河南省科技攻关计划(0223013500)
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
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- 相关领域：生物学更多>>
- 枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的克隆和表达被引量：6
- 2007年
- 目的:获得碱性蛋白酶基因。方法:用PCR的方法从枯草芽孢杆菌A-109中扩增碱性蛋白酶基因(apr),并进行测序分析,构建表达载体,最后转化大肠杆菌BL21,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测该基因的表达情况。结果:apr基因片段含1092个碱基对。该基因片段核苷酸序列与Bacillus amyloliquefaciens subtilisin DFE precursor有99%的同源性,对应的氨基酸序列与Bacillussp.DJ-4有99%的同源性。apr基因在大肠杆菌BL21中获得表达,并表现出蛋白酶活性。结论:获得了具有活性的新的碱性蛋白酶基因。
- 刘新育张品品李林珂赵玉萍马向东
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶克隆
- 温度对大肠杆菌感受态细胞的影响被引量：9
- 2003年
- 在不同的培养温度下制备一系列大肠杆菌感受态细胞,并选取其中一组感受态细胞在4种不同的温度下保存,对培养温度与大肠杆菌感受态形成的关系以及感受细胞在不同保存温度下的保持情况进行了研究.结果表明,不同培养温度下大肠杆菌生长出现高峰期不同.其中,18℃和25℃,出现于对数期早期,而30℃和37℃则出现于对数期中后期.在25℃条件下转化效率最高.感受态细胞在4种不同温度条件下保存,受活菌数和感受态2种因素的影响程度都不同.转化效率在前期都有不同程度的提高,液氮条件下保存感受态细胞时间最长.
- 柯涛张勇法潘园园马向东
- 关键词：温度感受态细胞
- α-淀粉酶基因启动子-35区的诱变及其对大肠杆菌内表达量的影响被引量：3
- 2006年
- 对来自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因(Gene Bank的序列号为AY167892)的启动子进行定点诱变,研究启动子的碱基改变对该基因在大肠杆菌中表达量的影响,在基因工程中有重要的意义。以α-淀粉酶基因连接到pBluescript KS+形成的重组质粒PHNH003为模板,通过PCR得到该α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列截短141bp的基因,并通过定点诱变改变该截短基因启动子-35区第2位和第3位的碱基(即TGCACA→TTGACA),分别把这2个基因克隆至pBlue-script KS+并转化大肠杆菌DH5α。并把PHNH003转化至大肠杆菌DH5α,作为对照菌株。结果表明,含截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照菌株提高24%;含点突变的截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照提高100%。并分析了α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列及-35区2个碱基的突变对基因在大肠杆菌中表达量的影响。
- 黄春晓崔锦马向东
- 关键词：Α-淀粉酶基因启动子定点诱变大肠杆菌
- 野油菜黄单胞菌8004 α-淀粉酶酶学性质研究被引量：2
- 2005年
- 对野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶进行了定位,确定该酶为胞外酶,且只有一型α-淀粉酶。采用切胶纯化得到纯酶,SDS-PAGE测得其相对分子质量为52ku。研究显示,该酶的最适作用温度为50℃,最适pH值为6.2,通过酶的稳定性研究发现该酶热稳定性较差,而pH值在4.86～10.47具有较好的稳定性。
- 陈红歌陈健王旭胡渝马向东
- 关键词：野油菜黄单胞菌Α-淀粉酶酶学性质
