上海市科学技术委员会资助项目(064119529)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 相关作者：徐金华施伟民朱小华施若非项蕾红更多>>
- 相关机构：复旦大学同济大学附属同济医院上海市第一人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SLE患者Th2细胞活化相关基因的表达
- 2008年
- 本研究通过检测SLE患者和正常人PBMC中IL-4、IL-4R、STAT6、GATA3、MBD2的mRNA的表达水平，探讨SLE患者Th2细胞异常活化情况。
- 秦海红施若非伍洲炜梅兴宇徐金华郑捷施伟民
- 关键词：SLE患者TH2细胞IL-4R人PBMCSTAT6GATA3
- SLE患者GATA-3、MBD2对IL-4表达水平的调控作用被引量：1
- 2009年
- 目的分析SLE患者GATA-3、MBD2与IL-4表达的相关性,探讨GATA-3和MBD2对IL-v4表达的调控作用。方法应用实时定量PCR法检测35例SLE患者和20例正常人外周血单核细胞(PBMC)中IL-4、GATA-3、MBD2的mRNA表达水平,并分析它们之间的相关性。结果SLE患者外周血单核细胞中IL-4、GATA-3和MBD2的表达水平均明显高于正常对照组(t=3.37,3.55,9.68,P均<0.05);IL-4与GATA-3、IL-4与MBD2的表达水平均呈正相关(r=0.39,0.97,P均<0.05)。结论SLE患者中IL-4表达水平升高可能是由于MBD2对IL-4基因阻遏作用降低,及大量GATA-3对IL-4基因的过度激活共同作用所导致。
- 秦海红褚国弟黄峥烨徐金华施若非施伟民
- 关键词：红斑狼疮IL-4GATA-3
- 系统性红斑狼疮患者甲基转移酶活性的测定及其意义被引量：6
- 2011年
- 目的探讨甲基转移酶(DNMT)活性在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的变化及其意义。方法分离SLE患者及正常人群PBMC,抽提核蛋白,采用DNMT活性检测试剂盒检测两组PBMC中的DNMT活性。对SLE患者的DNMT催化活性与系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLE-DAI)进行相关分析。结果 SLE患者PBMC的DNMT活性较正常对照组明显下降,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),但是与SLEDAI评分无明显相关性(P>0.05)。结论 SLE患者PBMC的DNMT活性明显下降,DNMT活性下降可能与SLE的发病相关。
- 肖琴施伟民黄懿王上上施若非徐金华
- 关键词：系统性红斑狼疮甲基转移酶
- DNA甲基转移酶在SLE表观遗传中的作用被引量：2
- 2009年
- SLE的表观遗传学研究显示，DNA低甲基化状态在SLE发病机制中具有重要作用。DNA甲基转移酶是DNA甲基化反应的催化剂，是干预DNA甲基化状态的重要物质。DNA甲基转移酶的转录水平和活性受启动子表位修饰、信号传导与转录激活因子3、肿瘤抑制基因p53、转录因子家族sp蛋白、甲基化CG序列结合蛋白等多种因素调控。狼疮患者DNA甲基转移酶的表达与活性降低，并与T淋巴细胞DNA低甲基化发生机制相关。探讨DNA甲基转移酶在SLE表观遗传学发病机制中的作用通路，揭示SLE表观遗传学的调控机制，将为SLE治疗提出新的治疗方案。
- 朱小华徐金华项蕾红
- 关键词：红斑狼疮甲基化
- SLE患者基因组DNA甲基化水平的检测被引量：4
- 2009年
- 目的构建甲基CpG结合域（MBD）蛋白检测分析SLE患者基因组DNA甲基化水平。方法将重组表达质粒MBD—pET30b＋转化大肠杆菌DH5a克隆扩增并测序鉴定后，转化大肠杆菌BL21（DE3）后接种于LB培养基中，异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白的表达，表达产物包涵体经Ni—NTA亲和层析纯化，通过SDS—PAGE和Western印迹鉴定蛋白表达。用此蛋白免疫染色人胚肾细胞后用荧光显微镜观察、免疫染色正常人（15例）和SLE患者（21例）外周血单核细胞后用流式细胞仪检测平均荧光强度。结果克隆质粒测序结果与理论预期完全一致，SDS—PAGE显示在大肠杆菌中表达出分子量为46000的目标蛋白，Western印迹显示目标蛋白带有His融合标签（氨基端）和HA标签（羧基端）。荧光显微镜观察显示MBD蛋白能与细胞内的甲基化CpG基序特异性结合，流式细胞仪检测显示SLE患者DNA甲基化水平（9．32±1．33）明显低于正常人（11．66±1．04）（P〈0．05），SLE患者DNA甲基化水平与SLE—DAI负相关（r=-0．78，P〈0．01）。结论SLE患者DNA甲基化水平明显低于正常人，并与SLE—DAI负相关。
- 朱小华李锋陈国梁杨永生林尽染徐金华项蕾红
- 关键词：红斑狼疮DNA甲基化
- SLE患者DNA甲基转移酶1单核苷酸多态性分析被引量：1
- 2009年
- 目的比较SLE患者DNMT1基因的单核苷酸多态性，探讨DNMT表达异常在SLE发病中的意义。方法选取SLE患者11例，正常人对照12例。外周血单一核细胞DNA提取后应用PCR结合测序方法检测并分析DNMT1基因的部分外显子exon1～exon7及相应的内含子的单核苷酸多态性，并做进一步基因型分析。结果SLE患者中DNMTl外显子7与8之间内含子7存在21397位T→C（胸腺嘧啶→胞嘧啶）的改变，CC的纯合子较正常人对照组明显增加（r=4．10，P〈0．05）。结论SLE患者DNMT1基因存在单核苷酸多态性，可能是DNMT1基因表达异常的遗传成分之一。
- 徐金华朱小华施伟民
- 关键词：甲基转移酶类
- SLE患者外周血单一核细胞淋巴细胞功能相关抗原1表达的检测被引量：3
- 2009年
- 目的研究SLE患者外周血单一核细胞（PBMC）淋巴细胞功能相关抗原1（LFA-1）的表达，探讨LFA-1与SLE的发病及病情变化的关系及其临床意义。方法提取30例SLE患者（SLE组）和24例正常人（对照组）的PBMC，用抗人CD3-FITC和抗人CD11a—PE对其进行标记后，采用流式细胞术检测其CD11a的表达率。结果PBMCCD11a的表达率对照组为68．21％±4．58％，SLE组为73．74％±7．89％，活动期组为77．11％±7．46％，稳定期组为69．33％±6．27％，SLE组PBMCCD11a的表达率显著高于对照组（P〈0．05），且活动期组亦显著高于对照组（P〈0．05），而稳定期组与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。活动期组与稳定期组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。相关性分析显示，SLE患者CD11a的表达率与其采血时的SLEDAI呈正相关（r=0．64，P〈0．01）。结论LFA-1的过表达参与SLE的发病，并与疾病活动相关。
- 张耀华施伟民徐金华
- 关键词：红斑狼疮淋巴细胞功能相关抗原1抗原CD11A
- 甲基CpG结合域四聚体蛋白的原核表达、纯化及鉴定
- 2009年
- 目的在大肠埃希菌中表达甲基CpG结合域四聚体蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法将重组表达质粒4×MBD-pET30b+转化大肠埃希菌DH5a克隆扩增并测序鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达,用此蛋白免疫染色人胚肾细胞后用荧光显微镜观察。结果克隆质粒测序结果与理论预期完全一致,SDS-PAGE显示在大肠埃希菌中表达出相对分子量为46000的目标蛋白,Western blot显示目标蛋白带有His融合标签(氨基端)和HA标签(羧基端)。荧光显微镜观察显示MBD蛋白能与细胞内的甲基化CpG基序特异性结合。结论成功表达并纯化了具有免疫原性的甲基CpG结合域四聚体蛋白,为今后进一步研究DNA甲基化奠定了基础。
- 朱小华李锋陈国梁杨永生林尽染徐金华项蕾红
- 关键词：原核表达蛋白纯化DNA甲基化
- 甲基结合蛋白MeCP2与mbd2在SLE患者中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的探讨甲基结合蛋白MeCP2及去甲基化酶mbd2基因的表达异常在SLE发病中的作用。方法以RT—PCR方法检测SLE缓解期、活动期患者与正常人外周血单一核细胞（PBMC）中MeCP2及mbd2基因的表达水平，并进行相关性分析。结果SLE活动期、缓解期及正常人对照组PBMC中MeCP2的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。SLE缓解期患者PBMC中mbd2的表达水平显著高于正常人对照组（t=12．8，P〈0．01）；SLE活动期患者PBMC中mbd2表达显著高于SLE缓解期（t=20．0，P〈0．01）。SLE患者PBMC中mbd2的表达与SLEDAI评分呈正相关（r=0．737，P=0．0001）。正常人对照组PBMC中mbd2的表达与MeCP2的表达呈正相关（r=0．550，P=0．0222）。结论在正常情况下，MeCP2和mbd2的表达相互制约，在SLE患者中这种关系被破坏。
- 伍洲炜吴瑞勤郑捷徐金华施伟民
- 关键词：红斑狼疮
