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醋酸酐对太平洋白对虾(Penaeus vannamei)β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制动力学(英文): 2006年; β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶与太平洋白对虾的食物消化吸收、蜕壳生长有着密切关系.海水里存在的有机污染物将影响酶生理功能,从而进一步影响虾的正常蜕壳,严重将导致对虾的死亡.醋酸酐是常用的有机溶剂,故本文应用动力学方法研究醋酸酐对太平洋白对虾β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶催化pNP-NAG水解时酶活力的变化规律.表明在醋酸酐浓度低于20.0mmol/L,酶的抑制作用是可逆的,测得醋酸酐对酶抑制的IC50为9.0mmol/L.用双倒数作图法测定醋酸酐与游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的结合平衡常数.结果显示,醋酸酐是酶的非竞争性抑制剂.用底物反应动力学方法观测在不同底物浓度下酶在0.0、3.0、6.0、9.0、12.0mmol/L的醋酸酐溶液中的失活过程,分别测定了酶的微观失活速度常数k+0及复活速度常数k-0,结果表明醋酸酐对酶的影响是快速结合再缓慢失活的过程.比较微观失活速度常数k+0及复活速度常数k-0,结果显示,在高浓度的醋酸酐溶液中,酶将完全失活.; 谢晓兰黄乾生韩鹏石艳陈清西; 关键词：动力学醋酸酐

不同生长期凡纳滨对虾肝胰腺NAGase的基本性质变化被引量：15: 2006年; 凡纳滨对虾[Lifopenaeusvannamei（Boune1931）]N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（β-N—acetyl-D-glucosaminidase，简称NAGase。EC3．2．1．52）与周期性蜕壳和生长密切相关．我们研究了凡纳滨对虾肝胰腺中该酶的活力与部分性质在不同生长期的变化，结果表明：在不同生长期该酶活力有较大的变化，幼体虾的酶活力为每mg蛋白40U，随着虾的生长，酶活力迅速下降，当养殖到第6周时，酶活力下降到每mg蛋白18U，达到最低点．随后，酶活力随着虾的长大快速增大，当养殖到成虾时，酶活力达到最高值，为每mg蛋白58U，不同生长期的酶，其最适pH均在5．5～6．0之间，最适温度由原来的34℃改变为37℃，同时测定不同生长期酶的动力学参数（Km、Vm）、酶促反应活化能（En）及对Cu^2＋、Zn^2＋和Hg^2＋的敏感性并进行了相应的比较．; 黄乾生谢晓兰石艳朴顺金陈清西; 关键词：凡纳滨对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶

不同养殖期的凡纳滨对虾外壳膜NAGase基本性质比较被引量：11: 2006年; 以不同生长期的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannam ei)的外壳为材料,分离提取外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.52,NAGase),测定分析不同生长期的外壳膜NAGase的酶比活力及其性质的变化.结果表明:不同生长期的酶活力、最适温度、催化反应的动力学参数(Km、vm)、活化能等均存在差异.不同生长期酶的最适pH均为5.5.不同生长期的对虾外壳膜NAGase对Cu2+、Zn2+和Hg2+的敏感性也不同.Cu2+对养殖8周对虾外壳膜NAGase的激活作用最为显著,可以使酶活力提高到400%.Zn2+对不同生长期的酶活力均有抑制作用,但对成体对虾酶抑制作用最为显著,可以使酶活力下降80%.Hg2+对各个生长期的酶活力影响效果也不一样,当浓度为0.1 mmol/dm3时,仅对养殖6、8、9周的对虾的酶有激活作用,当Hg2+浓度为1.0mmol/dm3时,五个生长期的虾皮NAGase活力均受到不同程度抑制.; 朴顺金谢晓兰黄乾生谢进金陈清西; 关键词：海洋生物凡纳滨对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶

产物类似物对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响被引量：9: 2004年; 以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp β D GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为:NAG>gla>glu>suc>fru.研究抑制作用动力学,结果表明:NAG对酶的抑制作用表现为反竞争型,其抑制常数KIS为11.4mmol/L/;gal、glu、fru对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI分别为0.709、0.747和2.94mol/L;suc对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI=KIS=2.58mol/L.; 谢晓兰王勤陈清西; 关键词：南美白对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶养殖

乙醇对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响被引量：7: 2004年; 以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究乙醇对该酶的活力与构象影响.结果表明,浓度低于22%(体积比)的乙醇对该酶活力有明显的激活效应;乙醇浓度为8%时,达到最大激活效应,酶活力为纯酶的180%.动力学研究表明,在30%浓度范围内,乙醇对酶活性的激活及抑制作用均是可逆的.乙醇低浓度下,Km值与Vmax值随乙醇浓度增大而增大;随着乙醇浓度的进一步升高,Km值保持不变,Vmax值则出现下降.紫外光谱与荧光光谱分析表明,低浓度乙醇对N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶的构象产生轻微的影响,而高浓度乙醇则使酶的整体构象趋于松散.由此可以推断,乙醇对该酶的活力影响是微扰酶活性中心产生激活效应与引发整体变构失活效应的共同作用结果.; 王悦谢晓兰王勤陈清西; 关键词：乙醇南美白对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶构象

太平洋白对虾(Penaeus vannamei)β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶在二甲亚砜溶液中的失活动力学(英文)被引量：4: 2005年; 应用动力学方法研究了太平洋白对虾(Penaeusvannamei)β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶在二甲亚砜溶液中以pNP-β-D-GlcNAc为底物时酶活力的变化规律.表明酶在DMSO浓度低于4.20mol/L,酶的失活过程是可逆的,DMSO并不造成酶绝对量的减少,仅对酶的活力发生可逆的下降.测得DMSO对酶抑制的IC50为1.2mol/L.观测了在不同底物浓度下NAGase在0、0.35、0.70、1.05、1.40、1.75mol/L的DMSO溶液中的失活过程,分别测定了游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的微观失活速度常数k+0和k′+0比较结果(k+0值远远大于k′+0)表明,在DMSO溶液中游离酶比酶-底物络合物更易失活,即底物的存在对于酶被DMSO的失活具有明显的保护作用.随着DMSO浓度的增加,游离酶的逆向微观复活速度常数k-0却不断降低,说明在高浓度DMSO环境中,NAGase可逆恢复的能力逐渐微弱.; 龚敏陈清西林建城谢晓兰; 关键词：失活动力学二甲亚砜

氨基酸对凡纳滨对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响被引量：8: 2006年; 选用甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)及精氨酸(Arg)等18种氨基酸为效应物,研究它们对凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶催化pNP-NAG水解反应的影响。结果表明,非极性氨基酸及不带电荷的极性氨基酸对NAGase没有明显的抑制作用;带正电荷的碱性氨基酸L-His及Lys有轻微的激活作用,而Arg则先激活后抑制;带负电荷的酸性氨基酸Asp及Glu有明显的抑制作用,其IC50分别为20,28mmol/L。研究Asp,Glu对酶催化pNP-NAG水解反应的抑制作用机理,并测定其抑制常数。研究表明Asp及Glu的抑制作用均表现为可逆效应,抑制类型均为竞争性抑制,其抑制常数KI值分别为9.50mmol/L和11.06mmol/L。; 谢晓兰王悦陈清西; 关键词：N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶氨基酸

金属离子对凡纳对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响被引量：13: 2005年; 本文报道了金属离子对凡纳对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (EC3. 2. 1. 52)活力的影响.结果表明,Li+、Na+和K+等对该酶活力没有任何效应.Ca2+、Mg2+、Mn2+对该酶有激活作用,而Ba2+、Al3+、Fe3+、Zn2+、Co2+、Cd2+、Hg2+、Pb2+和Cu2+对该酶活力均具有一定的抑制作用.以Hg2+的抑制作用最显著,Hg2+含量为 1. 5mmol/dm3 时可使酶活力完全丧失.进一步研究Zn2+的抑制作用动力学,结果表明:Zn2+对该酶的抑制作用属可逆的非竞争性类型,抑制常数为11. 95mmol/dm3.; 林建城王悦谢晓兰龚敏陈清西; 关键词：海洋生物 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶凡纳对虾金属离子

有机溶剂对南美白对虾N-乙酰-βD-氨基葡萄糖苷酶活力的影响被引量：18: 2005年; 研究了几种有机溶剂对南美白对虾(Penaeus vannamei)N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、乙二醇和丙三醇对NAGase的作用均表现为低浓度时对酶有激活作用,随着浓度的升高,激活作用减弱并速转为抑制作用;二甲亚砜和二氧六环对酶的抑制作用呈现明显的浓度效应,随浓度增大酶活力迅速下降.进一步研究二甲亚砜的抑制作用动力学,结果表明:二甲亚砜对酶的抑制作用是一种可逆过程,抑制机理表现为混合型抑制类型,抑制常数KI=0.27 mol/L,KIS=2.05 mol/L.; 林建城谢晓兰龚敏王悦陈清西; 关键词：南美白对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶有机溶剂酶活力动力学

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福建省农科院青年科技人才创新基金(2004J054)

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