福建省农科院青年科技人才创新基金(2004J067)
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王水良兰风华邓小军王志红庄岳鹏更多>>
- 相关机构：南京军区福州总医院漳州市中医院解放军第175医院更多>>
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- hLRH-1不同变异体在人胚胎组织的表达谱(英文)
- 2008年
- 目的分析hLRH-1不同变异体在人胚胎组织的表达谱。方法通过设计特异引物,并经常规RT-PCR方法检测hLRH-1v1和hLRH-1在三例引产胎儿各组织中的表达情况;同时以实时定量RT-PCR法分析总hLRH-1的mRNA的相对表达谱。结果检测的结果显示,hLRH-1v1在人类各不同发育阶段的胎儿组织广泛表达,而hLRH-1则仅局限于肝、胃、小肠和胰腺组织。结论hLRH-1v1和hLRH-1在人胎儿组织表达谱的差异提示它们在早期胚胎发育中可能起不同的作用。
- 邓小军曾健兰风华王水良
- 关键词：实时定量RT-PCR胎儿
- 人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达
- 2007年
- 目的:初步分析人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达。方法:常规RT-PCR法分析hLRH-1v1和hLRH-1在肝癌等多种肿瘤组织和HepG2等肿瘤细胞系中的表达情况,实时定量PCR法分析hLRH-1v1,hLRH-1和hOct4在HepG2,SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系的表达水平。结果:hLRH-1v1的表达见于所有检测的12种类型肿瘤和8种恶性肿瘤细胞系,hLRH-1的表达则仅在12种类型肿瘤中的6种肿瘤组织中可检测到,但8种恶性肿瘤细胞系均为hLRH-1阳性表达;在HepG2,SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系中hLRH-1v1和hOct4的表达呈正相关。结论:hLRH-1v1在肿瘤中广泛表达,可能在维持肿瘤干细胞的自我更新中发挥重要作用。
- 邓小军王水良兰风华柯龙凤黎成金曾志勇
- 关键词：变异体肿瘤基因表达分析
- siRNA表达载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制研究被引量：3
- 2005年
- 目的探讨经载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制效率。方法针对周期蛋白E1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pSilencer1.0-U6载体上构建siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入BEL-7402肝癌细胞株。RT-PCR分析周期蛋白E1表达抑制率;流式细胞术测细胞周期S期和凋亡细胞比率;MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线。结果重组载体介导肝癌细胞BEL-7402周期蛋白E1抑制率达62%;转染重组质粒32h测得S期细胞为19%。空载体转染对照为27%;转染重组质粒96h流式细胞术测得凋亡细胞为13.1%,高于空载体对照的6.6%;细胞生长曲线作图表明,重组载体转染组细胞生长明显减缓。结论肝癌细胞周期蛋白E1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰成功抑制,进而导致细胞生长受抑并诱导凋亡;本研究为探索肝癌的RNAi治疗提供了初步的实验依据。
- 朱青川高建平兰风华王水良
- 关键词：肝肿瘤RNA干扰细胞周期蛋白EBEL-7402细胞
- 肝癌细胞系BEL-7402中siRNA表达载体介导靶向c-myc基因的RNA干涉实验研究
- 目的探索经载体介导的RNA干涉对肝癌细胞c-myc基因表达抑制的可行性。方法应用网络在线软件设计并合成两条靶向癌基因c-myc的RNA干涉模板片段,分别将其连接至pSilencer 1.0-U6载体上构建siRNA真核表...
- 黄清流连云宗兰风华王水良
- 关键词：RNA干涉基因表达抑制
- 文献传递
- 肝癌细胞系BEL-7402中siRNA表达载体介导靶向c-myc基因被引量：2
- 2006年
- 目的:探索经载体介导的RNA干涉对肝癌细胞cmyc基因表达抑制的可行性。方法:设计并合成2条靶向癌基因cmyc的RNA干涉模板片段,分别将其连接至pSilencer1.0U6载体上构建siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入BEL7402肝癌细胞株。半定量RTPCR分析cmyc基因的表达抑制效率,以及cmyc基因表达下调细胞中CDK4、hTERT和Gadd45β基因表达的改变。结果:获得2个能在细胞内有效转录生成靶向cmyc基因siRNA的重组载体pSicmyc1和pSicmyc2;其中pSicmyc2可有效介导肝癌细胞BEL7402cmyc基因的表达抑制,抑制率高达90%以上;在cmyc基因经RNAi抑制的细胞中,CDK4和hTERT基因的表达分别下调至85%和57%;而Gadd45β的表达上调约110%。结论:肝癌细胞BEL7402中cmyc基因的表达可被载体介导诱发的RNA干涉有效抑制,进而导致细胞中与增殖和凋亡相关基因的表达改变。
- 黄清流连云宗兰风华王水良
- 关键词：基因BEL-7402细胞肝癌
- 人甲胎蛋白基因启动子驱动siRNA表达载体的构建及其在HepG2细胞中RNA效应的初步鉴定
- 2008年
- 目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencer1.0-U6中以置换其U6启动子;依据人hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量RT-PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。以人hLRH-1为报告基因,本研究发现所建的RNAi载体系统可在表达AFP的细胞HepG2中有效诱导靶基因表达下调,抑制率约达85%;同时引致hLRH -1调控下游靶基因CyclinE1与Oct4的表达相应下调。结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的细胞HepG2中有效介导靶基因的RNAi效应,为临床肝癌细胞靶向的基因特异性RNAi治疗提供了初步的实验依据。
- 王水良庄岳鹏王志红兰风华
- 关键词：靶向治疗RNA干扰
- hLRH-1调控结肠腺癌细胞SW480增殖的分子机制被引量：1
- 2007年
- 目的初步探讨人核受体hLRH-1在结肠癌发生发展中可能的生物学功能。方法真核表达质粒pcDNA3-hLRH-1经脂质体介导转入SW480细胞中,RT-PCR和Western blot法分别检测外源基因mRNA及蛋白水平的表达;MTT法分析hLRH-1过表达对SW480细胞生长增殖的影响,同时行实时定量RT-PCR法分析细胞生长增殖相关基因Cyclin E1和Cyclin D1、以及凋亡调控相关基因Pten和Rb1的表达。结果hLRH-1过表达的SW480细胞增殖速度明显加快,同时其Cyclin E1基因的表达显著增高,而Pten和Rb1在hLRH-1过表达的SW480细胞中均呈明显的表达下调。结论外源hLRH-1的表达既通过上调Cyclin E1基因的表达而促进SW480细胞增殖,还可能通过调节Pten和Rb1基因的表达而参与细胞凋亡的调控。
- 郑英梦王水良兰风华
- 关键词：结肠癌外源基因表达增殖
- 稳定整合靶向细胞周期蛋白E1基因RNA干涉载体的肝癌细胞系的建立
- 2006年
- 目的探讨经载体介导的RNA干涉法建立周期蛋白E1表达稳定抑制细胞系的可行性。方法将源自pSSC-9质粒的neo基因亚克隆至干涉载体pSilencer 1.0-U6以构建稳定干涉载体pSineo,再将其与合成的靶向周期蛋白E1基因特定的RNA干涉模板片段连接,重组载体经脂质体LipofectamineTM2000介导法转染肝癌细胞株BEL-7402;转染细胞经G418筛选,常规抽提G418抗性克隆细胞的基因组DNA并行PCR法鉴定外源导入载体的稳定整合情况。结果酶切及测序鉴定结果均表明,重组载体pSineo-cyc E1符合预期设计;PCR鉴定结果显示,稳定筛选出的6个克隆均整合有靶向周期蛋白E1基因的干涉载体。结论本研究建立了6个稳定整合有靶向细胞周期蛋白E1基因RNA干涉载体的肝癌细胞系,为肿瘤的癌基因靶向干涉治疗作了有益探索。
- 朱青川李慧忠兰风华王水良
- 关键词：RNA干涉肝细胞癌
- 人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencerl．0-U6中以置换其U6启动子;依据hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。所建的RNAi载体系统可在表达AFP的HepG2细胞中有效诱导靶基因hLRtH-1表达下调,抑制率约达85%;同时调控hLRH-1下游靶基因CyclinE1与Oct 4的表达相应下调。结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的HepG2细胞中有效介导靶基因的RNAi效应。
- 王水良庄岳鹏王志红兰风华
- 关键词：甲胎蛋白类RNA干扰HEPG2细胞
- 人肝受体同系物1（hLRH-1）不同变异体在人胚胎组织的表达谱
- 2009年
- 目的分析人肝受体同系物1（hLRH-1）不同变异体在人胚胎组织的表达谱。方法通过设计特异引物，并经常规RT—PCR方法检测hLRH-lvl和hLRH-1在三例引产胎儿各组织中的表达情况；同时以实时荧光定量RT—PCR法分析总hLRH-1的mRNA的相对表达丰度。结果hLRH—lvl在人类各不同发育阶段的胎儿组织广泛表达，而hLRH-1则仅局限于肝、胃、小肠和胰腺组织。结论hLRH—lvl和hLRH-1在人胎儿组织表达谱的差异提示它们在早期胚胎发育中可能起不同的作用。
- 邓小军曾健兰风华王水良
