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荷斯坦奶牛性控冻精应用效果的研究被引量：2: 2013年; 对800头健康青年荷斯坦奶牛分两组进行人工授精,400头输性控冻精,剩余400头输常规冻精作为对照。结果:性控组受胎率为67.3%,产活率为84.2%,妊娠天数为275.8±4.4 d,母犊率为88.5%,平均初生重为37.0±4.48 kg(n=295);对照组受胎率为77.5%,产活率为90%,妊娠天数为276.5±6.8 d,母犊率为51.9%,平均初生重为37.5±4.37 kg(n=180)。其中性控组的产母犊率极显著高于对照组(P<0.01),受胎率、产活率、妊娠天数以及平均初生重对于对照组差异均不显著(P>0.05)。结论:经流式细胞术分选的性控冻精后代具有约90%的高产母率;基于对受胎率、产活率、妊娠天数以及初生重的对比,可以确定性控冻精后代具有良好的遗传稳定性。; 骆新荣廉德平张承选董琴任占魁高庆华; 关键词：性控冻精人工授精受胎率母犊率荷斯坦奶牛

TUNEL法和SCGE法评价奶牛性控冻精DNA损伤: 2014年; 末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)常被用于检验细胞DNA的完整性。本研究采用这两种方法分别对性控、常规冻精进行检测,比较不同方法对精子DNA损伤的检测结果。结果表明:TUNEL法检测性控冻精DNA的损伤率为63.32±0.56%,显著高于(P<0.01)常规冻精的31.67±1.03%;SCGE法检测性控冻精和常规冻精的DNA损伤率分别为64.00±0.68%和32.23±0.72%,差异极显著(P<0.01)。而两种方法对性控冻精和常规冻精DNA损伤的检测结果间没有显著差异(P>0.05),说明该两种方法均可用于冻精DNA损伤检测。; 郑飞骆新荣贾发青高庆华韩春梅; 关键词：TUNEL法性控冻精 DNA损伤

牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化被引量：1: 2011年; 【目的】确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时间。【方法】牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用05、、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、304、5和60 min 4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积。【结果】40 mmol/L DTT处理45 min精子头部面积为(52.32±4.68)μm2,浓度<40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间<45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68)μm2(P<0.01);浓度>40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P>0.05),但精子形态不完整。【结论】40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合。; 孙献莹孟浩骆新荣沈波高庆华; 关键词：精子原位杂交 DTT 解聚

性控冻精的DNA损伤及其检测方法: 2014年; 性控冻精的广泛应用给现代畜牧业带来了巨大的利益。性控冻精在制作生产过程会受到高倍稀释、离心、激光照射、染色及冷冻等诸多因素的影响,而使精子DNA的完整性发生变化,结果降低受胎率,同时会对性控后代的遗传稳定性产生影响。精子DNA损伤检测方法有彗星实验(COMET assay,single cell gel electrophoresis SCGE),末端转移酶介导的d UTP末端标记法(Terminal tranferase d UTP Nick End Labelling TUNEL),精子染色质结构分析(sperm chromatin structure assay SCSA)和精子染色体扩散实验(Sperm chromatin dispersion SCD)等。本文综述了近年来精子DNA损伤检测方法的使用概况,对比了不同方法对检测结果的优势,为更好的评价性控冻精的质量,确定分离参数,及为生产受精率高、安全性高的性控冻精提供依据。; 郑飞骆新荣贾发青高庆华韩春梅; 关键词：性控冻精精子DNA损伤

奶牛精子原位杂交蛋白酶K浓度的优化被引量：1: 2011年; [目的]确定奶牛精子原位杂交中最佳蛋白酶K浓度。[方法]设置6个蛋白酶K浓度(10、20、30、40、60、80μg/ml),奶牛精子在37℃消化处理20 min,以精子尾部颈段和中段的存在作为选定最佳蛋白酶K浓度的标准。[结果]30μg/m l蛋白酶K既能有效去除精子蛋白质,又能保持精子的基本形态。[结论]精子原位杂交的最佳蛋白酶K浓度是30μg/ml。; 沈波孙献莹孟浩高庆华; 关键词：精子原位杂交奶牛

奶牛精子SRY基因原位杂交检测方法的建立被引量：1: 2012年; Sry基因是Y染色体性别决定基因,采用primer premier 6对SRY基因序列设计引物,以公牛基因组DNA为模板扩增,高效DNA地高辛标记和检测试剂盒制备探针,对X精子(Y精子纯度7%)、Y精子(Y精子纯度93%)和常规精子(Y精子纯度50%)DTT去凝集、蛋白酶K去除鱼精蛋白,杂交。结果表明:在荧光显微镜下可见标本背景清晰,精子头部成蓝色,边界清楚,X精子4.67%(n=600)有荧光信号,Y精子86.33%(n=600)有荧光信号,常规精子46.17%有荧光信号。实验证明了所选取Sry基因序列为Y精子携带,建立了精子原位杂交方法。; 陈荣沈波高庆华; 关键词：精子荧光原位杂交 SRY基因奶牛

奶牛性控与常规冻精DNA损伤的彗星检测被引量：5: 2011年; 本文为确定性控冻精与常规冻精的DNA损伤程度,利用彗星实验法分别将奶牛的性控冻精和常规冻精凝胶混合液在裂解液中作用后,使用普通载玻片双层铺胶,电泳,吖啶橙染色后在荧光显微镜下检测、拍照,经CASP软件图像分析后用SPSS 11.5进行数据统计,初步建立了奶牛精子DNA损伤的5级彗星图谱。统计结果显示,性控冻精的DNA损伤系数为116,显著高于常规冻精的损伤系数(28)(P<0.01);彗星率为63.06%,显著高于常规冻精的彗星率(31.13%)(P<0.01)。可以得出,性控冻精DNA损伤显著高于常规冻精。; 骆新荣马瑛孟浩高庆华; 关键词：性控冻精 DNA损伤彗星实验奶牛

Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度: 2013年; 为探讨荧光原位杂交技术(FISH)在评价奶牛精子纯度方面的应用价值,制备地高辛标记Sry基因探针,对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示,荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93.3%、50.3%,与对应精子纯度比较差异不显著(P>0.05),杂交信号多出现在精子尾部中段。可见:建立的Sry基因探针FISH方法评价奶牛精子纯度鉴定结果准确可靠,为其他精子纯度评价方法提供可靠的技术支持。; 孙献莹高庆华; 关键词：奶牛荧光原位杂交

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新疆生产建设兵团博士基金(2010JC20)