江西省自然科学基金(0540084)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：解放军第94医院江西医学院第二附属医院江西省医学科学研究所更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
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- 脐血间充质干细胞的无血清培养被引量：4
- 2006年
- 目前间充质干细胞（MSC）培养均在培养体系中加入一定比例的血清.但是用这种方法培养的细胞可能存在动物携带的已知或未知病原体传染人类的隐患.对以后可能的临床应用构成生物威胁.近年有人报道,用正常人AB血清或脐血血清替代胎牛血清来培养人骨髓MSC.但血清中的成分十分复杂,至今尚不完全清楚.既含有刺激物质也有抑制物质,有的物质可起抑制作用或毒性作用.此外,个体血清之间所含激素和生长因子的变化甚大.对研究细胞的定向诱导分化机制非常不利.我们利用自行研制的无血清培养基对培养脐血MSC进行了研究.
- 李剑涂怀军石庆芝李洁吴琼戴革戴育成
- 关键词：无血清培养基间充质干细胞脐血血清胎牛血清毒性作用
- 无血清培养条件诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化被引量：4
- 2009年
- 于2005-06/2007-09在南昌大学第二附属医院江西省分子医学重点实验室拟建立一种在无血清培养条件下诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化的方法。所用无血清培养基血清替代物是将纯化人转铁蛋白直接溶于DMEM培养基中,再将去毒后的BSA、超声波粉碎后的胆固醇、胰岛素及过氧化氢酶直接加入DMEM培养基中稀释至所需浓度。体外分离的脐血单个核细胞以1×109L-1接种,加入含氢化可的松、纤维连接蛋白的无血清培养基,7d后消化传代。取传至2,5,8代的脐血间充质干细胞,达60%～70%融合时以含β-巯基乙醇、丁化羟基苯甲醚的无血清培养基诱导其向神经细胞分化。结果在无血清条件下能培养扩增出大量脐血间充质干细胞,融合后可继续传代扩增;不表达CD34、CD13和CD45,强表达CD166、CD29、CD105,较强表达CD54,80%以上细胞处于G0/G1期;脐血间充质干细胞经诱导后,能形成具有典型神经元形态的神经细胞,神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经胶质元纤维酸性蛋白均呈阳性表达。提示在自行研制的无血清培养条件下可成功诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化。
- 涂怀军李剑石庆之余小骊李洁吴琼
- 关键词：脐血间充质干细胞神经细胞无血清培养
- 脐血间充质干细胞无血清培养的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种体外无血清培养扩增脐血间充质干细胞(MSC)的方法。方法从脐血中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细胞生长情况,并进行瑞氏、过碘酸雪夫(PAS)、非特异性酯酶(NAE)和碱性磷酸酶(ALP)染色观察,流式细胞仪分析两种培养条件下MSC表面CD分子表达情况及细胞周期。结果有血清培养第3天出现较多贴壁细胞,8天有细胞丛生长,12～18天细胞融合成片,呈典型的成纤维细胞样外观。无血清培养第5天出现较多贴壁细胞,8天有细胞丛生长,14～20天细胞融合成片。单层融合的脐血MSC消化传代培养1周左右达融合,可继续传代扩增。最终有血清培养获得(3.45±0.28)×108个细胞,无血清培养获得(2.97±0.26)×108个细胞,两者比较差异显著(P<0.05)。无血清与有血清培养21天,贴壁细胞PAS和ALP染色阳性,以成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞为主。流式细胞仪检测显示,两种培养条件下扩增后的脐血MSC均不表达CD34、CD13和CD45,而强表达CD166、CD29、CD105,较强表达CD54;无血清培养组G0/G1期细胞比例明显高于有血清培养组(P<0.05)。结论利用自行研制的无血清培养基添加一些辅助因子能较好地培养扩增间充质干细胞。
- 涂怀军李剑石庆芝李洁吴琼戴育成
- 关键词：间质干细胞细胞培养脐血
