,对中草药拮抗内毒素作用机制进行分析、归纳、总结。结果中草药可通过与内毒素结合、抗炎、免疫调节等作用,发挥对内毒素的拮抗作用。结论中草药可通过多种途径拮抗内毒素,值得深入研究。
- 吕根法王国治石宏伟王晓红郑宏志吴天顺
- 关键词：中草药内毒素
- 以类脂A为靶点应用生物传感器技术筛选抗内毒素中草药被引量：2
- 2010年
- 目的以细菌内毒素活性中心类脂A(Lipid A)为靶点,应用生物传感器技术,从42种中草药水煎液中筛选拮抗内毒素作用的中药。方法将Lipid A包被于生物传感器的疏水性样品池,通过生物传感器测定中药与Lipid A的结合能力;对具有高亲和力的中药与内毒素作用,再次测定其与Lipid A的结合能力,并通过定量的内毒素中和实验进一步的对生物传感器的测定结果进行验证。结果在筛选的42种中草药中,观察到赤芍、大黄、青果、栀子等中药能与Lipid A高亲和力结合;通过与内毒素作用后的二次检测,发现赤芍、大黄、青果等中草药含有较高Lipid A结合的有效成分,定量内毒素中和实验的测定结果与生物传感器的定性检测结果一致。结论以Lipid A为靶点,应用生物传感器技术,筛选拮抗内毒素中草药的方法,具有快速、高效、直观、准确的优点。
- 吕根法吴天顺郑宏治石宏伟王晓红王国治
- 关键词：生物传感器中草药内毒素类脂A
