上海市科学技术委员会资助项目(064119527)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 相关作者：孙超李定国汪保灿宗春华陈颖伟更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金上海市高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Smad7和uPA基因共表达对大鼠肝星状细胞生物学特性的影响
- 2007年
- 目的观察Smad7和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因共表达对体外培养肝星状细胞(HSC)活化、分泌胶原特性的影响。方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离大鼠HSC,将AdSmad7/uPA或AdSmad7体外感染HSC后,Western blot-ting法检测细胞总蛋白中Smad7、抗人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α2链(ColⅠA2)的表达;ELISA法检测培养上清中uPA蛋白的分泌量;放射免疫法测定HSC培养上清中Ⅲ型前胶原(PⅢP)和层黏连蛋白(LN)的分泌量。结果AdSmad7/uPA感染体外培养HSC,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,转染效率>90%,Smad7和uPA蛋白的表达量明显高于AdGFP对照;AdSmad7/uPA或AdSmad7转染HSC均可使α-SMA、ColⅠA2、PⅢP和LN水平较AdGFP对照组显著下降(P<0.05)。与转染AdSmad7相比,转染AdSmad7/uPA后的HSC中ColⅠA2、PⅢP和LN表达降低更明显,分别较前者降低44.5%、30.4%和28.4%(P<0.05)。结论Smad7和uPA基因共表达可协同抑制体外培养的大鼠HSC分泌细胞外基质成分。
- 宗春华汪保灿陈颖伟孙超李定国
- 关键词：SMAD7尿激酶型纤溶酶原激活剂肝星状细胞
- 转基因骨髓源性肝干细胞移植对大鼠肝纤维化的影响
- 2007年
- 目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法采用淤胆型肝损伤大鼠模型和含5%淤胆血清的培养液筛选和扩增BDLSC,使用RT-PCR方法检测培养2周时肝干细胞标志表达。体外将携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染BDLSC并移植入CCl4诱导的肝纤维化大鼠体内,观察大鼠肝功能、胶原面积及病理组织学的变化。结果病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,并表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白。体内研究显示,与模型组和BDLSC组相比,BDLSC-uPA组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)及总胆红素(TBIL)水平均有不同程度的降低,凝血酶原时间(PT)时间缩短,白蛋白(ALB)水平升高,肝组织细胞外基质(ECM)水平及羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低;肝组织结缔组织增生程度减轻,假小叶形成不明显,胶原面积明显减少。结论uPA基因修饰BDLSC移植能有效抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,改善纤维化大鼠的肝功能,从而为转基因BDLSC移植治疗肝纤维化的临床应用提供理论依据和实践基础。
- 宗春华孙超汪保灿陈源文陈颖伟孙巧玲李定国
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活物骨髓源性肝干细胞肝纤维化
- 腺病毒介导人uPA感染大鼠间充质干细胞的体外研究
- 2009年
- 目的体外分选与鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并用腺病毒介导的人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)体外感染原代MSCs,观察病毒的转导效率及对MSCs增殖的影响。方法通过黏附培养分离纯化MSCs,并采用免疫组化DAB显色法鉴定;荧光显微镜检测uPA的转染效率;Western blotting检测uPA在MSCs中的表达;MTT法检测病毒对MSCs增殖的影响。结果分选培养的MSCs呈典型的间充质干细胞生长形态,细胞表面标记物CD29和CD90阳性,CD34和CD45阴性;随着病毒感染滴度增高,绿色荧光蛋白(GFP)的表达率亦呈增高趋势。当感染复数(MOI)=80且病毒转导72 h后,GFP阳性细胞数占细胞总数的比例达(94.0±1.5)%,可稳定表达7 d以上,且对MSCs的增殖无明显影响。结论MSCs是一种理想的基因过表达载体,稳定分泌uPA蛋白,可用于肝纤维化的研究。
- 胡俊杰孙超兰玲李定国
- 关键词：间充质干细胞尿激酶型纤溶酶原激活物肝纤维化
