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家蚕蛹期特异基因BmCP283的启动子活性分析: 2013年; 前期研究鉴定了家蚕蛹期特异表达基因BmCP283,并克隆了翻译起始位点上游长度为2 004 bp的启动子区序列BmCP283P。用PCR方法扩增了BmCP283P启动子9个不同区域的片段,构建由其驱动的荧光素酶基因报告载体,并转染BmE细胞进一步分析该启动子的活性。结果显示,BmCP283P启动子序列由上游2 004 bp递减至1 743 bp,以及由1 608 bp递减至1 328 bp,其活性显著增强;而从1 328 bp递减至1 189 bp,其活性则显著减弱。这暗示2 004～1 743 bp和1 608～1 328 bp区域可能存在抑制BmCP283P启动子活性的调控元件,而1 328～1 189 bp区域可能存在启动子活性增强元件。另外,蜕皮激素(20E)诱导能增强BmCP283P启动子的活性,暗示20E参与了BmCP283基因的转录调控。研究结果不仅有助于阐明BmCP283基因的转录调控机理,也为人为调控家蚕蛹期发育提供了潜在的可用启动子。; 康丽霞孟勐王永虎唐林彭健钱文良程道军夏庆友; 关键词：家蚕启动子蜕皮激素

家蚕脂肪酶1(Bmlipase-1)的原核表达和抗体制备及在转基因增量表达系统中的检测被引量：2: 2012年; 家蚕肠液中的脂肪酶1(Bmlipase-1)对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)具有明显抑制作用,建立的增量表达Bmlipase-1的转基因家蚕品系(LI-A)对BmNPV的抵抗力得到显著增强。为了分析LI-A品系幼虫肠液中Bmlipase-1的含量变化,通过原核表达、纯化Bmlipase-1蛋白,并免疫家兔制备Bmlipase-1的多克隆抗体,对LI-A品系和正常家蚕品种大造4龄、5龄起蚕肠液中的Bmlipase-1含量进行Western blotting检测。结果显示Bmlipase-1在LI-A品系幼虫肠液中的含量明显高于正常家蚕品种大造,证明LI-A品系对BmNPV的抵抗力提高是因为肠液中Bmlipase-1的含量增加。; 金盛凯蒋亮林平孙薇程廷才夏庆友; 关键词：家蚕核型多角体病毒原核表达转基因家蚕

家蚕感受神经膜蛋白基因SNMP1的序列分析及原核表达被引量：1: 2013年; 昆虫的感受神经膜蛋白SNMP1(sensory neuron membrane protein)可能是一种与嗅觉相关的功能蛋白。家蚕感受神经膜蛋白基因SNMP1(GenBank登录号:NM_001043721.1)由8个外显子和7个内含子组成,ORF长度为1 569 bp,编码522个氨基酸残基,蛋白质分子质量为58.76 kD,理论等电点为8.58,具有6个保守半胱氨酸残基、3个预测的N连接糖基化位点(67 NXT、229NXS/T、440 NXT)、1个CD36结构域。跨膜结构域预测发现家蚕SNMP1具有位于N端和C端的2个跨膜结构域以及1个大的胞内环,与果蝇的SNMP1跨膜拓扑结构正好相反;信号肽分析发现前24个氨基酸残基为信号肽序列,且11～24 aa序列片段位于第1个跨膜结构域内。组织表达谱分析显示家蚕SNMP1基因在成虫触角特异表达,在成虫的其它组织和幼虫触角中无表达。应用原核表达系统对家蚕SNMP1基因CDS序列和去掉两端跨膜结构域的截短序列进行体外表达,SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示目的基因已成功地在大肠杆菌细胞表达,为进一步研究家蚕SNMP1在触角的细胞定位及功能打下了基础。; 陈全梅马振刚王晓欢孙艳慧王鑫代云香赵萍; 关键词：家蚕表达谱分析原核表达

近现代蚕桑业在美国加利福利亚州的兴衰启示录被引量：5: 2013年; 从19世纪中期到20世纪中期的百年间,蚕桑业在美国加利福利亚州(加州)经历了兴起、发展和衰落的过程。本文基于美国史料的记载与实地调查,回顾了这段蚕桑业演变历史,分析了特殊时期的市场需求、个人和政府的行为以及行业内外的竞争等对加州近现代蚕桑业的影响。以史鉴今,讨论了蚕桑丝绸产业发展中值得关注和重视的问题。; 王菲夏庆友; 关键词：近现代史蚕桑业

家蚕GH18家族几丁质酶的系统进化和BmChi的时期表达分析被引量：4: 2012年; 昆虫GH18家族几丁质酶主要参与昆虫蜕皮、细胞增殖和免疫等生理过程。为了系统开展家蚕GH18家族基因的研究,通过多物种几丁质酶的系统进化分析鉴定了8个家蚕GH18家族成员,并根据含有糖苷水解酶18(Glyco_18)催化结构域和几丁质结合结构域的不同将其分为6类,其中,各物种的CHT5具有典型几丁质酶结构。家蚕GH18家族成员中,BmChiR-1具有5个Glyco_18催化结构域和6个几丁质结合结构域,其它7个成员均只有1个Glyco_18催化结构域,BmCHT12还有1个ChitnaseA_N端结构域。8个家蚕GH18家族成员的基因分布在7条染色体上。通过半定量RT-PCR调查家蚕CHT5基因Bm-Chi在家蚕各发育时期的转录表达模式,该基因在蜕皮、化蛹、羽化等发育时期均有高水平表达,推测BmChi在蚕体旧表皮几丁质的降解过程中发挥重要作用。; 高颂刘立会刘仕平王伟陆改夏庆友; 关键词：家蚕蜕皮几丁质酶系统进化基因表达

家蚕化蛹初期血液中卵黄原蛋白BmVg的纯化和鉴定被引量：1: 2014年; 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫血液中发现最早的蛋白质,对于昆虫的繁殖至关重要。以家蚕Vg基因(BmVg)的部分序列构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)菌株,在20℃条件下用0.6 mmol/L IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化得到家蚕卵黄原蛋白BmVg的肽蛋白。以BmVg肽蛋白为抗原制备的兔源多克隆抗体效价>1∶512 000。采用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析的纯化方法,从家蚕化蛹初期的血液中纯化获得天然的BmVg蛋白,并用制备的多克隆抗体进行Western blotting检测,鉴定此纯化的天然蛋白质为BmVg蛋白。建立的BmVg分离纯化技术将有助于进一步研究BmVg的合成、转运及利用机制。; 罗娟彭芷昕陈恩祥刘红玲杨从文沈关望张海燕侯勇林英夏庆友; 关键词：家蚕卵黄原蛋白原核表达分离纯化免疫印迹法

N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)对家蚕毒性的半致死剂量调查: 2013年; N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)是一种能诱导生物体产生随机点突变的烷化剂。为了完善利用MNU诱导家蚕突变的实验体系,用MNU处理家蚕品种大造的5龄第3天幼虫、化蛹第5天蛹、羽化当天的雄蛾及产后4～6 h的受精卵,通过Bliss法计算MNU对家蚕的半致死剂量(LD50)。结果显示MNU对不同发育时期家蚕的LD50值存在一定的差异:MNU对家蚕5龄第3天幼虫雌雄个体的LD50分别为28.735、20.157μg/头;对化蛹第5天蛹雌雄个体的LD50分别为56.466、54.672μg/头;对羽化当天的雄蛾的LD50为273.94μg/头;对产后4～6 h的受精卵的LD50为7 288.8μg/mL。实验数据表明,家蚕幼虫对MNU的毒性耐受能力差,蛾和卵的耐受能力较强;雌性个体对MNU毒性的耐受能力比雄性个体更强。; 林英杨从文谢建昌张海燕罗娟沈关望彭芷昕夏庆友; 关键词：家蚕半致死剂量化学诱变

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国家高技术研究发展计划(2011AA-100306)