国家重点基础研究发展计划(2002CB513100)
- 作品数：138 被引量：790H指数：14
- 相关作者：马丁卢运萍王世宣陈刚廖国宁更多>>
- 相关机构：华中科技大学武汉大学湖南大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学自动化与计算机技术更多>>
- 重组纤维连接蛋白多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力的抑制作用及机制被引量：6
- 2006年
- 目的研究重组纤维连接蛋白多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力抑制作用及其机制。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞用CFSE标记,经尾静脉注射接种小鼠,分别在6 h和24 h取肺组织作冰冻切片,观察肿瘤细胞在肺部聚集和对肺组织侵袭情况;接种15 d后解剖小鼠取肺,观察B16细胞在肺表面形成转移结节数量差异;观察CH50多肽对B16细胞结合纤维连接蛋白和纤维蛋白原的影响;RT-PCR法检测B16细胞中转移相关基因的表达水平;zymography法检测MMP-9水平。结果CH50多肽短时间作用于B16细胞,注射细胞6 h后肺组织荧光结节数显著减少;而作用较长时间,注射细胞24 h后肺组织荧光结节数减少更为明显。CH50多肽处理过的B16细胞在肺部形成转移结节明显减少。CH50多肽能够显著抑制B16细胞结合纤维连接蛋白及结合后的细胞铺展能力及B16细胞结合纤维蛋白原的能力,能够显著下调B16细胞cdc2、αv、β3、MMP-9等基因的表达与MMP-9分泌。结论CH50多肽能够抑制黑色素瘤B16细胞的侵袭能力,抑制瘤细胞与黏附分子结合,抑制转移相关基因的表达,从而使肿瘤细胞的生物学特征发生改变。
- 吴丰华张桂梅刘毅耿辉李东袁野肖晗冯作化
- 关键词：纤维连接蛋白黑色素瘤纤维蛋白原
- 硅壳包被的核壳型量子点荧光纳米颗粒的制备及其在细胞识别中的应用被引量：24
- 2005年
- 利用反向微乳液技术,以CdTe量子点为核,SiO2为壳,一步制备了表面带有氨基和磷酸基团的核壳型量子点荧光纳米颗粒.该颗粒水溶性好,大小均匀,有效改善了CdTe量子点的不稳定性,抗光漂白性能大大增强.结合纳米技术、生物技术与荧光标记技术,基于硅壳包被的核壳型量子点荧光纳米颗粒,成功实现了对肝实质细胞的识别.
- 李朝辉王柯敏谭蔚泓李军付志英王益林刘剑波羊小海
- 关键词：核壳型细胞识别包被硅肝实质细胞漂白性能
- 40岁以下妇女浸润性宫颈癌94例临床分析被引量：1
- 2008年
- 目的：探讨年轻妇女浸润性宫颈癌临床病理特征和治疗特点。方法：对2005年1月～2007年8月收治的40岁以下年轻浸润性宫颈癌患者94例的临床资料进行回顾性分析（研究组），并以同期治疗的41～73岁宫颈癌患者149例作为对照研究（对照组），分析两组的临床表现、病理特征和淋巴结转移情况及治疗特点。结果：40岁以下宫颈癌的比例高达38．68％，研究组初婚年龄、孕次、产次均较低（P〈0．01）。临床表现以接触性出血为主（P〈0．01），肿瘤类型以外生型为主（69．1％）。组织病理学类型及分级、淋巴结转移与对照组无显著性差异。临床分期以早期为主，Ⅰa～Ⅱa期共占76．5％（P〈0．01）。研究组94例中予以手术治疗75例，70例保留一侧或双侧卵巢并移位于同侧上腹部（P〈0．01），74例行盆腔淋巴结清扫，淋巴结转移率为18．92％，以闭孔淋巴结转移最常见。结论：宫颈癌有低年龄化趋势，应引起我们的高度重视。接触性阴道流血为年轻妇女宫颈癌的危险信号，应提高对年轻妇女宫颈癌的警惕性，治疗时应注意保留早期患者的卵巢功能。
- 王丹李双吴黎万艳奚玲卢运萍马丁
- 关键词：年轻妇女子宫颈癌浸润性
- DNA-PKcs短发夹RNA载体的构建及其表达
- 2006年
- 目的构建DNA-PKcsshRNA表达载体,观察该基因的抑制对A2780细胞增殖活性的影响。方法将针对人DNA-PKcs基因的不同部位设计的shRNA插入到真核表达质粒并转染人卵巢A2780细胞,RT-PCR和WesterBlot检测其对该基因mRNA和蛋白水平的抑制效率,MTT法测定DNA-PKcs基因的抑制对肿瘤细胞增殖活性的影响。结果 DNA测序分析证实DNA-PKcs shRNA表达载体pSIRENDNA-PKcs shRNA构建成功并在细胞中表达,转染重组载体的A2780细胞DNA-PKcs的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降;重组载体转染细胞增殖活性明显降低。结论成功构建DNA-PKcs shRNA表达载体为进一步研究DNA损伤修复基因DNA-PKcs奠定了基础;DNA-PKcs表达的抑制可能会导致肿瘤细胞增殖活性降低。
- 田晓予邢辉翁丹慧陈刚卢云萍马丁
- 关键词：短发夹RNA真核表达载体细胞增殖活性
- 卵巢癌拓扑替康耐药细胞株的建立及其生物学特性被引量：4
- 2004年
- 目的 :建立卵巢癌拓扑替康 (TPT)耐药细胞株 ,研究其生物学特性。方法 :用浓度梯度递增法建立卵巢癌TPT耐药细胞株。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测此耐药株对多种化疗药物的耐药指数 ;用细胞计数法描绘两株细胞的生长曲线并计算群体倍增时间 ;用流式细胞仪检测两株细胞的凋亡率及周期分布 ;荧光显微镜及透射电镜下观察亲本细胞、敏感细胞及耐药细胞的超微结构。结果 :历时 6个月建立了卵巢癌TPT耐药细胞株A2 780 /TPT。此细胞株对TPT及米托蒽醌 (MX)耐药 ,耐药指数分别为 2 5及 19,对喜树碱 (CPT)轻微耐药 ,耐药指数为 3,对其他多种化疗药物不交叉耐药。耐药细胞的生长速度比亲本细胞慢 (P <0 .0 5 ) ,且细胞凋亡率及G2 M期细胞比例较亲本细胞高 (P <0 .0 5 )。敏感细胞呈典型的凋亡形态特征 ,而耐药细胞凋亡核的数量明显减少 ,凋亡程度明显减轻 ,且仍有较多的细胞核形态正常。结论 :所建立的卵巢癌TPT耐药株具有耐药细胞的基本生物学特征 ,且该耐药模型稳定。
- 贾平李芳吴明富廖国宁卢运萍马丁
- 关键词：卵巢肿瘤拓扑替康耐药细胞流式细胞术
- 重组FN多肽CH50抑制黑色素瘤B16细胞体内转移的研究
- 2007年
- 目的研究重组纤黏连蛋白(FN)多肽CH50对小鼠黑色素瘤B16细胞体内转移的影响,以探讨CH50多肽抑制肿瘤转移的可能分子机制。方法体外培养黑色素瘤B16细胞,用荧光染料CFSE标记,接种脾脏后24h取脾、肝、肺做冰冻切片,观察肿瘤细胞在3种组织中的侵袭情况。从脾脏接种B16细胞,建立体内肿瘤转移动物模型,采用基于流体动力学的体内基因转染方法于小鼠体内表达CH50多肽,RT-PCR检测CH50 mRNA在肝组织的表达,Western印迹检测CH50多肽的表达。通过比较原位肿瘤结节及转移结节在数量、大小、分布上的差异及检测原位肿瘤组织中MMP-2、MMP-9表达差异,观察CH50多肽的治疗效果。结果注射24h后即可在脾脏形成荧光结节。pCH510质粒通过尾静脉注射后,可在肝组织中检测到CH50 mRNA及CH50多肽的表达。从脾脏接种B16细胞后第14天可在脾脏形成原发肿瘤,至第35天肝脏表面已形成转移瘤结节,成功建立了体内器官间(脾转肝)肿瘤转移动物模型。体内转染表达CH50多肽能抑制肿瘤生长、侵袭和转移,抑制原位肿瘤结节中MMP-2、MMP-9的表达。结论CH50多肽可以通过对MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用来抑制黑色素瘤B16细胞的成瘤能力和体内侵袭、转移能力。
- 朱明张桂梅黄波刘毅龚伟冯作化
- 关键词：肿瘤转移黑色素瘤基因表达
- 人乳头瘤病毒16型E5对人宫颈癌SiHa细胞恶性潜能的影响及其机制探讨
- 2008年
- 目的通过构建和筛选持续表达HPV16E5的细胞SiHa／16E5，探讨HPV16E5对宫颈癌SiHa细胞的作用及机理。方法利用pEGFP—C1构建HPV16型E5的正义全长真核表达载体并稳定转染SiHa细胞；利用RT-PCR和Western印迹技术检测转染前后E5和P21基因的mRNA和GFP＋E5和P2t蛋白的变化；利用MTT法检测SiHa细胞稳定转染后的增殖活性；利用软琼脂克隆形成和裸鼠成瘤实验分别在体内外验证了SiHa／16E5细胞的致瘤情况。结果稳定转染携带HPV16全长E5基因的质粒后，SiHa细胞中E5基因的mRNA和相应蛋白表达明显升高，而P21的表达则明显下调；MTF结果显示稳定转染后细胞的增殖活性与转染空载体细胞和未转染细胞比较明显增高（P〈0．05）；软琼脂克隆形成结果示：SiHa／16E5细胞组的可隆形成数为33．4±1．6，与空质粒对照组细胞（15．1±3．1）及未转染组细胞（16．3±2．5）比较差异有统计学意义（P〈0．05）；裸鼠成瘤实验结果显示，4个实验组在共20d的观察中，SiHa／16E5组裸鼠成瘤明显快于其他3个对照组（P〈0．05）。结论HPV16E5可降低宫颈癌SiHa细胞中P21的表达，加强宫颈癌SiHa细胞增殖和成瘤效应。
- 廖书杰邓东锐夏曦韩凌斐胡晓继白向阳王薇卢运萍王世宣马丁
- 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌
- siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,通过RT-PCR和Western Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线。观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果:成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3增殖活性(P<0.05)。结论:应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性,为肿瘤的生物学治疗提供新思路。
- 宋登新陈安民郭风劲谢柏臻廖晖祝文涛王江
- 关键词：高迁移率族蛋白1SIRNA人前列腺癌细胞
- 杂交捕获二代法检测高危型人乳头瘤病毒DNA的意义被引量：15
- 2006年
- 目的 探索杂交捕获二代（HC-Ⅱ）法检测高危型人乳头瘤病毒（HPV）DNA的意义．方法2003年3—6月在武汉同济医院妇产科采用HC-Ⅱ法检测150例门诊忠者的高危型HPVDNA，以阴道镜辅助活检为金标准，比较该方法的特异性、敏感性、准确性、约登指数及Kappa值。结果高危型HPV阳性率为14．67％，HC—Ⅱ法检测高危型HPVDNA的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数及Kappa值依次为：88．89％，91．78％，91．21％，72．73％，97．10％，0．8067，0．7444。假阳性率为6．59％，假阴性率为2．19％。结论HC-Ⅱ法检测高危型HPVDNA阴性预测值高，与金标准有较好的符合率，诊断价值高，为一种很好的早期筛查方法。
- 邬素芳易诚青徐茜王薇辜海念卢运萍马丁
- 关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒
- 分子信标荧光探针快速检测p21mRNA的新方法
- 2005年
- 1996年美国科学家首次设计并合成了一种新型荧光探针--分子信标(MB)[1],它是一种同时带有荧光基团和熄灭基团的发夹型单链DNA分子,能对目标DNA或RNA分子产生特异性的识别.由于具备了良好的检测性能,并且杂交以后无须分离多余的未杂交探针,MB在生物医学中得到了广泛的应用,如基因芯片的制备、痕量核酸的分离、活体细胞中mRNA的监测等[2].目前,检测mRNA的手段主要依靠RT-PCR,但是从反转录到PCR以及再次扩增是一个较麻烦的过程,实验成本高、周期长,也常出现假阳性和假阴性问题,影响了其准确性.
- 王炜李军王柯敏刘斌唐红星何丽芳
- 关键词：分子信标荧光探针生物医学
