陕西省科学技术研究发展计划项目(2007K09-06) 作品数:5 被引量:6 H指数:1 相关作者: 王岭 吕勇刚 王廷 凌瑞 史明 更多>> 相关机构: 第四军医大学西京医院 西京医院 中国医学科学院北京协和医学院 更多>> 发文基金: 陕西省科学技术研究发展计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
人胰腺核糖核酸酶的基因克隆、蛋白表达与活性测定 2010年 目的:构建人胰腺核糖核酸酶(hpRNase)原核表达载体、获得纯化hpRNase蛋白,为构建乳腺癌单链免疫毒素奠定基础。方法:针对编码hpRNase成熟蛋白基因的cDNA序列设计相应的引物,通过反转录PCR技术,从一例胰腺切除患者的组织标本中,扩增出编码hpRNase成熟蛋白的cDNA序列,亚克隆入表达载体pPROEX-HTb;在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导融合蛋白表达,并用镍离子交换树脂进行蛋白纯化;通过RNA水解实验验证hpRNase重组蛋白的活性。结果:经PCR、酶切、测序等方法鉴定,hpRNase cDNA正确克隆入pPROEX-HTb表达载体;IPTG可诱导载体表达分子量约20 kD的蛋白产物,经Western blot验证可与抗hpRNase抗体发生特异性反应;经镍离子交换树脂纯化后的重组蛋白可有效降解RNA。结论:成功构建hpRNase原核表达载体,并获得有RNA降解活性的hpRNase重组蛋白,为进一步构建乳腺癌单链免疫毒素奠定了基础。 吕勇刚 史明 王廷 李南林 允军 凌瑞 王岭关键词:PCR CDNA 免疫毒素 乳腺癌抗hEGF单链抗体的筛选和活性鉴定 2010年 目的:从噬菌体单链抗体库筛选特异性的抗人表皮生长因子(hEGF)抗体并进行活性鉴定。方法:以hEGF为抗原,对所建抗体库进行3轮“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选。将筛选后的单链抗体(scFv)通过ELISA和基因测序分析等方法进行鉴定;利用MTT法在体外培养的人乳腺癌细胞系MCF-7/Her-2^+中检测抗体的生物结合活性。结果:在亲和筛选过程中,乳腺癌噬菌体scFv得到富集,收获率逐轮得到提高,3轮筛选之后,得到了3株高亲和力的抗hEGF抗体;ELISA检测筛选出的3种有较高活性;测序结果与人hEGF抗体基因序列高度一致;该抗体对MCF-7/Her2^+乳腺癌细胞系有特异性杀伤作用。结论:成功地筛选到特异性抗hEGF的scFv抗体,为今后的研究和应用提供依据。 吕勇刚 史明 常鹏 王廷 李南林 赵爱志 凌瑞 王岭关键词:噬菌体抗体库 乳腺肿瘤 单链抗体 基于loxP—ere系统的细胞内重组技术 2012年 噬菌体呈现技术近年来得到小断改进和完善。基于loxP—CYe系统的细胞内重组技术是最为重要的改进。从双载体系统到单载体系统,从大样本抽样测序到肉眼直观判断,它使大库容量天然抗体库的构建变得简单易行,并有利于高亲和力抗体的获取。现对其改进和完善过程进行综述。 吕勇刚(综述) 朱海军(综述) 王岭(审校)关键词:抗体 噬菌体 塞来昔布对局部晚期乳腺癌新辅助化疗的增效减毒作用 2008年 目的观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合化疗用于局部晚期乳腺癌新辅助化疗的近期疗效及患者不良反应。方法59例ⅡB-ⅢB期乳腺癌随机分为对照组(29例)与实验组(30例),对照组方案:表柔比星75mg/m^2,第1天,多西紫杉醇75mg/m^2,第1天,静脉注射。实验组方案:化疗方案同对照组,给予塞来昔布400mg,口服,2次/d,第1天至第21天。3周为1个周期,2个周期新辅助化疗后评价临床疗效及不良反应。结果对照组总有效率(RR)为72.41%(21/29),其中临床完全缓解(cCR)2例,部分缓解(PR)19例,稳定(SD)8例;实验组总有效率为80.00%(24/30).其中cCR3例,PR21例,SD6例;两组均无病理完全缓解(pCR)及进展(PD)者,RR差异无统计学意义(x^2=0.469,P=0.493)。对照组和实验组肿瘤最大直径化疗前差异无统计学意义(t=0.569,P=0.570),化疗后差异有统计学意义(t=7.300,P=0.000)。实验组关节肌肉疼痛发生率低于对照组,且有统计学意义(P=0.013)。两组其余不良反应相似(P〉0.05)。结论多西紫杉醇+表柔比星方案用于局部晚期乳腺癌新辅助化疗效果良好,患者不良反应可以耐受;塞来昔布能增强化疗疗效,降低关节肌肉疼痛发生率。 康华峰 王西京 刘小旭 代志军 薛锋杰 薛兴欢关键词:前列腺素内过氧化物合酶类 抗肿瘤联合化疗方案 钼靶联合B超定位对不可触及乳腺钙化灶切除的临床意义 被引量:6 2011年 目的:探讨钼靶联合B超定位在切除不可触及乳腺钙化灶(nonpalpable breast calcification,NPBC)中的价值。方法:对钼靶发现钙化灶,临床不可触及包块的28例患者资料进行分析,钼靶联合B超定位,切除病灶送钼靶检测,必要时行补充切除。结果:28例中26例(93%)为一次切除,2例(7%)为补充切除,切除率为100%。结论:术前钼靶联合超声体表定位有助于NPBC切除,也有助于乳腺癌的早期治疗。 吕勇刚 王廷 贠军 姚青 陈美芬 凌瑞 王岭关键词:乳腺癌 钼靶 乳腺钙化灶