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国家自然科学基金(30170413): 作品数：13 被引量：126H指数：6; 相关作者：房静远陈萦晅朱红音陆娟杨丽更多>>; 相关机构：上海第二医科大学附属仁济医院上海消化疾病研究所上海市消化疾病研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金上海市教育委员会重点学科基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

甲基化修饰对人胃癌细胞系中多种基因的调控被引量：3: 2003年; 甲基化紊乱与胃癌的发生有关,近年来甲基化已成为肿瘤研究的热点。目的:探讨在DNA甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)的化学干预下,不同分化胃癌细胞系的抑癌基因、癌基因和与凋亡相关的基因与甲基化调控的关系,并辅以流式细胞仪检测细胞周期的变化。方法:培养高分化、中分化和未分化胃癌细胞系MKN-45、MKN-28和:HGC-27,分别以不同浓度的5-aza-dC干预细胞。提取细胞的RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测p16INK4A、p21WAF1、p73、c-myc、c-Ha-ras、survivin和死亡相关蛋白激酶(DAP-ki-nase)等多种基因的表达情况;同时以流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果:抑癌基因中,MKN-45和HGC-27细胞中有p16INK4A表达,用5-aza-dC干预后其表达增强,MKN-45细胞的p16INK4A在5-aza-dC 10μmcl/L 24 h、2 μmol/L72 h和5μmol/L 72 h组表达增强,HGC-27细胞的p16INK4A在5 μmol/L 24 h和10 μmol/L 24 h组表达也有明显增强;p21WAF1、p73无明显变化。癌基因中c-myc、c-Ha-ras变化不明显。与凋亡相关的基因中,MKN-45细胞的survivin在5-aza-dC处理后表达增强,但HGC-27细胞的DAP-kinase无明显变化。结论:在不同分化的人胃癌细胞系中,甲基化修饰对抑癌基因。; 杨丽房静远陈萦晅陆娟朱红音沈冠凤罗鸿仔; 关键词：MKN-45细胞 P16^INK4A MKN-45 人胃癌细胞基因

甲基转移酶1表达质粒对结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其表达的影响被引量：6: 2004年; 目的　分析DNA甲基转移酶 1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性 (MSI)的影响。方法　分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒 ,将其转染入结肠癌SW1116细胞 ,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达。甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况 ,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响。结果　转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高 ,基因mRNA表达降低。转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态 ,基因表达增强。未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化。结论　重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。; 陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵; 关键词：基因表达质粒结肠癌甲基化基因成分

人结肠癌中凋亡抑制基因survivin的表达被引量：3: 2004年; 背景:细胞增殖和凋亡失衡将导致肿瘤的发生,并直接影响肿瘤的生物学行为。survivin是一种新的凋亡抑制基因,在大多数肿瘤中显著高表达。目的:探讨survivin基因在人结肠癌发生、发展中的作用,及其与p53基因的表达和结肠癌生物学行为的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测33例结肠癌组织及其相应癌旁组织和正常结肠黏膜中survivinmRNA和p53mRNA的表达,分析survivinmRNA的表达与p53mRNA的表达和结肠癌生物学行为的相关性。结果:69.7%的结肠癌组织中有survivinmRNA表达,表达率显著高于癌旁组织和正常结肠黏膜(42.4%和21.2%,P<0.01);survivin表达阴性癌组织的相应癌旁组织和正常结肠黏膜无一例有survivinmRNA表达。结肠癌组织中survivinmRNA的表达值显著高于癌旁组织和正常结肠黏膜(P<0.01)。33例结肠癌组织中仅2例p53mRNA表达缺失,癌旁组织和正常结肠黏膜中均有p53mRNA表达。结肠癌组织中p53mRNA的表达值与癌旁组织和正常结肠黏膜无显著差异;survivin表达阳性癌组织中p53mRNA的阳性表达率和表达值与survivin表达阴性组无显著差异。survivinmRNA和p53mRNA的表达与结肠癌的生物学行为无显著相关性。结论:survivin基因在人结肠癌组织中表达上调,提示其可能通过抑制结肠癌细胞凋亡,在结肠癌的发生、; 王少华陈萦晅房静远邱德凯; 关键词：结肠癌 SURVIVIN 结肠肿瘤 P53

重组DNA甲基化酶1表达质粒对结肠癌细胞相关基因表达的影响被引量：13: 2004年; 目的　分析DNA甲基化酶 1(DNMT1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞肿瘤相关基因的表达影响。方法　分别构建并转染含有人正义和反义DNMT1的真核表达质粒入结肠癌SW 1116细胞 ,PCR和限制性内切酶证实转染结果 ,以Western印迹法分析各组细胞DNMT1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2及c myc、p16 INK4A 基因的表达。结果　经G4 18筛选得到稳定转染DNMT1基因的结肠癌细胞系 ,且分别在该转染有正义和反义质粒的细胞系中 ,DNMT1蛋白表达上调和下调。同时发现转染正义DNMT1的细胞中hMLH1、hMSH2及c myc的表达降低 ,而转染反义DNMT1的细胞中hMSH2的表达明显增强。各组细胞p16 INK4A基因的表达差异不明显。; 陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵; 关键词：结肠癌细胞系肿瘤相关基因 WESTERN印迹法

癌相关基因在结肠癌中的表达及其甲基化调控被引量：6: 2003年; 目的　探讨癌相关基因APC、p16 INK4A、p2 1WAF1和c myc等在结肠癌中的表达及其受甲基化的调控。方法　培养结肠癌细胞SW 1116、Colo 32 0、HT2 9,分别用不同浓度的 5 aza dC干预细胞。提取细胞的RNA ,用RT PCR的方法检测p16 INK4A、p2 1WAF1、APC和c myc等多种基因的表达情况 ;同时以流式细胞仪分析SW1116和Colo 32 0的细胞周期。结果　 (1)三种细胞在干预前有较弱的 p16 INK4A和APC的表达 ,而在用 5 aza dC干预后表达增强 ,且在不同的结肠癌细胞株 5 aza dC作用发挥最佳的时间与浓度不同。 (2 ) p2 1WAF1在干预前后均不表达 ,c myc在干预前后表达无明显变化。结论　三株人结肠癌细胞中 ,5 aza dC均可诱导 p16 INK4A和APC的表达 ,但对 p2 1WAF1和c myc无明显影响。; 陆娟房静远陈萦晅朱红音朱红音杨丽; 关键词：结肠癌 APC基因 P16^INK4A基因 P21^WAF1基因

胃癌发生中后生修饰的异常被引量：5: 2002年; 胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤,其发生与发展与肿瘤相关基因的表达异常,包括癌基因的过度表达和抑癌基因的失活等有关。染色体由DNA和组蛋白等组成,DNA的甲基化和组蛋白的乙酰化是调控各种基因表达的后生修饰的主要内容。甲基化使基因转录水平降低,而与基因相关的组蛋白的乙酰化往往活化该基因。胃癌的发生中常常有总基因组DNA甲基化水平降低、c-Ha-ras等癌基因的低甲基化和包括p16^(INK4A)等抑癌基因的高甲基化,及p21^(WAF1)基因相关组蛋白的低乙酰化紊乱等。本文重点讨论几种较重要的肿瘤相关基因的后生修饰变化和纠正策略。; 房静远; 关键词：胃癌病理

表型遗传修饰对人结肠癌细胞周期和抑癌基因表达的调控被引量：4: 2003年; 目的　分析和探讨同一结肠癌细胞系DNA甲基化和组蛋白乙酰化对抑癌基因表达和细胞周期的影响。方法　培养结肠癌细胞HT 2 9、SW 1116和Colo 32 0 ,分别以去甲基化制剂 5 氮脱氧胞苷 (5 aza dC)和 (或 )组蛋白脱乙酰化酶 (HDAC)抑制剂trichostatinA(TSA)及丁酸盐干预细胞。提取基因组DNA和RNA ,部分行甲基化特异性PCR(MSP)检测 p16 INK4A基因启动子区甲基化情况 ;以RT PCR研究p16 INK4A和p2 1WAF1mRNA表达水平 ;同时以流式细胞仪分析SW 1116和Colo 32 0细胞周期。结果　干预前 ,HT 2 9、SW 1116和Colo 32 0三种结肠癌细胞系中均有较弱的 p16 INK4A表达 ;SW 1116和Colo 32 0细胞的p2 1WAF1表达缺如。对于HT 2 9细胞 ,1μmol/L的 5 aza dC干预 2 4h后 ,p16 INK4A基因启动子区甲基化水平明显降低而mRNA水平显著增高 ,10 μmol/L干预时则无显著改变。在SW 1116和Colo 32 0细胞中 ,5 aza dC干预后 p16 INK4A表达增强 ,且以 10 μmol/L或 5 μmol/L浓度干预 2 4h者为最明显 ,相反p2 1WAF1仍无明显表达。该两个细胞系经TSA或丁酸盐处理后 ,p2 1WAF1转录水平显著上调。另外 ,该两个细胞系中 ,5 aza dC并不能改变细胞周期 ,而TSA或丁酸盐使细胞阻滞于G1期。结论　三种人结肠癌细胞中 ,p16 INK4A基因的表达均?; 陈萦晅房静远陆娟杨丽朱红音童菊芳沈冠凤罗鸿妤邱德凯萧树东; 关键词：结肠癌细胞周期结肠肿瘤抑癌基因组蛋白乙酰化

mTOR信号途径与表观遗传关系的研究进展被引量：3: 2006年; mTOR(mammalian target of rapamycin)是雷帕霉素在哺乳动物细胞内作用的蛋白激酶,通过PI3K/Akt信号磷酸化激活而调控细胞分裂、促进转录、信号翻译等,mTOR抑制剂具有抗肿瘤和免疫抑制的潜力,已进入临床II期试验。DNA甲基化可沉默基因转录,组蛋白磷酸化的动态变化主要影响信号传导通路中相关基因的转录,DNA甲基化和组蛋白共价修饰以及RNA干扰技术都是表观遗传修饰的方式,可以调节mTOR信号途径蛋白激酶的表达,激活或抑制mTOR也可以影响DNA甲基化和组蛋白磷酸化等。本文将对mTOR信号途径与表观遗传关系的研究进展作一综述。; 王霞孙丹凤房静远; 关键词：MTOR 表观遗传 DNA甲基化组蛋白修饰雷帕霉素

人胃癌组织DNA甲基化酶、去甲基化酶与肿瘤相关基因的表达被引量：8: 2004年; 目的　探讨胃癌组织中甲基化酶、去甲基化酶基因与肿瘤相关癌基因和抑癌基因的关系。方法　取 2 8例胃癌手术标本的癌区、癌旁、正常组织 ,分别以RT PCR法和定量RT PCR法检测DNA甲基化酶 1(DNMT1)、去甲基化酶mbd2、甲基化结合蛋白MeCP2和 p16 INK4A、c myc等基因的转录水平 ,以相关分析等统计学处理研究各基因表达之间及分别与病理组织学之间的关系。结果　癌组织平均DNMT1和mbd2mRNA分别明显高于和低于正常组织。胃癌组织中c myc的表达增强 ,而MeCP2和 p16 INK4A无明显变化。在正常组织中 ,MeCP2与mbd2 ,p16 INK4A与MeCP2、mbd2 ,c myc与MeCP2的转录水平表现出一定的相关性 ,而当肿瘤发生后仅发现c myc与mbd2的表达呈负相关。以上各基因与肿瘤生物学行为均无相关性。结论　肿瘤相关基因mRNA的表达与甲基化酶DNMT1无关 ,而与甲基结合蛋白有关。; 程中华房静远杨丽陈萦晅陆嵘陆娟朱红音顾伟齐; 关键词：胃癌组织 DNA甲基化酶肿瘤 RT-PCR法

人结肠癌细胞系中癌相关基因的表达及表型遗传修饰的影响被引量：3: 2003年; 目的　观察DNA甲基化和组蛋白乙酰化对人结肠癌细胞系癌相关基因的表达和细胞周期的影响。方法　培养 2种结肠癌细胞系SW 1 1 1 6和Colo 32 0 ,分别以去甲基化制剂 5 氮脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine ,5 aza dC)和 (或 )组蛋白脱乙酰化酶 (histonedeacetylase ,HDAC)抑制剂trichostatinA(TSA)及丁酸盐干预细胞。提取细胞总RNA ,以RT PCR和定量RT PCR法研究抑癌基因p1 6 INK4A、APC、p2 1 WAF1 、p5 3和 p73以及癌基因c myc和c Ki ras、凋亡抑制基因survivinmRNA表达水平 ;并运用流式细胞术检测细胞周期变化。结果　正常情况下 ,SW 1 1 1 6和Colo 32 0细胞系中均有较弱的 p1 6 INK4A和APC表达 ;两种结肠癌细胞系 p2 1 WAF1 表达缺如 ,而 p5 3、p73和c myc、c Ki ras以及survivin均表达。以 5 aza dC干预后 ,p1 6 INK4A和APC表达增强 ,且不同的结肠癌细胞系表达增强最明显时 5 aza dC干预的时间与浓度不同。相反 p2 1 WAF1 仍无明显表达。值得注意的是这两个细胞系经TSA或丁酸盐处理后 ,p2 1 WAF1 转录水平显著上调。p5 3、p73、c myc、c Ki ras和survivin基因在干预前后表达无明显变化。另外 ,5 aza dC并不能改变细胞周期 ,而TSA或丁酸盐使细胞阻滞于G1 期。结论　两种人结肠癌细胞系中 ,p1; 陈萦晅房静远陆娟杨丽朱红音童菊芳沈冠凤罗鸿妤邱德凯萧树东; 关键词：人结肠癌细胞系相关基因基因表达细胞周期

国家自然科学基金(30170413)

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