浙江省自然科学基金(Y204055)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张丽芳朱冠保朱珊丽张德意王鹏飞更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院温州医学院浙江省人民医院更多>>
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- 人乳头瘤病毒16 L1/CEA CTL表位融合蛋白的原核表达研究
- 2008年
- 目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16型衣壳蛋白L1与癌胚抗原(CEA)细胞毒T细胞(CTL)表位嵌合基因,探讨其在原核表达系统中的表达情况。方法:选择CEA CTL表位(CEA691 IMIGVLVGV),以HPV16阳性宫颈癌组织提取的DNA为模板,通过PCR方法扩增出HPV16 L1/CEA CTL表位嵌合基因,克隆入pET32a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,进一步采用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果:pET32a(+)/HPV16 L1/CEA CTL表位重组质粒构建成功,并在大肠杆菌中得到表达。SDS-PAGE分析表明表达产物分子质量(Mr)约为83×103,与预期相符,Western-blot方法进一步证实其为目的蛋白。结论:利用pET32a(+)表达载体能表达HPV16 L1/CEA CTL表位重组蛋白,为其进一步的免疫效应研究打下了基础。
- 张德意朱冠保张丽芳朱珊丽陈俊
- 关键词：乳头状瘤病毒
- 人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原细胞毒T淋巴细胞表位嵌合基因克隆及其表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到UPV6bL1的羧基端序列中,将目的基因连入真核表达转移载体pFastBac^(TM)1,构建重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE- A3-CTL,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;将重组杆状病毒转染sf-9昆虫细胞表达嵌合目的蛋白,并经SDS-Page电泳、考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定。结果成功构建了重组质粒pFastBac^(TM)1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,并在真核细胞sf-9昆虫细胞中成功表达了嵌合目的蛋白。结论通过基因克隆方法能成功的将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1基因中,并能在真核细胞表达系统中表达出嵌合目的蛋白,为进一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。
- 许晓东张德意朱冠保张丽芳
- 关键词：黑色素瘤抗原表位疫苗
- 肿瘤相关抗原CEA的B细胞表位预测被引量：3
- 2007年
- 目的分析癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的B细胞表位,为肿瘤治疗提供理论基础。方法以CEA的完整氨基酸序列为研究基础,采用Hopp&Woods的亲水性方案,Emini表面可及性方案和Jameson-Wolf抗原指数方案,辅以CEA的二级结构及其柔性区域分析,预测CEA的B细胞表位。结果预测的B细胞表位可能位于CEA的N端第150￣160、168￣172、207￣211、332￣338、372￣377、467￣472、485￣490、507￣516、580￣584区段。结论应用多参数预测CEA的B细胞表位,可进一步用于CEA相关肿瘤治疗性表位疫苗的分子设计和研究。
- 王鹏飞欧琴朱珊丽朱冠保张丽芳
- 关键词：癌胚抗原B细胞表位
- 人类表皮生长因子受体2的B细胞表位初步预测分析被引量：2
- 2010年
- 目的预测人类表皮生长因子受体2(HER2/neu)的B细胞表位,为肿瘤免疫治疗提供理论基础。方法以生物信息学软件综合预测筛选HER2/neu可能B细胞表位,以吴氏平均抗原性指数为标准,确定目的表位。结果HER2/neu为一跨膜蛋白,其二级结构中以无规则卷曲的区域出现较多。其N端第497～504,939～943,1 106～1 116,1 140～1 158,1 166～1 175,1 225～1 234,1 240～1 246区段,可能为HER2/neu的优势B细胞表位。结论应用多参数预测HER2/neu的B细胞表位,可进一步为HER2/neu相关肿瘤治疗性表位疫苗分子设计和研究提供理论依据。
- 周珠哈王安吴乐朱珊丽朱冠保张丽芳
- 关键词：人类表皮生长因子受体2B细胞表位预测肿瘤疫苗
