国家自然科学基金(81101849H1617)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张辰宇陈熹姚玮艳冯慧王亚雷更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院安徽医科大学第一附属医院南京大学更多>>
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- 微小核糖核酸-148a调控胰腺癌细胞中ErbB3的表达
- 2013年
- 目的 在胰腺癌细胞中寻找并验证微小核糖核酸（miRNA）-148a的下游调控基因.方法 运用生物信息学方法预测miRNA-148a调控的目的基因,构建含目的基因的3’端非翻译区（3＇-UTR）的荧光素酶报告质粒,用脂质体转染miRNA-148a类似物和抑制剂进入胰腺癌细胞BXPC-3,检测荧光素酶活性,确定miRNA-148a是否直接与靶基因3’-UTR结合.同时改变胰腺癌细胞BXPC-3中miRNA-148a表达水平,用Western免疫印迹法在蛋白水平检测靶基因ErbB3表达的变化.统计学处理采用单因素方差分析.结果 生物信息学发现ErbB3和miRNA-148a上有一个保守的结合靶位点.miRNA-148a直接与ErbB3的3’-UTR结合,使荧光素酶活性下降到阴性对照的[-（25.00±4.70）％,F=4.66,P＜O.01]；过表达miRNA-148a后,BXPC-3细胞中ErbB3蛋白水平灰度值下降到阴性对照的[（26.16±4.69）％,F=6.563,P＜O.05].结论 miRNA-148a在胰腺癌细胞株BXPC-3中直接靶向并调控ErbB3的表达.
- 冯慧姚玮艳陈熹张辰宇王亚雷
- 关键词：微RNAS免疫印迹法
- 胰腺癌循环微小核糖核酸载体的研究被引量：1
- 2014年
- 目的 寻找胰腺癌循环微小核糖核酸（miRNA）的载体.方法 常规培养、传代胰腺癌细胞SW1990、BxPC3,采集6例胰腺癌患者及6例健康体检者（对照组）的血清.应用梯度离心方法获取血清和细胞培养上清中的微囊泡（MV）.采用蛋白质印迹法检测RNA诱导沉默复合体的核心元件Ago2蛋白和MV的标志性蛋白CD63,采用荧光定量PCR方法检测MV包裹的和游离的miRNA.结果 胰腺癌细胞株培养上清的MV中含有Ago2、CD63蛋白.胰腺癌组、对照组的血清及MV中均存在miR-20a、miR-21、miR-24、miR-25、miR-191、miR-483-5p,但以MV包裹的量较多,且胰腺癌组MV包裹的miRNA量与对照组不完全一致,其中miR-20a、miR-24、miR-191分别为对照组的（2.93±0.29）、（2.73±0.46）、（2.39±0.51）倍,差异均有统计学意义（F值分别为75.97、25.80、12.94,P＜0.05或＜0.01）.结论 MV是胰腺癌循环miRNA的主要载体.
- 冯慧王亚雷陈熹张辰宇袁耀宗姚玮艳
- 关键词：胰腺肿瘤
- 胰腺癌细胞与其基质成纤维细胞相互影响的研究被引量：2
- 2015年
- 目的观察胰腺癌细胞系BXPC-3、SW1990能否促进其基质中正常成纤维细胞(NFs)活化成癌相关成纤维细胞(CAFs)及其活化的可能机制,以及活化后的CAFs对BXPC-3、SW1990细胞迁移能力的影响。方法采用差异贴壁法分选出野生型小鼠C57胰腺组织中的NFs,后运用非接触式共培养方法将BXPC-3、SW1990与NFs共培养,共培养后采用免疫荧光方法检测共培养前后NFs中CAFs标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)的表达变化,以确定其是否活化,并且运用qRT-PCR法检测目前较公认的胰腺癌中升高的12种miRNAs在共培养前后的NFs中含量变化;采用transwell法观察活化前后的NFs对BXPC-3、SW1990迁移能力的影响。结果免疫荧光检测表明,与BXPC-3、SW1990共培养后,NFs中α-SMA、FAP表达均显著升高;同时,在所选取的12种miRNAs中,与BXPC-3、SW1990共培养后,NFs中miR-155含量均有明显升高。BXPC-3、SW1990在CAFs基质环境中迁移能力大大提高。结论胰腺癌细胞能够促进其周围NFs活化成CAFs,其活化可能与胰腺癌中某些特定的miRNA分泌进入到NFs中有关,活化后的CAFs又可以反过来促进胰腺癌细胞的迁移。
- 苏娇娇冯慧姚玮艳陈熹张辰宇王亚雷
- 关键词：胰腺癌癌相关成纤维细胞MIRNAS迁移
