国家自然科学基金(30872541)
- 作品数：9 被引量：54H指数：5
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- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属协和医院石河子大学更多>>
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- 脂联素对兔短期缺血再灌注心肌的保护作用被引量：4
- 2010年
- 目的探讨脂联素(adiponectin,APN)对兔短期缺血再灌注损伤心肌的保护作用并探讨其可能机制。方法 18只新西兰大白兔随机分成3组(n=6),假手术对照组(S组)、缺血/再灌注组(IR组)、脂联素组(APN组)。除S组外,其余两组均接受左冠状动脉前降支15 min阻断和30 min再灌注。APN组于再灌注开始时自耳缘静脉注入重组脂联素50μg/kg。检测心肌组织的细胞凋亡情况,血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,一氧化氮(NO)含量;免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 APN组心肌细胞凋亡指数低于IR组(P<0.01)。APN组Bcl-2基因的蛋白表达量高于IR组(P<0.05),Bax基因的蛋白表达量低于IR组(P<0.05)。APN组血清TNF-α含量低于IR组(P<0.05),NO含量高于IR组(P<0.01)。结论 APN对短期缺血再灌注心肌有一定保护作用,其机制可能与APN增加血清中的NO含量,降低血清中TNF-α水平及上调Bcl-2基因的蛋白表达,下调Bax基因的蛋白表达有关。
- 魏育涛陈新忠董念国朱佳龙罗波侯量
- 关键词：细胞凋亡缺血再灌注脂联素
- 脂肪因子chemerin促进巨噬泡沫细胞形成被引量：12
- 2012年
- 目的观察脂肪因子chemerin是否调节巨噬泡沫细胞形成,以及对巨噬泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达和炎症因子释放的影响。方法 100nmol/L佛波酯(phorbolmyristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随机分组,Chemerin不同浓度和作用时间下联合相同浓度(50μg/mL)氧化型低密度脂蛋白与THP-1源性巨噬细胞共孵育。油红O染色观察细胞内脂滴变化,Western blot和实时PCR检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA法检测培养液中炎症因子———肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的浓度,酶法检测细胞内胆固醇含量。结果Chemerin诱导巨噬细胞内脂滴蓄积,下调CD36和ABCA1mRNA及蛋白的表达,增加培养液中促炎因子TNF-α的释放而降低抗炎因子IL-10的释放,提高细胞内胆固醇的含量,且有浓度和时间依赖性。结论 Chemerin通过下调CD36和ABCA1基因的mRNA及蛋白的表达,诱导THP-1巨噬细胞内脂滴蓄积和泡沫细胞形成;ABCA1表达下调可能与促炎因子TNF-α释放增加和抗炎因子IL-10释放减少有关。
- 谢霆刘成珪陈新忠董念国杨文凯张树华胡晓青
- 关键词：CHEMERINCD36ATP结合盒转运子A1泡沫细胞
- 冠状动脉外膜及外周脂肪对冠状动脉粥样硬化的影响被引量：7
- 2009年
- 目的:观察冠状动脉(冠脉)外周脂肪及冠脉外膜对动脉粥样硬化的影响。方法:血管外膜分组:Ⅰ组:正常对照冠脉(6例);Ⅱ组:冠心病者冠脉(5例);Ⅲ组:冠心病者乳内动脉(12例);Ⅳ组:冠心病者桡动脉(6例);Ⅴ组:冠心病者大隐静脉(14例)。冠脉外周脂肪分组:冠心病组(16例),对照组(6例)。各组分别行血管的苏木精-伊红染色及CD68+抗体标记的免疫组化检测;冠脉外周脂肪脂联素及TNF-α的mRNA水平检测及CD68+抗体免疫组化检测。脂多糖(100μg/L)及硬脂酸(0.5 mmol/L)刺激培养的对照组冠脉外周脂肪细胞,检测上清液TNF-α及IL-6浓度。结果:与其他血管外膜比较,Ⅱ组冠脉外膜可见明显的巨噬细胞聚集带。冠脉外周脂肪内浸润巨噬细胞数,冠心病组:(39±7.1)个/400倍,对照组:(12±4.3)个/400倍,前者巨噬细胞浸润明显较后者密集,P<0.05;冠心病组脂联素mRNA表达明显降低,而TNF-α的表达明显增高。对照组冠脉外周脂肪细胞经硬脂酸及脂多糖刺激后,上清液TNF-α及IL-6浓度明显增高(P<0.05)。结论:冠心病者冠脉外周脂肪及冠脉外膜炎性细胞局部浸润产生的炎症反应促进了冠脉病变的形成。
- 陈新忠周元杨文忠孙宗全师智勇张昌伟
- 关键词：动脉粥样硬化动脉外膜巨噬细胞
- 紫绀型先心病缺氧致脂肪组织内分泌紊乱被引量：1
- 2012年
- 目的探讨紫绀型先心病缺氧是否致脂肪组织缺氧及内分泌功能紊乱。方法选取紫绀型先心病(CCHD)和非紫绀型先心病(ACHD)手术患者共32例,其中CCHD 17例为实验组,ACHD 15例为对照组,比较身高、体重、血红蛋白。获取皮下脂肪组织,免疫组化检测缺氧诱导因子1(HIF-1α),RT-PCR法分析脂肪因子等表达,Western blot法检测P-NFκBP65、P-IκBα、JNK和P-JNK蛋白表达。结果实验组与对照组相比,身高(67.1±7.8)cm vs(72.6±9.5)cm(P<0.05);体重(7.9±2.2)kg vs(9.5±2.6)kg(P<0.05);血红蛋白(186.6±22.6)g/L vs(117.4±10.5)g/L(P<0.05)。实验组HIF-1α、内质网应激标志和炎症相关指标表达高于对照组(P<0.05)。结论紫绀型先心病导致脂肪组织缺氧,脂联素表达下降,炎症因子增加,其变化可能与内质网应激相关。
- 王现国夏东升魏育涛董念国陈新忠
- 关键词：紫绀型先心病脂肪因子内质网应激
- 六氟化硫微泡介导人脂联素基因兔主动脉内转染及表达被引量：1
- 2012年
- 背景:超声微泡载基因传输技术是一种新兴起的定向传输基因技术。目的:构建含人脂联素基因脂联素的真核表达载体,采用六氟化硫微泡介导脂联素基因进行兔主动脉转染及表达,为脂联素用于体内干预动脉粥样硬化的研究奠定基础。方法:人心外膜脂肪组织提取总RNA构建pcDNA3.1-脂联素重组体,通过瞬时转染人脐静脉内皮细胞验证载体构建是否成功。21只大白兔随机分成对照组(n=6)和脂联素转基因组(n=15),脂联素转基因组经兔耳缘静脉注射pcDNA3.1-脂联素与六氟化硫微泡的混合物,诊断超声仪照射兔胸腹主动脉区域,于照射后2,7,14d取兔主动脉血管及血清,检测主动脉血管壁中脂联素基因的表达及血清中脂联素蛋白水平。结果与结论:pcDNA3.1-脂联素瞬时转染入人脐静脉内皮细胞可有效表达。六氟化硫微泡传输脂联素基因2d后即可检测到兔主动脉血管壁脂联素基因高表达,持续至14d,且兔血清脂联素蛋白水平显著增加(P<0.01)。说明pcDNA3.1-脂联素重组体构建成功,六氟化硫微泡可在快速血流状态下,安全、高效传输脂联素基因入兔主动脉血管壁并有效表达与分泌至血浆。
- 杨文凯陈庆杨春丽王现国谢霆董念国陈新忠
- 关键词：脂联素重组质粒
- 心外膜脂肪组织转染人apM1基因抑制兔冠状动脉粥样硬化的形成
- 2012年
- 背景:心外膜脂肪分泌的脂联素水平下降可能是导致冠状动脉粥样硬化的主要原因之一。目的:观察人脂联素基因apM1转染至兔心外膜脂肪组织对高脂喂食兔冠状动脉粥样硬化形成的影响。方法:向兔心包腔内注射脂质体包裹的pEGFP-apM1重组质粒50μL,分别于注射后2,7,28d观察转染效率。采用高脂喂食方法制备兔冠状动脉粥样硬化模型,并按上述方法转染apM1基因,于转染后4周取材。结果与结论:心包腔内转染apM1基因2d后即可检测到兔心外膜脂肪组织apM1基因高表达,并可持续至28d。心外膜脂肪转染apM1基因对高脂喂食引起的外周血脂联素、肿瘤坏死因子α、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平无显著影响,但可使心包腔液中脂联素水平显著增加、肿瘤坏死因子α水平显著降低(P<0.01),冠状动脉内膜/中膜厚度比减小40.66%。说明经心包腔注射可将apM1基因有效转染入心外膜脂肪组织,并可在局部通过抑制高脂诱导的炎性因子释放而抑制冠状动脉粥样硬化的形成。
- 杨文凯董念国陈庆王现国谢霆陈新忠
- 关键词：脂联素心外膜脂肪组织冠状动脉粥样硬化
- 脂联素阻断游离脂肪酸介导的单核细胞TLR4信号途径的激活被引量：10
- 2008年
- 目的:研究脂肪细胞分泌产物脂联素及游离脂肪酸作用于单核细胞的信号转导途径,探讨脂肪细胞与单核细胞间相互作用的分子机制。方法:收集人单核细胞体外培养,加入终浓度分别为0.1、0.5、1.0mmol/L硬脂酸(stearic acid,SA),24h后收集上清液,ELISA法检测上清液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;上述浓度SA刺激单核细胞2h后,免疫组化检测单核细胞核转录因子κB(nuclear transcription factor κB,NF-κB)核移位;加入不同浓度脂联素球状结构域(globular adiponectin,gAd)孵育单核细胞6h,SA刺激,2h后检测NF-κB核移位变化,24h后检测上清液TNF-α、IL-6浓度。不同浓度gAd孵育单核细胞24h后用流式细胞术检测Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)数目的变化。结果:SA刺激单核细胞可引起NF-κB核移位及TNF-α、IL-6分泌增加,gAd可阻断SA这一效应。gAd孵育单核细胞可导致TLR4数目显著下调。结论:脂肪细胞分泌SA及脂联素通过TLR4调节单核细胞活性,脂联素通过TLR4阻断SA对单核细胞的激活作用。
- 陈新忠孙宗全郑向阳王细勇
- 关键词：脂联素动脉硬化单核细胞
- NF-κB途径介导Chemerin抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞ABCAl表达和降低胆固醇外流被引量：11
- 2012年
- 目的观察脂肪因子Chemerin是否调节胆固醇流出和巨噬泡沫细胞脂滴蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:choles-terol acyltransferase-1,ACAT1)表达和NF-κB活化的影响。方法佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随后加入胆固醇和ox-LDL培养促进巨噬细胞转化为巨噬泡沫细胞,免疫荧光染色检测巨噬细胞表面抗原CD68的表达,油红O染色后观察泡沫细胞形态,脂肪因子Chemerin干预巨噬泡沫细胞,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出变化,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blot检测ABCA1及ACAT1mR-NA和蛋白表达水平。Sandwich ELISA法检测巨噬泡沫细胞NF-κB活化情况。实时PCR检测NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后,Chemerin再干预时ABCA1表达的变化。结果 Chemerin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进脂滴蓄积,下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,增加NF-κB活化,差异有统计学意义(均P<0.05),且ABCA1mRNA表达与Chemerin浓度呈负相关,r=-0.936(P<0.05),NF-κB活化程度与ABCA1mRNA表达呈负相关,r=-0.917(P<0.05),但Chemerin对ACAT1mRNA和蛋白的表达无明显影响,PDTC预处理能够逆转ABCA1mRNA表达抑制。结论 Chemerin下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,抑制THP-1巨噬泡沫细胞内胆固醇外流,增加细胞内脂滴蓄积,NF-κB活化可能是Chemerin抑制ABCA1mRNA表达的信号通路之一。
- 谢霆陈新忠董念国夏东升杨文凯刘海峰
- 关键词：CHEMERINATP结合盒转运子A1泡沫细胞
- 冠心病患者冠脉病变程度与心外膜脂肪脂联素表达的关系被引量：10
- 2012年
- 目的探讨冠心病患者心外膜脂肪（EAT）脂联素（APN）表达与冠脉病变程度的关系。方法两组患者冠心病组52例，瓣膜病组54例，获取静脉血和心外膜脂肪，冠心病组按Gensini’s评分分为〈30分、30～90分、〉90分3组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫印迹分析（Westernblot）检测APNm清mRNA和蛋白表达。结果血清APN瓣膜病组（14．1±4．2）mg／L，冠心病组（9．3±4．5）mg／L（P〈0．01）；冠心病3组血清APN分别为（10．9±5．5）mg／L（n=16）、（8．4±4．2）mg／L（n=20）、（6．2±5．3）mg,／L（n=18）（P〈0．05）；心外膜脂肪RT-PCR和Westernblot法检测APN显示随着Gensini’s积分增加APN呈下降趋势。结论冠心病心外膜脂肪APN表达下降与冠状动脉病变程度相关。
- 王现国陈新忠夏东升董念国柳祚
- 关键词：冠心病脂联素心外膜脂肪
