辽宁省教育厅科学基金(L2010579)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：安春丽王雪莲刘彤栾和芝赵雨杰更多>>
- 相关机构：中国医科大学秦皇岛港口医院中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Tetramer技术检测人乳头瘤病毒抗原特异性T细胞条件的优化
- 2010年
- 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌发生的首要因素。针对病毒早期蛋白E6的特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)在清除HPV感染细胞和病毒转化形成的肿瘤细胞过程中发挥重要作用,因此检测体内抗原特异性CTL的频数和功能有助于了解病毒感染者或宫颈癌患者体内的特异性细胞免疫反应。利用加载HPV16 E6表位抗原肽(E6 133-142;HNIRGRWTGR)的HLA-A6801四聚体(Tetramer),即HPV16 E6 133-142/HLA-A6801-PE四聚体,通过检测混有HPV特异性CTL的PBMC标本,优化Tetramer染色的实验条件,探讨染色的最佳温度及Tetramer浓度。结果显示,染色温度(4℃、室温及37℃)对Tetramer与CTL的结合无明显影响。Tetramer稀释度为1∶1 600时,HPV特异性CTL荧光强度保持高水平,且非特异性染色少,为最佳染色浓度。研究结果为进一步检测HPV感染者或宫颈癌患者体内抗原特异性的CTL打下基础。
- 王雪莲王冬冬谷秋红李维安春丽
- 关键词：人乳头瘤病毒四聚体T淋巴细胞
- 肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定。pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST。表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功。SDS-PAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST。结论成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统。
- 王雪莲栾和芝刘彤赵雨杰安春丽
- 关键词：肺孢子菌嵌合基因重组融合蛋白
