国家林业局948项目(982070)
- 作品数：6 被引量：19H指数：4
- 相关作者：王志亮刘雨田吴晓东刘海生袁志栋更多>>
- 相关机构：农业部动物检疫所江西农业大学湖南科技大学更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金青岛市自然科学基金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛海绵状脑病几种免疫学检测方法的比较
- 本文对免疫组化、免疫转印(Western—blotting)和酶联免疫吸附测定(ELISA)三种牛海绵状脑病(BSE)免疫学检测方法进行了综合比较。通过比较发现免疫组化及免疫转印法与标准品真实情况的符合率均为100％,E...
- 王志亮邹艳丽R.Meyer宋翠平徐天刚郑东霞杜文金谢仲伦王树双M.Vandevelde
- 关键词：牛海绵状脑病免疫组织化学检测酶联免疫吸附测定朊病毒疯牛病
- 禽网状内皮组织增殖病病毒的实时荧光定量PCR检测被引量：4
- 2007年
- 基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。整个检测过程2 h内可以完成,病毒的最低检出浓度为10-7,在特异性试验中,REV有特异性的扩增曲线,而禽流感病毒和阴性对照一样,没有特异性扩增。对REV患鸡各器官组织进行了荧光PCR检测,各脏器病毒含量从高到低依次是肝、脾、腺胃、肾、肌胃,肝脏中的病毒含量最高,肌胃中的病毒含量最少,肺中没有检测到病毒。基于SYBR GreenI的荧光PCR方法检测REV快速、敏感、特异性好,为开展REV病原学检测提供了一种快速、无污染的方法。
- 赵丽青王树峰吴延功王志亮
- 关键词：PCR
- 单抗介导牛海绵状脑病免疫组化检测方法的建立及其应用被引量：8
- 2005年
- 中国鲁西黄牛重组 PrPc成熟蛋白免疫 PrPc基因敲除小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,经免疫组织化学试验筛选出单抗4C11可特异识别牛海绵状脑病标准阳性牛脑样品上PrPSc核心片段。以单抗4C11为核心试剂,建立了单抗介导牛海绵状脑病免疫组织化学检测方法,并已颁布成为中华人民共和国国家标准 GB/T19180-2003(牛海绵状脑病诊断技术)。已应用于中国牛海绵状脑病的持续监测,至 2002 年底共检测了全国各地 3344 份牛脑样品,结果全为阴性,且每批次所设的阳性对照样品检测结果均呈阳性,与 Roche 公司单抗 6H4 检测结果的符合率为 100%。
- 王志亮吴晓东刘雨田邹艳丽鲍恩东王长杰
- 关键词：单抗免疫组化检测牛海绵状脑病免疫组织化学检测阴性牛脑
- 水牛朊蛋白成熟片段基因的克隆与原核表达被引量：4
- 2006年
- 目的克隆、分析水牛朊蛋白(prionprotein,PrP)成熟片段基因,并获取纯化的表达产物。方法将应用PCR技术扩增的水牛成熟PrP的核酸序列克隆到表达载体pET-32a,并分析其序列;把阳性克隆质粒pET-32a-BPrP转化表达菌BL21(DE3),鉴定纯化的表达产物。结果水牛朊蛋白成熟片段核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其他牛科动物的成熟PrP核酸、氨基酸序列间的相似性分别在97.1%和97.2%以上,并且发现水牛成熟PrP有5个重复序列,编码的氨基酸序列其中有2个九肽和3个八肽重复序列。具有较高的表达水平的PrP融合蛋白被纯化后,用Western印迹实验证明该蛋白具有PrP抗原活性。结论首次报道了克隆、分析水牛朊蛋白成熟片段基因,发现水牛成熟PrP有5个重复序列,并获得了具PrP抗原活性的水牛成熟PrP融合蛋白。
- 袁志栋王志亮刘雨田吴晓东赵永刚刘海生
- 关键词：克隆原核表达
- 单抗介导牛海绵状脑病免疫组织化学检测方法的建立及其在中国牛海绵状脑病持续监测中的应用
- 牛海绵状脑病(Bovine Spongiform Encephalopathy,BSE)俗称疯牛病,是动物传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathy,TSE)的一种。...
- 王志亮吴晓东刘雨田邹艳丽王长杰
- 文献传递
- 免疫组织化学方法检测牛海绵状脑病(BSE)和羊痒病(Scrapie)
- 2004年
- 按照本实验室建立的牛海绵状脑病免疫组织化学方法 ,将自制单克隆抗体4C11与PK酶消化处理的牛海绵状脑病阳性切片和羊痒病阳性切片进行反应 ,发现单抗4C11不仅能与牛海绵状脑病阳性切片发生强烈的免疫反应 ,而且也能与羊痒病阳性切片发生强烈的免疫反应。从阳性切片和阴性切片的实验来看 ,单克隆抗体4C11没有非特异性染色反应 ,并且也没有背景染色。用瑞士进口单抗6H4进行的对照实验获得了同样的结果。因此 ,可以用自制的单克隆抗体4C11替代昂贵的进口单抗6H4来监测我国的牛海绵状脑病和羊痒病。
- 刘雨田吴晓东邹艳丽王志亮
- 关键词：免疫组织化学方法牛海绵状脑病BSE羊痒病SCRAPIE
- 两种PrP截短型多肽的神经毒性
- 2005年
- PrP106～126和PrP118～135分别对应于人PrPC序列中106～126残基和118～135残基,两个肽段在试验中具备PrPSc的部分病理特症,因此PrP106～126和PrP118～135就成为了研究PrPSc神经细胞毒性致病机制的合适的模型。
- 袁志栋王志亮刘雨田吴晓东刘海生
- 关键词：神经细胞毒性
- 水貂朊蛋白前体基因的原核表达被引量：4
- 2005年
- 构建了水貂朊蛋白前体基因的表达载体,所筛选出的阳性克隆质粒经转化表达菌BL21(DE3)后,收获表达菌,纯化鉴定表明获得了目的产物.
- 袁志栋王志亮刘雨田吴晓东刘海生
- 关键词：克隆原核表达
