国家自然科学基金(20877028)
- 作品数：13 被引量：83H指数：5
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- 相关机构：华南理工大学保定职业技术学院广州迪澳生物科技有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校科技创新工程重大项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>
- 三种基因分型技术对一起食物中毒事件的分析比较
- 2009年
- 分别应用ERIC-PCR、PFGE和Sau-PCR方法对一起食物中毒事件中分离自患者和食物的5株福氏志贺氏菌进行溯源分析。结果3方法显示5株菌的指纹图谱均一致,证明患者是由于食用了被志贺菌污染的食物而致病。其中ERIC-PCR操作最简便,但重复性较差;PFGE是"金标准",但设备昂贵,技术要求高,且不能高通量分析;新发展的Sau-PCR不仅易操作,而且结果稳定,便于在流行病学研究中的推广应用。
- 王秋艳闫鹤石磊
- 关键词：PFGE
- LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌被引量：11
- 2010年
- 据WHO最新报告显示,乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法,但检测周期长达1周左右,而且操作复杂,难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象,建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16s RNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域,并在63℃进行恒温扩增。实验结果表明,使用该方法能够在5h之内检测出复原乳样品中101CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法,克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点,不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测,而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。
- 鲁曦师宝忠王彬石磊
- 关键词：阪崎肠杆菌
- 健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛1的鉴定及特性分析
- 2010年
- 目的检测健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛(SGI1)的分布情况及特性,分析其与细菌耐药性的关系。方法采用PCR方法对5株第一类整合子阳性的沙门菌检测SGI1,分别检测其左侧、右侧部分和其中间的部分基因,以及环状形式和切除状态,通过接合转移及自然转化检测其可移动性。结果一株鼠伤寒沙门菌携带SGI1,位于thdF和int2之间,且其多重耐药区含aadA2,floR,tetG,blaPSE-1基因,存在环状形式及切除状态,且可通过自然转化方式转移至其他菌株。结论 SGI1可通过自然转化方式转移到其他菌株,介导多重耐药的传播。
- 赵红波赵建宏孙素菊徐保红闫鹤赵红丽李继红时东彦刘晓雷石磊
- 关键词：鼠伤寒沙门菌抗生素耐药
- EMA-LAMP方法快速检测死/活的食源性沙门氏菌被引量：20
- 2009年
- 建立应用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)与环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)相结合检测沙门氏死/活菌的方法。该方法具有快速、方便和灵敏度高等优点,以SYBRGreenI为显色剂、恒温65℃、反应1h便可得出检测结果。该检测系统中,得到241bp的目标片段和类似于梯子状的系列条带。该方法的检测限为10-10gDNA/管,是EMA-PCR方法的1%。本方法实用性强,具有普遍的应用意义。
- 鲁玉侠郭祀远石磊李琳
- 关键词：沙门氏菌
- 环介导恒温扩增法快速检测海产品中的副溶血弧菌被引量：5
- 2011年
- 副溶血弧菌广泛分布于海水或海产品中,人类摄入或接触污染的水源和食物易引起感染。近年来,有关致病性弧菌引起腹泻的报道逐渐增多,但GB标准的细菌学诊断方法检测周期长达1周左右,而且操作较为复杂,难以满足控制疾病暴发和传播的需要,就这一现状,建立了一套不仅快速、准确,而且操作简便、不依赖昂贵仪器的检测方法,应用于海产品中副溶血弧菌快速检测。采用环介导恒温扩增方法(LAMP),针对副溶血弧菌的gyrB基因设计特异引物,进行恒温扩增。使用该方法最低检出限达到101CFU/mL,灵敏度可以达到0.1pg副溶血弧菌基因组DNA,为海产品中副溶血弧菌的检测提供了一个新的辅助方法。
- 彭帅石磊
- 关键词：副溶血弧菌
- 河北省2005年～2007年生肉源单增李斯特菌的血清型及脉冲场凝胶电泳分析被引量：3
- 2010年
- 对分离自生畜肉、生禽肉样品中的53株单核细胞增生李斯特菌的血清型及基因型进行了研究。53株单核细胞增生李斯特菌分属5个血清型,以1/2a,1/2b和1/2c血清型为主,分别占54.72%、20.75%和18.87%。以脉冲场凝胶电泳方法把53株单核细胞增生李斯特菌分成17个基因型(A-Q),其中Q型为主要基因型,占总数的22.64%。对2种分型方法进行综合分析能更好地了解单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性及流行病学特征。
- 张耀祺王彬师宝忠闫鹤石磊
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌血清分型脉冲场凝胶电泳
- 单核细胞增生李斯特菌血清型、耐药性研究被引量：11
- 2010年
- 目的 了解河北省2005～2007年91株食源性致病菌单核细胞增生李斯特血清型、耐药性特点。方法血清凝集试验确定实验菌株的血清型；微量肉汤稀释法检测实验菌株对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、糖肽类、磺胺类等抗生素的药物敏感性。结果91株单核细胞增生李斯特菌分属5个血清型（1／2a，1／2b，1／2c，4b和3a1，主要血清型为1／2a型，占49．5％，分离N8株致病力较强的4b血清型。耐药性分析表明单核细胞增生李斯特菌对四环素耐受最为严重，耐药率为15．4％（14／91），且4．4％（4／91）菌株对强力霉素交叉耐药；少量菌株对临床治疗李斯特菌病抗生素氨苄西林、庆大霉素、复方磺胺甲噫唑、万古霉素、红霉素出现耐药；有2株菌耐5种以上抗生素；所有菌株对氨苄西林／舒巴坦、亚胺培南、莫西沙星、左氧氟沙星敏感。结论存在具有较强的致病性1，2a，1／2b和4b血清型菌株，及耐药株及多重耐药株出现，说明存在潜在的单核细胞增生李斯特菌引起食品安全问题。
- 闫鹤王彬师宝忠孟赫诚石磊
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌血清型耐药性
- 原位荧光LAMP技术检测食源性沙门氏菌被引量：18
- 2009年
- 以沙门氏杆菌为研究对象,探讨了将原位荧光LAMP技术应用于检测沙门氏菌所需要的具体实验方法与数据,并成功将原位荧光LAMP技术应用于检测人工污染的食品中的沙门氏菌。实验选取invA基因作为靶序列设计了2对引物。结果证明,与传统沙门氏菌检测方法和PCR方法相比,原位荧光LAMP无需破碎细胞提DNA,反应方便易行,耗时少;反应条件恒定温和,能够减少细胞损伤;单基因检测水平证明反应的高灵敏度;良好的基因定位以及清晰的背景条件使反应结果更加直观,易于观察。
- 叶宇鑫李琳山崎伸二石磊
- 关键词：沙门氏菌
- Sau-PCR和AILP技术对一起副溶血弧菌引起食物中毒的分型研究被引量：4
- 2009年
- 运用Sau-PCR和扩增基因间片断多态性(AILP)两种基因分型技术对副溶血弧菌进行分析。对广州一起由副溶血弧菌引起的食物中毒进行常规鉴定后,应用Sau-PCR和AILP技术对分离到的3株菌株进行分型,结果1株人源分离菌与2株食源分离菌的Sau-PCR型别和AILP型别均相同。表明此次食物中毒爆发为同一株副溶血弧菌引起。Sau-PCR和AILP技术作为两种新的分子分型技术,具有快速、稳定、准确、高分辨力和低成本的优点,可以作为食物中毒中对细菌进行鉴定的分析技术,为流行病学调查和溯源提供可靠依据。
- 毕水莲李琳张学武石磊
- 关键词：副溶血弧菌
- 食源性单核细胞增生李斯特菌四环素、红霉素耐药基因研究被引量：6
- 2010年
- 研究了食源性单核细胞增生李斯特菌四环素、红霉素耐药基因的分布状况及和耐药表型的关系。采用微量肉汤稀释法对2005~2007年河北省疾病预防控制中心分离到的食源性单核细胞增生李斯特菌株进行四环素、红霉素药敏实验;应用PCR方法对实验菌株进行四环素耐药基因tet（M）、tet（S）、tet（L）、tet（K）、tet（B）、及与tet（M）基因关系密切的转座子Tn916、红霉素核糖体甲基化酶基因ermB、ermC、及与ermB基因关系密切的转座子Tn917检测,对阳性样本序列进行鉴定分析;应用血清学分型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、及脂肪酸聚类分析方法分析四环素耐药菌株之间的相关性,确定基因型和多态性。结果表明,91株单核细胞增生李斯特菌四环素敏感77株、耐药14株;红霉素敏感89株、耐药2株,其中包含1株菌同时交叉耐药四环素和红霉素;14株四环素耐药株中含tet（M）基因的13株,在13株tet（M）基因阳性菌中,tet（M）位于Tn916转座子上的9株;1株同时交叉耐药四环素、红霉素菌同时携带tet（S）、ermB基因;ermC基因、转座子Tn917均为阴性;四环素、红霉素敏感株中未检测到上述任何耐药基因。14株四环素耐药菌株血清型分布以1/2a型为主（n=12）,部分菌株PFGE、脂肪酸分型完全一致。食源性单核细胞增生李斯特菌获得tet（M）基因是耐四环素的主要机制之一,具有水平传播耐药基因能力的接合型转座子Tn916与该菌四环素耐药播散有直接关系;ermB基因介导的核糖体靶位点改变存在食源性单核细胞增生李斯特菌红霉素耐药株中;PFGE基因型结合脂肪酸聚类分析能够用来分析菌株之间的相关性。
- 闫鹤陈妙瑞石磊
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌
