福建省自然科学基金(2011J01129)
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
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- 人肝细胞生长因子基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞系的构建被引量：2
- 2012年
- 目的构建人肝细胞生长因子（hHGF）基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞系（MSCs）。方法采用脂质体法将hHGF基因慢病毒载体质粒（1enti—hHGF）转染至293FT细胞，收集病毒上清液感染大鼠MSCs细胞，经过G418筛选得到稳定分泌hHGF的MSCs细胞株（hHGF-MSCs细胞）。以转染空载体细胞（eGFP-MSCs）、未转染慢病毒载体的MSCs细胞作为对照。采用免疫印迹法检测hHGF的表达。hHGF—MSCs细胞分别加入成骨诱导剂或成脂诱导剂培养，分别采用茜素红染色和油红O染色鉴定成骨细胞和脂肪细胞表型。结果与未转染慢病毒载体的MSCs细胞和eGFP-MSCs细胞比较，hH—GF—MSCs细胞hHGF表达上调（P〈0．01）。hHGF-MSCs细胞体外诱导培养后具有明显的成骨和成脂表型，可向成骨细胞和脂肪细胞分化。结论成功构建hHGF基因修饰大鼠MSCs。
- 林群雷立华林财珠林献忠林健清郑辉哲蔡宏达杨庆高友光
- 关键词：肝细胞生长因子干细胞骨髓
- 肝细胞生长因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对大鼠肺内血管生成的影响被引量：2
- 2012年
- 目的评价人肝细胞生长因子（hHGF）基因修饰骨髓间质干细胞（MSCs）移植对大鼠肺内血管生成的影响。方法F344大鼠20只，体重200～250g，2月龄，采用随机数字表法，将其随机分为2组（n=10），HGF组经颈外静脉注射5×105个HGF基因修饰MSCs，对照组（C组）给予等容量1ml DMEM培养液。移植后28d，测定平均肺动脉压，然后取肺组织，测定hHGF含量，采用免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原表达，以反映肺小血管内皮增生程度，采用免疫组织化学法检测Ⅷ因子表达，以反映肺小血管密度，光学显微镜下观察肺血管病理学结果。结果与C组比较，HGF组平均肺动脉压差异无统计学意义（P〉0．05），肺组织hHGF含量、小血管内皮增生程度和小血管密度升高（P〈0．01）。HGF组肺小血管结构未见异常。结论hHGF基因修饰的MSCs移植可促进大鼠肺内血管生成。
- 雷立华林群林财珠郑辉哲林献忠梁富球蔡宏达杨庆高友光
- 关键词：肝细胞生长因子间质干细胞移植新生血管化生理性
- 内膜新生性肺血管重构肺动脉高压大鼠模型的建立及评价被引量：4
- 2012年
- 背景:目前尚缺乏简单易行、实用、操作性强的血管内膜新生性肺血管重构肺动脉高压动物模型。目的:建立内膜新生性肺血管重构大鼠肺动脉高压模型。方法:40只雄性SD大鼠随机分为2组:M+P组(n=26)大鼠行左肺切除,2周后皮下注射野百合碱60mg/kg;对照组(n=14)大鼠仅行假手术处理。于术后5周检测肺动脉压、右心室/(左心室+室间隔)质量的比值,同时观察右肺动脉病理形态学改变。以光镜下每1mm2面积内Ⅷ因子标记阳性的直径小于100μm的肺血管数评价肺内微血管密度。结果与结论:M+P组大鼠存活率85%(22/26),对照组存活率为100%(14/14)。与对照组相比,M+P组大鼠肺动脉压力和右心室/(左心室+室间隔)质量的比值明显增高(P<0.01);与对照组相比,M+P组大鼠肺内直径为50-100μm和100-150μm的肌型小动脉中膜相对厚度均显著增加(P<0.01),肺内微血管密度显著减少(P<0.01)。光镜显示M+P组大鼠注射野百合碱后5周肌型肺小动脉中膜明显增厚,肺腺泡内小动脉明显肌化、内膜增厚。对照组大鼠肺小动脉未见血管结构重建。实验成功建立了内膜新生性肺血管重构大鼠肺动脉高压模型,操作相时简便,动物死亡率较低。
- 梁富球林群林财珠雷立华杨庆林献忠蔡宏达
- 关键词：野百合碱肺切除术肺动脉肺动脉高压血管构建
- 携带EGFP基因的人肝细胞生长因子基因慢病毒表达载体的构建
- 2014年
- 目的 构建携带增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的人肝细胞生长因子（HGF）基因慢病毒表达载体.方法 以pUC-SRα/HGF载体为模板,利用PCR体系扩增获得两端带有attB重组位点的HGF基因编码序列,并通过BP反应将其克隆至入门载体pDONRTM221的多克隆位点内以构建入门载体pDown-HGF.通过LR反应将pDown-HGF、pUp-EF1α、pTail-IRES/EGFP与目的载体pLV.Des3d.P/neo连接,得到慢病毒表达载体pLVneo/EF1 α-HGF-IRES-EGFP.并进行PCR鉴定和DNA测序.随后,通过脂质体将该重组载体与慢病毒包装系统共转染293FT细胞,空斑法测定病毒滴度.结果 PCR及DNA测序结果证实pLVneo/EF1α-HGF-IRES-EGFP中HGF基因目的片段插入位置和序列正确.转染pLVneo/EF1 α-HGF-IRES-EGFP后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光.包装的慢病毒液滴度为7.9×107 TU/ml.结论 成功构建了携带EGFP基因的人HGF基因慢病毒表达载体.
- 雷立华林群郑辉哲林财珠林健清林献忠蔡宏达杨庆高友光
- 关键词：绿色荧光蛋白质类慢病毒属
- hHGF基因修饰对MSCs移植改善重度肺动脉高压大鼠肺微血管稀薄作用的影响
- 2012年
- 目的评价人肝细胞生长因子（hHGF）基因修饰对骨髓间质干细胞（MSCs）移植改善重度肺动脉高压大鼠肺微血管稀薄作用的影响。方法将原代培养的F344大鼠MSCs转导携带HGF基因的慢病毒载体和空载体，以获得HGF—MSCs和EGFP—MSCs。7周龄近交系雄性F344大鼠，体重180～250g，采用野百合碱复合单肺切除法建立重度肺动脉高压大鼠模型。取重度肺动脉高压大鼠66只，采用随机数字表法，将其随机分为3组（n=22）：对照组（C组）、空载体慢病毒转导的MSCs（EGFP-MSCs）组（E组）和hHGF转导的MSCs（hHGF—MSCs）组（H组）。c组经颈外静脉注射DMEM1ml，E组注射含5×10^5个EGFP．MSCs的DMEM1ml和H组注射含5×10^5个hHGF．MSCs的DMEM1ml。注射野百合碱后45d内进行生存分析；颈外静脉注射后2周，记录平均肺动脉压（MPAP），计算右心室肥厚指数，观察肺组织MSCs分布情况，测定肺组织鼠肝细胞生长因子（rHGF）和hHGF蛋白的含量，测定Ⅷ因子的表达情况以计算肺微血管密度，并行肺动脉钡剂灌注造影。结果C组和E组肺组织均未检测出hHGF。与C组比较，E组和H组MPAP和右心室肥厚指数降低，肺组织rHGF蛋白含量、肺微血管密度和生存率升高（P〈0．01）。与E组比较，H组MPAP和右心室肥厚指数降低，肺组织rHGF蛋白含量、肺微血管密度和生存率升高（P〈0．01）。E组和H组肺内均可见大量绿色荧光的MSCs分布。肺动脉钡剂灌注造影显示，H组末梢血管灌注背景明显多于E组和C组。结论hHGF基因修饰可促进MSCs移植改善重度肺动脉高压大鼠肺微血管稀薄的作用。
- 林群雷立华林财珠曾邦雄梁富球林献忠郑辉哲蔡宏达高友光杨庆
- 关键词：间质干细胞移植基因修饰肺性
- 肺动脉高压大鼠肺组织肝细胞生长因子和c—met表达的变化被引量：2
- 2012年
- 目的观察肺动脉高压大鼠肺内肝细胞生长因子（HGF）及其受体（c—met）表达的变化。方法雄性SD大鼠80只，7周龄，体重180—250g，采用随机数字表法，将其随机分为2组（n=40）：对照组（c组）和肺动脉高压组（PH组）。PH组经左侧开胸行左肺切除术，手术结束后关胸，待自主呼吸恢复后拔除气管导管，2周后颈部皮下注射野百合碱60mg／kg，制备肺动脉高压模型；C组仅开胸，2周后颈部皮下注射等容量生理盐水。分别于注射野百合碱前1d（基础值）、注射野百合碱后7、14、21和28d时，各取8只大鼠，监测肺动脉压（mPAP），计算右心室与左心室＋室间隔质量比[RV／（LV＋s）]，计算肌型肺小动脉血管中膜相对厚度（RWT，和RWT2分别表示直径为50～100um和100—150um的血管中膜相对厚度）。采用RT-PCR法检测肺组织HGFmRNA和c-metmRNA的表达，采用Westem blot法检测肺组织HGF蛋白和c—met蛋白的表达，采用ELISA法检测肺组织转化生长因子-β（TGF-β）含量。结果与c组比较，PH组注射野百合碱后14、21和28d时mPAP、RV／（LV＋S）和RwL升高，HGF蛋白表达下调，注射野百合碱后7、14、21和28d时RWT1升高，肺组织HGFmRNA表达下调，TGF-β含量升高（P〈0．01），c-met mRNA及其蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肺组织HGF合成不足可能参与了肺动脉高压的形成，其机制与肺组织TGF—β含量升高有关。
- 林群雷立华曾邦雄林献忠林财珠郑辉哲杨庆蔡宏达高友光林健清
- 关键词：肝细胞生长因子
