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乳牙急性根尖周脓肿细菌的DGGE分析被引量：3: 2009年; 目的用PCR-DGGE方法分析乳牙急性根尖周脓肿细菌,以期进一步阐明乳牙急性根尖周脓肿细菌病因学特点。方法采取乳牙急性根尖周脓肿脓液,提取细菌总DNA,采用通用引物对细菌16S rRNA基因的V2-V3区进行扩增,PCR产物进行变性梯度凝胶电泳,切取电泳的条带进行DNA回收,PCR再次扩增后进行克隆测序,鉴定细菌,分析细菌组成。结果乳牙急性根尖周脓肿优势菌的检出从高到低依次是普雷沃菌90.9%,梭杆菌81.8%,消化链球菌63.6%,卟啉单胞菌45.5%,链球菌45.5%,真杆菌45.5%,乳酸杆菌27.3%,弯曲菌27.3%,密螺旋体27.3%,布雷德菌27.3%。结论乳牙急性根尖周脓肿细菌存在个体差异,某些特定细菌以较高频率存在。细菌16S rRNA基因PCR-DGGE,切胶,克隆测序方法除检测出培养法检出的细菌外,还检出难培养的和未预料到的细菌。; 杨秋波樊鲁娜时清; 关键词：细菌变性梯度凝胶电泳

多肽内切酶鉴定牙龈卟啉单胞菌血凝素2结合位点被引量：5: 2010年; 目的利用多肽内切酶分析牙龈卟啉单胞菌凝血素2(Porphyromonas gingivalishemagglutinin-2,PgHA-2)与氯化血红素结合位点的氨基酸序列。方法Endoproteinase Lys-C多肽内切酶水解获得与氯化血红素结合的功能性的多肽片段,质谱技术鉴定多肽片段的氨基酸序列。结果质谱鉴定与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为YAVNDGFPGDHYAVMISK。结论进一步明确了HA-2与氯化血红素结合位点的氨基酸序列,为牙周病的预防和治疗方法的改进奠定基础。; 余飞燕杨秋波杨圣辉; 关键词：牙龈卟啉单胞菌血凝素氨基酸序列分析

牙龈卟啉单胞菌血凝素2基因缺陷型突变株的构建被引量：1: 2009年; 目的构建牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）血凝素2（hemagglutinin—adhesin2，HA-2）基因缺陷型突变株，为研究HA-2基因功能奠定基础。方法PCR扩增PgHA-2基因两翼片段HAu、HAl，将抗性基因ermF—ermAM连接到两者之间构建打靶载体HA—ermF—ermAM。将HA—ermF—ermAM电转化PgATCC33277，基因同源重组整合进入PgATCC33277染色体，用选择性培养基筛选获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。进行PgATCC33277HA．2基因缺陷型突变株与其野生株凝血功能试验，比较二者的凝血功能差异。结果PCR、酶切和测序鉴定结果表明，打靶载体HA—ermF—ermAM成功构建。经PCR鉴定，打靶载体HA—ermF—ermAM通过同源重组整合进入PgATCC33277染色体，成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。凝血实验结果表明，PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株与野生株相比凝血能力明显减弱。结论成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株，为进一步研究HA-2的生物学性质奠定了基础。; 林梅杨秋波杨圣辉; 关键词：紫单胞菌血凝素类基因打靶血液凝固

牙龈卟啉单胞菌血凝素2与氯化血红素结合多肽的序列分析被引量：5: 2009年; 目的明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2（Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2，PgHA-2）与氯化血红素结合的多肽片段氨基酸序列，为牙周病保护性抗体的制备奠定基础。方法提取Pg ATCC33277基因组DNA，原核克隆重组表达HA-2，质粒测序，蛋白质印迹法及质谱分析法鉴定重组HA-2（recombinant HA-2，rHA-2）。利用氯化血红素琼脂糖珠验证rHA-2的氯化血红素结合功能。利用多肽内切酶水解与氯化血红素结合的rHA-2，获得与氯化血红素结合的多肽片段，质谱分析多肽片段的氨基酸序列。结果PCR鉴定、质粒测序、蛋白质印迹法及质谱分析结果均证实原核表达蛋白为Pg的HA-2。氯化血红素结合实验明确了rHA-2具有与氯化血红素结合的功能。质谱分析与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为DHYAVMISKTGTNAG。结论成功基因克隆重组与原核表达了具有与氯化血红素结合功能的PgHA-2，明确了与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列，为针对Pg的牙周病免疫预防和治疗药物的开发奠定了基础。; 杨秋波余飞燕杨圣辉; 关键词：紫单胞菌血凝素类

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