国家自然科学基金(30700885)
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
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- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学更多>>
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- 蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。
- 骆世芳龙志敏高宝兵汪克建贺桂琼
- 关键词：NICASTRIN蛋白酶体抑制剂神经元
- γ-分泌酶组件蛋白Nicastrin的研究进展被引量：3
- 2010年
- Nicastrin(NCT)是高度糖基化的I型跨膜蛋白,是γ-分泌酶复合物的重要组件蛋白之一,广泛分布于人类或鼠的所有细胞类型。它不仅与γ-分泌酶的组装和成熟密切相关,其构象及表达变化对γ-分泌酶活性和阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中β淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)的产生及降解也起重要调节作用。本文就国际上近几年在NCT的结构、合成、分布、降解及功能等方面的研究进展作一综述。
- 龙志敏贺桂琼
- 关键词：NICASTRINΓ-分泌酶Β淀粉样蛋白阿尔茨海默病
- 早老素增强子-2在APP／PS1双转基因小鼠脑内的分布及表达被引量：1
- 2012年
- 目的研究γ-分泌酶组件早老素增强子-2(presenilin enhancer-2,Pen-2)在APP/PS1双转基因小鼠脑内的表达及分布,以进一步明确Pen-2与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的关系。方法对APP/PS1双转基因小鼠交配后产下的子代进行基因分型,用免疫组化方法检测Pen-2和老年斑在APP/PS1双转基因AD模型小鼠和同窝野生型正常小鼠脑内的分布和表达情况。结果 Pen-2广泛分布于APP/PS1双转基因小鼠脑内各区域,包括大脑皮质、海马、基底核、小脑、嗅脑、脑室脉络丛等,而老年斑则选择性地出现在大脑皮质、海马、嗅脑等区域,并且Pen-2的分布范围广于老年斑的分布。AD模型小鼠大脑新皮质内Pen-2阳性神经元的着色程度(2.09±0.33)显著高于正常小鼠(1.29±0.31,P<0.05),且AD模型小鼠大脑新皮质内Pen-2免疫阳性物质主要分布于细胞膜和细胞质,而正常小鼠大脑新皮质内的Pen-2阳性神经元仅细胞膜周围染色较深,而细胞质染色极浅甚至不着色。结论 Pen-2在AD模型小鼠和正常小鼠脑内的表达存在差异,这种差异可能与老年斑的形成和AD的发生相关。
- 楚亚楠宋冲贺桂琼刘刚王凌晞周泽芬
- 关键词：阿尔茨海默病
- 蛋白酶体抑制剂处理神经细胞系后Nicastrin的表达变化及其与Aβ的关系被引量：1
- 2011年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内Nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系。方法运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平。结果正常情况下NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,极少量分布于溶酶体,蛋白酶体抑制剂Lac-tacystin处理后NCT水平升高(P<0.001),且细胞内增多的NCT也主要聚集在内质网和高尔基复合体;NCT与泛素在细胞内共存;NCT的蛋白降解不受PS的影响;NCT降解受阻可引起细胞内γ-分泌酶的底物C99、C83显著减少,而γ-分泌酶的产物Aβ40、Aβ42的生成显著增多(P<0.01)。结论 NCT的降解可通过泛素-蛋白酶体途径实现,蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT水平升高,且增多的NCT可促进APP的代谢及Aβ的生成。
- 龙志敏赵蕾骆世芳汪克建贺桂琼
- 关键词：NICASTRIN蛋白酶体抑制剂泛素化修饰Γ-分泌酶AΒ
- γ-分泌酶组件NCT在痴呆小鼠中枢神经系统的分布及表达被引量：4
- 2011年
- 目的研究γ-分泌酶组件蛋白单过性跨膜蛋白(NCT)在APP/PS1双重转基因痴呆小鼠中枢神经系统(CNS)中的分布与表达及与阿尔茨海默病(AD)的关系。方法对APP/PS1双重转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型,分别用免疫组化、免疫荧光双标及激光共聚焦等技术,检测NCT在APP/PS1双重转基因痴呆小鼠及同窝野生型小鼠CNS内的分布及表达。结果 NCT广泛分布于成年AD小鼠CNS各区域,包括大脑新皮质、海马、嗅脑、丘脑、纹状体、小脑、脑干和脊髓等;而神经元外Aβ的沉积选择性分布于CNS的大脑皮质和海马等区域;大脑皮质及海马内的NCT阳性神经元数量要多于Aβ阳性神经元,且神经元内的Aβ与NCT出现了共存;同时,大脑皮质和海马内的NCT与PS1分布趋势高度一致,且在神经元内出现了共存。痴呆型与同窝野生型新生小鼠大脑皮质内NCT阳性神经元排列致密;随着小鼠的发育,脑组织单位面积内NCT阳性神经元数量逐渐减少;但痴呆小鼠脑内NCT阳性神经元的细胞膜和细胞质均浓染;而同窝野生型小鼠脑内的NCT阳性神经元仅细胞膜周围染色较深,而胞质染色极浅甚至不着色。结论 NCT在痴呆小鼠和正常野生型小鼠脑内的分布及表达出现差异,可能与Aβ的生成和AD的发生相关。
- 龙志敏赵蕾贺桂琼宋冲楚亚楠
- 关键词：Γ-分泌酶AΒ中枢神经系统
- 常压高氧处理对APP／PS1转基因小鼠空间学习记忆能力的影响被引量：8
- 2009年
- 目的探讨常压高氧（NH）处理是否改善APP／PS1双重转基因AD模型小鼠的空间学习和记忆能力。方法对APP／PS1双重转基因AD模型种鼠交配后产下的子代小鼠进行基因分型，待子代达10周时，取双重转基因小鼠20只，随机分成A、B2组（每组10只）。A组小鼠给予常压高氧（40％O2，60％空气）处理，8h／d，持续8周；B组常规喂养，作为对照。高氧处理后进行Morris水迷宫实验，分别检测各组小鼠在可视平台、隐蔽平台及空间探索实验中找到平台的时间及搜索的平均路程；行为学实验结束后，采用ELISA定量检测小鼠脑内Aβ水平。结果行为学实验结果：（1）可视平台下，2组小鼠找到平台的时间及搜索的平均路程差异无显著性（P〉0．05）；（2）隐蔽平台下，高氧处理组小鼠找到平台的时间及搜索的平均路程较对照组明显缩短（P〈0．01）；（3）空间探索实验中，高氧处理组小鼠经过平台的次数[（6．31±2．55）次]显著高于对照组[（3．13±1．59）次]（P〈0．01）。ELISA结果显示，高氧处理组小鼠大脑皮质及海马内Aβ40[（783．64±97．21）pg／ml和Aβ42（175．30±17．09）pg／ml]水平显著低于对照组[Aβ40（1251．59±42．29）pg／ml、Aβ42（286．83±12．96）pg／ml]（P〈0．01）。结论常压高氧处理能显著改善AD模型小鼠空间学习记忆障碍；常压高氧可能通过减少Aβ生成或／和促进血管内皮细胞清除Aβ而发挥作用。
- 高宝兵龙志敏贺桂琼孙善全
- 关键词：阿尔茨海默病学习记忆Β-淀粉样蛋白
- 溶酶体酶抑制剂对神经细胞内Nicastrin表达水平的影响
- 2012年
- 目的探讨溶酶体酶抑制剂对阿尔茨海默病(AD)相关蛋白Nicastrin(NCT)表达的影响,以期明确NCT的蛋白降解是否与溶酶体途径有关。方法在用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用溶酶体酶抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western印迹、亚细胞器的分级分离、免疫荧光双标等技术,检测溶酶体酶抑制剂处理后神经细胞内NCT的表达变化。结果亚细胞器分级分离实验显示,正常情况下神经细胞内的NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,少量NCT分布于溶酶体。Western印迹结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性成熟NCT(mNCT)的表达显著增强,且溶酶体酶抑制剂氯喹对mNCT蛋白表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性,但溶酶体抑制剂对非成熟NCT(imNCT)的表达无影响;免疫荧光双标结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,细胞内NCT的表达增强,且增多的NCT主要聚集在溶酶体内。结论神经细胞内mNCT的降解与溶酶体途径有关。
- 彭雪华龙志敏骆世芳贺桂琼
- 关键词：NICASTRIN神经细胞蛋白降解
- 前咽缺陷蛋白-1在APP／PS1转基因阿尔茨海默病小鼠模型中枢神经系统的分布及表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究γ-分泌酶组件蛋白APH-1（anterior pharynx defective 1，APH-1）在成年APP／PS1双转基因痴呆小鼠中枢神经系统（central nervous system，cNs）中的分布及表达，以及在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）模型鼠和野生型小鼠脑中的表达差异，以进一步明确APH1与AD的关系。方法对APP／PS1双转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型，用免疫组化方法检测APH1在成年APP／PS1双转基因痴呆模型小鼠CNS内的分布及表达，以及比较APH-1在出生后1d、7d、21d、120d的痴呆小鼠及同窝野生型小鼠脑内的表达和分布情况。结果APH-1广泛分布于成年痴呆小鼠CNS的各区域，包括大脑皮质、海马、嗅脑、丘脑、纹状体、尾状核、中缝大核、小脑、脑干和脊髓等；出生1dAD模型鼠与同窝野生型小鼠大脑皮质内APH-1均有高水平表达，而出生7d、2id表达水平较低，且成年小鼠脑中其表达量有所回升；各时间点痴呆小鼠脑内APH-1免疫阳性反应都比同窝野生型小鼠显著增强（P〈0．05）。结论APH1在痴呆小鼠的CNS中广泛分布，但不同脑区分布和表达存在差异；且痴呆小鼠和正常野生型小鼠脑内APH-1分布和表达有区别，这些差异可能与AD的发生相关。
- 赵蕾龙志敏贺桂琼楚亚楠宋冲
- 关键词：中枢神经系统阿尔茨海默病
- 常压高氧对淀粉样蛋白前体／早老素1双重转基因小鼠脑内老年斑及β-淀粉样蛋白的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨常压高氧（40％O2，60％空气）处理淀粉样蛋白前体／早老素1（APP／PSl）双重转基因小鼠是否发挥神经保护作用。方法对APP／PSl双重转基因阿尔茨海默病（AD）模型种鼠交配后产下的子代小鼠进行基因分型，待子代达10周龄时，取双重转基因小鼠40只，随机分成A、B、C、D4组，每组10只，A、B2组小鼠喂养于常压高氧中8ICd，A组持续4周，B组持续8周；C、D组喂养于空气中4或8周，分别作为A、B组的对照。高氧处理后采用免疫组织化学、Thioflavin S染色检测小鼠脑组织形态学的变化，Western blot检测APP代谢过程中相关蛋白的表达变化，ELISA定量检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白（Aβ）水平的变化。结果免疫组织化学和Thioflavin S染色均显示，与对照组相比，高氧处理组小鼠皮质和海马内老年斑数量明显减少，B组比A组减少更显著。高氧处理组小鼠脑内C99、C83，水平显著高于对照组，Aβ水平明显低于对照组，但各组小鼠脑内全长APP及β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEl）蛋白水平无明显改变。ELISA结果提示，B组小鼠海马和皮质内Aβ40[（783．6±97．2）pg／ml]和A％[（175．3±17．1）pg／ml]含量明显低于对照组A‰[（1251．6±42．3）pg／ml，t：9．36，P〈0．01]和Aβ42[（286．8±13．0）pg／ml，t=13．7，P〈0．01]的含量。结论常压高氧处理能显著减少AD模型小鼠脑内Aβ的产生、沉积及老年斑的形成；这种改变可能通过减少Aβ产生或加速Aβ清除实现。
- 高宝兵龙志敏贺桂琼孙善全
- 关键词：淀粉样Β蛋白早老素1小鼠转基因
