河北省自然科学基金(C2007000523)
- 作品数：8 被引量：7H指数：1
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- 鸡巨型艾美耳球虫的分离鉴定与生物学特性研究
- 采用单卵囊技术,从保定市某鸡场雏鸡粪便中分离出疑似艾美耳球虫.对分离株进行形态学和生活史观察.结果其寄生于小肠中段、卵囊为卵圆形、卵囊壁金黄色,大小为(32.0-40.8)×(20.8-31.2)um,平均大小...
- 刘腾张晶王敏曹文博吉星煜张月赵月兰常丽云秦建华
- 关键词：巨型艾美耳球虫生物学特性
- 天然鼠源噬菌体抗体库的构建及抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子单链抗体的筛选（英文）被引量：1
- 2018年
- 从未经主动免疫的BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增鼠抗体重链（VH）和轻链（VL）可变区基因,将轻链和重链可变区基因经重叠延伸拼接PCR反应,构建成单链抗体（ScFv）基因。将ScFv基因克隆到噬菌体载体PCANTAB-5E,转化入大肠杆菌TG1中,筛选出阳性克隆,接种于LB培养基,经辅助噬菌体M13KO7拯救,构建天然鼠源噬菌体抗体库,并进行抗体库滴度测定,通过DNA finger printing技术及单链抗体基因序列分析鉴定抗体库的多样性。以堆型艾美耳球虫裂殖子为靶抗原,对构建的噬菌体抗体库进行亲和筛选,将强阳性重组噬菌体克隆感染大肠杆菌HB2151,经IPTG诱导表达可溶性ScFv抗体,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,用ELISA法鉴定其对堆型艾美耳球虫裂殖子抗原的结合活性。结果表明,天然鼠源噬菌体抗体库成功构建,库容量约为2.50×10^（11） CFU/mol,单链抗体库具有一定的多样性。经过4轮亲和筛选,携带抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子表面抗原的特异性噬菌体抗体得到了富集。特异性ScFv抗体在E.coli中分泌表达,表达产物具有免疫活性。筛选出5个与鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗原结合活性较高的克隆,构建的单链噬菌体抗体库的有效表位具有多样性。本研究为进一步认识鸡球虫的各个发育阶段奠定理论基础,为鸡球虫病免疫控制研究提供参考。
- 康茜任志军唐欣浩王雪伟陈颖彬刘立元秦建华赵月兰
- 关键词：堆型艾美耳球虫裂殖子噬菌体抗体库单链抗体
- 堆型艾美耳球虫3-1E重组质粒微球的制备及体外释放研究
- 用PLGA将堆型艾美耳球虫重组表达质粒pcDNA3.1-3-1E包封,采用水包油包水(W/O/W)双重乳化方法制备pcDNA3-3-1E/PLGA微球。通过正交试验设计优化PLGA微球制备工艺,考察PLGA浓度、PVA浓...
- 刘义伟常丽云蒋禄峰孟令慧赵月兰包永占秦建华
- 文献传递
- 堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在鸡体组织中的分布被引量：1
- 2010年
- 为了探索堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在雏鸡组织中的分布情况,将重组质粒pcDNA3-1E经肌肉注射免疫雏鸡,分别在免疫后15d、30d和60d剖杀雏鸡并采取各种组织,抽提各组织总基因组DNA进行PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析,并观察接种后雏鸡的临床特征。结果:免疫后15d各组织均可检测到3-1E基因,而免疫后30d和60d,仅在pcDNA3-1E质粒注射部位检测到3-1E基因,其他组织均未检测到3-1E基因;50μg的pcDNA3-1E质粒并未对雏鸡产生不良影响。由此表明堆型艾美耳球虫重组质粒pcDNA3-1E在雏鸡体内至少可存在15d,30d后质粒DNA仅分布于接种部位,并至少可持续60d,而且未发现异常临床表现。
- 张丽娟王建永乔榛秦建华赵月兰
- 关键词：堆型艾美耳球虫
- 鸡巨型艾美耳球虫保定株的免疫原性研究
- 本研究将鸡巨型艾美耳球虫保定株的免疫原性进行研究,为鸡巨型艾美耳球虫的免疫防治提供基础.将7日龄雏鸡随机分为5组,每组30只.第1组为卵囊免疫组,2组为黄芪多糖免疫组,3组为卵囊+黄芪多糖免疫组,4组为攻虫非免疫组,5组...
- 王敏张晶刘腾曹文博张月吉星煜赵月兰常丽云秦建华
- 关键词：巨型艾美耳球虫免疫原性
- 堆型艾美耳球虫重组DNA质粒pcDNA3-3-1E的免疫原性
- 2011年
- 用E.acervulina重组质粒pcDNA3-3-1E免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响。将7日龄雏鸡随机分为4组,即空白对照组、pcDNA3.1空质粒组、重组质粒免疫组和卵囊免疫组,每组30只。pcDNA3-3-1E经肌肉注射途径免疫雏鸡,剂量为50μL/只(含质粒1g/L)。7日龄免疫1次,14日龄加强免疫1次。检测雏鸡血液T淋巴细胞增殖率,测定血清抗体水平。结果显示,与空质粒组和健康对照组相比,重组质粒组淋巴细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),外周血中IgG的含量均显著升高(P<0.05),表明pcDNA3-3-1E裸质粒DNA能有效的提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平。
- 常丽云赵月兰刘义伟张丽娟秦建华
- 关键词：堆型艾美耳球虫免疫原性
- 鸡球虫免疫保护性抗原研究进展被引量：1
- 2010年
- 鸡球虫病是严重危害养鸡业发展的重要疾病之一,目前药物防治是控制球虫病的主要手段,但药物防治存在耐药性及药物残留等严重问题,因此鸡球虫病的免疫学防治成为研究领域中的热点,新型疫苗的研制具有重要意义。文章对鸡球虫重组抗原5401、子孢子表面抗原、裂殖子表面抗原、微线蛋白、折光体蛋白等免疫保护性抗原的研究概况进行了综述,以期为研究者提供参考。
- 王建永赵月兰张磊秦建华
- 关键词：球虫
- 堆型艾美耳球虫ADF基因的原核表达与免疫原性
- 2015年
- 参考Gen Bank中收录的E.acervulina ADF基因序列设计1对特异性引物,以河北保定株堆型艾美耳球虫子孢子DNA为模板,用聚合酶链式反应(PCR)法扩增ADF基因。将扩增的ADF基因克隆至p MD18-T载体,转化感受态细胞DH5α,蓝白斑法筛选出阳性重组子,提取阳性质粒进行PCR、酶切鉴定及对序列确证。将扩增产物与原核表达载体p ET32a(+)连接,构建重组质粒p ET32a-ADF,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。用E.acervulina重组质粒p ET32a-ADF免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响。结果显示,ADF基因扩增产物为729 bp,与预期结果相符。序列分析结果表明,该株的ADF基因序列与参考序列同源性达99.6%。表达出的ADF重组蛋白相对分子质量大小约为46 000。与健康对照组相比,重组质粒组淋巴细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),外周血中Ig G及IL-2含量均显著升高(P<0.01),表明p ET32a-ADF质粒DNA能有效提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平。
- 张晶刘义伟张月吉星煜赵月兰包永占秦建华
- 关键词：堆型艾美耳球虫原核表达免疫原性
- 堆型艾美耳球虫3-1E重组质粒微球的制备及体外释放试验
- 2012年
- 用聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)将鸡堆型艾美耳球虫重组表达质粒pcDNA3.1-3-1E包封,采用水包油包水(W/O/W)双重乳化方法制备pcDNA3-3-1E/PLGA微球。通过正交试验设计优化PLGA微球制备工艺,考察PLGA浓度、聚乙烯醇(PVA)浓度、超声功率、复乳搅拌时间对评价指标(即微球粒径大小、包封率、载药量)的影响,确定制备微球的最佳工艺条件。测定微球的形态、粒径、完整性、质粒DNA包封率、载药量和释放程度;进行体外模拟鸡胃液和肠液试验,观察微球体外释药效果。结果显示,当PLGA浓度为8%、PVA浓度为1.5%、超声功率为60W、复乳搅拌6h为微球制备的最佳工艺参数,在光镜下呈散在圆形,粒径小于12μm。微球的包封率、载药量分别为84.25%和4.46%,裸质粒与微球中质粒超螺旋比例差距不显著,这表明在包被过程中的超螺旋质粒未发生明显的降解。在模拟鸡的胃肠液累积释放试验中,它的累积释放能力依次为pH 3.0>pH 7.4,载药微球在模拟鸡的胃肠液中24h释放26.8%,模拟肠液中24h释放11.2%,30d时体外累积释放率为81.7%,表明微球具有一定的缓释效果。
- 刘义伟常丽云蒋禄峰孟令慧赵月兰包永占秦建华
- 关键词：PLGA微球正交试验体外释药
- 堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2009年
- 依据GenBank中收录的堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina,E.acervulina)美国株(US)3-1E基因序列,设计特异性引物,以堆型艾美耳球虫保定株裂殖子基因组RNA为模板,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得3-1E基因序列部分片段,将此片段克隆至pGM-T Easy载体中,经PCR、限制性内切酶鉴定和克隆片段的序列测定、比较,结果表明该克隆片段扩增准确、可靠。序列比较发现,此片段与E.acervulina美国株(US)株、E.acervulina QH株cDNA的核苷酸同源性分别为99.4%和99.6%。
- 卢军霞赵月兰包永占朱玉涛高英秦建华
- 关键词：堆型艾美耳球虫裂殖子3-1E基因
