国家自然科学基金(30971508)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：马远方胡延忠宋振顺李霄卢鹏更多>>
- 相关机构：河南大学同济大学第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 间断低剂量二乙基亚硝胺诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型被引量：6
- 2019年
- [目的]建立C57BL/6J小鼠诱发性肝癌模型。[方法]C57BL/6J小鼠40只,随机分为4组:对照组、DEN1组、DEN2组、DEN3组。DEN1组及DEN3组小鼠于实验第1天腹腔注射二乙基亚硝胺溶液,剂量为20 mg/kg,对照组和DEN2组小鼠腹腔注射同体积PBS溶液。实验第5周,DEN2组和DEN3组小鼠的饮水中添加浓度为10 mg/L的二乙基亚硝胺,连续饮用4周后,改为正常饮水;实验第16周,处死各组动物,计算小鼠肝脏指数,观察各组小鼠肝脏大体及镜下改变。[结果]对照组和DEN1组小鼠肝脏无肉眼可见的癌结节,肝癌发生率为0;DEN2组有2只小鼠发现肝脏有单个微小结节,肝癌发生率为20%;DEN3组小鼠肝脏均有大小不等的多个白色癌结节,肝癌发生率为100%,病理组织切片显示为肝细胞癌。[结论]间断低剂量二乙基亚硝胺能够快速诱导C57BL/6J小鼠肝细胞癌模型。
- 张舒曼王源李淑莲
- 关键词：C57BL/6J小鼠二乙基亚硝胺肝癌模型
- Hsf1对人肝癌细胞株PLC/PRF5的生长调控作用被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)对人肝癌细胞株PLC/PRF5生长的调控作用。方法:通过shRNA基因沉默技术,构建Hsf1基因沉默的PLC/PRF5肝癌细胞株。采用Western blot检测PLC/PRF5肝癌细胞Hsf1、p53和Rb蛋白的表达。通过四甲基偶氮唑盐(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)法、平板克隆实验和细胞周期的检测,观察PLC/PRF5细胞株的增殖情况。结果:shRNA-Hsf1能有效地沉默Hsf1在PLC/PRF5细胞中的表达;shRNAHsf1能有效阻滞细胞周期于G1期,抑制PLC/PRF5细胞的生长速度和细胞克隆形成率;Hsf1基因沉默可上调PLC/PRF5细胞p53和Rb蛋白的表达。结论:Hsf1基因沉默可通过上调p53和Rb蛋白的表达抑制肝癌细胞株PLC/PRF5的增殖。
- 蒋杞英张智王明丽马远方
- 关键词：热休克转录因子1肝癌细胞P53RB
- FILIP-1L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2016年
- 目的:表达、纯化GST-FILIP-1L融合蛋白,制备FILIP-1L多克隆抗体。方法:pGEX-4T3-FILIP-1L重组质粒转化E.coliBL21大肠杆菌,IPTG诱导GST-FILIP-1L融合蛋白表达,Glutathion Sepharse 4B纯化GST-FILIP-1L融合蛋白。将纯化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备FILIP-1L多克隆抗体,用ELISA方法检测多克隆抗体效价,Western blot检测多克隆抗体与FILIP-1L蛋白、细胞转染FILIP-1L蛋白及细胞FILIP-1L蛋白的结合能力。结果:在大肠杆菌中诱导出高表达的FILIP-1L融合蛋白,经Glutathion Sepharse 4B纯化后免疫新西兰大耳白兔,获得了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,亲和层析获得纯度较高的多克隆抗体,WB检测显示多克隆抗体能够与FILIP-1L蛋白、293细胞转染FILIP-1L蛋白及肝癌细胞FILIP-1L蛋白结合。结论:成功表达、纯化了GST-FILIP-1L融合蛋白,制备了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,为研究FILIP-1L蛋白生物学功能提供了有用的实验工具。
- 都景芳顿国庆张舒曼褚留杰李淑莲胡延忠马远方
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- Hsf1在DEN诱导小鼠急性肝损伤中的表达及活性变化被引量：1
- 2020年
- [目的]观察Hsf1在二乙基亚硝胺(DEN)诱导急性肝损伤组织中的表达及活性变化。[方法]选取8周龄C57BL/6J小鼠,随机分为3组:对照组、DEN损伤24 h组及DEN损伤48 h组。DEN损伤组小鼠腹腔注射二乙基亚硝胺(20mg/kg)24 h或48 h,建立急性肝损伤模型;对照组小鼠腹腔注射同体积PBS溶液。试剂盒检测小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性。HE染色检测小鼠肝组织病理变化。提取小鼠肝组织蛋白,Western blotting检测肝组织Hsf1及其调控蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp25蛋白表达。[结果]DEN损伤24 h组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性分别较对照组升高574.97%、86.67%、174.49%(P<0.05)。DEN损伤48 h组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶活性分别较对照组升高665.63%、95.33%、194.90%(P<0.05)。HE染色显示,DEN损伤小鼠肝脏细胞排列紊乱、水肿,肝组织点状及灶性坏死,伴有炎性细胞浸润。Western blotting检测发现,DEN损伤24 h组及DEN损伤48 h组肝组织Hsf1表达较对照组明显增多,同时Hsf1调控蛋白Hsp70、Hsp90及Hsp25表达水平均较对照组明显增高。[结论]二乙基亚硝胺可诱导小鼠急性肝损伤组织中Hsf1表达增加,转录活性增高。
- 张舒曼董烁李淑莲
- 关键词：肝损伤热休克转录因子1二乙基亚硝胺
- 热休克转录因子1蛋白在人肝细胞癌组织中的表达及临床意义被引量：3
- 2012年
- 目的探讨热休克转录因子1（HSFl）蛋白在人肝细胞癌组织中的表达及临床意义，并推测HSF1在肝细胞癌发生、发展中的可能分子机制。方法收集2006年3月至2007年3月第四军医大学西京医院67例行手术切除的肝细胞癌组织，以及21例因肝血管瘤行手术切除的部分正常肝脏组织，采用免疫组织化学法检测肝细胞癌及正常肝脏组织中HSF1蛋白及热休克蛋白70（ttSP70）的表达，分析HSF1蛋白与患者临床病理特征及预后之间的关系，并根据HSF1蛋白与HSP70表达情况的相关性分析推测HSF1在肝细胞癌发生、发展中的可能分子机制。不同组织中HSF1蛋白阳性率的分析以及肝细胞癌中HSF1蛋白阳性表达率与各临床病理资料的关系采用×2检验及Fisher确切概率法，HSF1蛋白与HSP70在肝细胞癌中表达的相关性采用Spearman相关性分析。采用Kaplan—Meier法绘制生存曲线，生存情况比较采用Log—rank检验。结果HSF1蛋白在肝细胞癌组织中的阳性率为69％（46／67），在正常肝脏组织中的阳性率为29％（6／21），两者比较，差异有统计学意义（X。=10．628，P〈0．05）。HSP70在肝细胞癌组织中的阳性率为57％（38／67），在正常肝脏组织中的阳性率为24％（5／21），两者比较，差异有统计学意义（X2=6．929，P〈0．05）。HSFl蛋白与HSP70在肝细胞癌组织中的表达呈正相关（r=0．319，P〈0．05）。HSFl蛋白的高表达与肝细胞癌的包膜完整与否、分化程度以及TNM分期有关（x1=5．935，9．762，5．159，11．267，P〈0．05）；而与患者性别、年龄、HBsAg水平、AFP水平以及是否存在门静脉癌栓无关（x2=0．822，0．172，2．059，P〉0．05）。HSF1蛋白阳性和阴性表达者的生存时间分别为（21．4±1．9）个月和（29．8±2．7）个月，两者生存率比较，差异有统计学意义（X2=4．276，P〈0．05）。结论HSFl与肝细胞癌的发生、发展�
- 卢鹏李霄窦科峰党政胡延忠马远方宋振顺
- 关键词：肝肿瘤热休克转录因子1热休克蛋白70
- 肝细胞癌患者外周血HSF1基因表达的检测及应用价值
- 2012年
- 目的:建立检测HSF1 mRNA的real-time PCR的方法,了解肝细胞癌患者外周血中HSF1的表达水平及其与各临床病理特征之间的关系。方法:利用real-time PCR的方法检测20例肝细胞癌患者及20例正常人群外周血中HSF1 mRNA的表达量。结果:肝细胞癌患者外周血中的HSF1 mRNA表达量显著高于正常人群(P<0.05);肝细胞癌患者外周血中HSF1 mRNA的表达水平在不同性别、肿瘤大小、门静脉侵犯情况、HbsAg水平及AFP水平的患者中的差异无统计学意义(P>0.05);在不同病理分化程度、TNM分期的患者中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:real-time PCR技术可以成功检测外周血中HSF1 mRNA的表达量,HSF1可能与肝细胞癌的发生发展密切相关。
- 卢鹏冯薇李霄杨平寇明文胡延忠宋振顺
- 关键词：肝细胞癌外周血热休克转录因子1实时定量PCR
