国家自然科学基金(30170937)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
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- 过表达急性早幼粒白血病基因对膀胱肿瘤细胞UM-UC-2体外增殖影响
- 2006年
- 目的探讨急性早幼粒白血病基因(PML)对于膀胱肿瘤细胞株UM-UG2的体外增殖抑制作用及其诱导凋亡的作用。方法应用脂质体Lipofectamine2000建立稳定可诱导表达的膀胱肿瘤细胞株UM-UG-2,Western blot检测PML蛋白的表达情况；噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤生长情况；Giemsa染色、TUNEL和DNA ladder法检测肿瘤的凋亡情况。结果经100/μmol/L的ZnSO_4诱导表达后,与对照组比较PML组细胞生长明显受到抑制并且细胞周期停滞在G_1期。Giemsa染色提示过表达PML蛋白的细胞核浓染,细胞变圆,DNA ladder电泳提示转染PML细胞细胞在诱导表达后24h出现梯状凋亡特征的电泳条带,TUNEL显示转染PML细胞细胞核内蓝褐色颗粒,对照组未见明显凋亡特征性改变。结论建立了稳定的可诱导表达PML的膀胱肿瘤细胞株。同时,过表达PML可以抑制膀胱肿瘤细胞株UM-UC-2的体外增殖作用,诱导膀胱肿瘤细胞凋亡。
- 李磊贺大林何辉张林琳罗勇王新阳
- 关键词：膀胱肿瘤脱噬作用
- 急性早幼粒性白血病基因重组逆转录病毒载体构建及表达被引量：1
- 2005年
- 目的构建重组人早幼粒白血病基因(PML)的逆转录病毒载体及稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株。方法应用DNA重组技术,将PML基因亚克隆后连接在逆转录病毒载体pLXSN上,经酶切鉴定正确后,磷酸钙沉淀法转染到PA317包装细胞包装病毒,并计算重组病毒的滴度。聚合酶链反应(PCR)鉴定重组PML逆转录病毒能够成功感染靶细胞。激光共聚焦和Westernblot鉴定PML蛋白的表达。结果经酶切分析证实有大约2.1kb大小的片段插入到逆转录病毒载体中。PCR结果显示感染重组PML逆转录病毒的细胞可以扩增出304bp大小的片段。激光共聚焦显微镜显示,感染重组PML病毒的膀胱肿瘤细胞胞核内有散在的斑点样的绿色荧光亮点。Westernblot也发现感染PML组有大约90×103的特异性的蛋白条带。结论我们成功构建重组人PML基因的逆转录病毒载体并且建立了稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株。
- 李磊贺大林何辉王新阳南勋义
- 关键词：基因重组逆转录病毒病毒载体基因表达
- 生长抑制因子诱导膀胱肿瘤细胞凋亡的研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨生长抑制因子(PML)诱导膀胱肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法应用脂质体Lipofectamine2000分别将重组可诱导表达的真核表达载体PMEP4/PML和对照PMEP4空载体转染到膀胱肿瘤细胞系UMUC2中,300μg/ml潮霉素B筛选稳定表达PML的抗性克隆。激光共聚焦检测PML蛋白表达。DNAladder法检测肿瘤细胞凋亡。Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达情况。结果经5μmol/L的CdSO4诱导表达后,激光共聚焦显微镜观察发现转染PMEP4/PML组的细胞核内有散在的斑点样的黄绿色荧光亮点,而转染空载体PMEP4组细胞未见特异性的荧光斑点表达。DNA梯度法显示转染PML细胞在诱导PML表达后24h出现梯状凋亡条带。Western印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP上调,而survivin的表达水平下调。结论PML诱导膀胱肿瘤细胞凋亡可能与上调半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP蛋白,抑制survivin的表达有关。
- 李磊贺大林何辉王新阳张林琳罗勇南勋义
- 关键词：生长抑制因子WESTERN印迹法凋亡相关蛋白激光共聚焦肿瘤细胞系细胞核内
