国家自然科学基金(30772386)
- 作品数：16 被引量：42H指数：4
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- 氧诱导小鼠视网膜新生血管发生中乙酰肝素酶及串珠素的表达被引量：2
- 2010年
- 目的研究小鼠视网膜新生血管发生过程中乙酰肝素酶(HPA)及其作用底物串珠素在视网膜中的表达。方法将65只新生幼鼠于生后7d在体积分数(75±2)%高氧环境中饲养5d后,再置于相对低氧环境中诱导产生视网膜新生血管为高氧诱导组。另外65只新生幼鼠在正常环境中饲养作为正常对照组。分别在小鼠生后第12、13、17、21、30天通过荧光素眼底血管造影(FFA)和视网膜病理切片观察视网膜新生血管的形态变化。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测不同时间点视网膜组织中HPA和串珠素在mRNA水平的变化,Western blot检测不同时间点视网膜组织中HPA在蛋白水平的表达变化。结果高氧诱导组与正常对照组的HPA mRNA表达水平差异有统计学意义(Fgroup=16.303,P=0.000),各时间点的HPAmRNA表达水平差异有统计学意义(Ftime=18.614,P=0.000),生后第12、13、17、21天相应时间点2组小鼠视网膜HPAmRNA的表达水平差异均有统计学意义(P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001)。高氧诱导组与正常对照组HPA蛋白表达水平差异有统计学意义(Fgroup=458.134,P=0.000),各时间点的HPA蛋白表达水平差异有统计学意义(Ftime=78.466,P=0.000)。高氧诱导组与正常对照组的串珠素mRNA表达水平差异有统计学意义(Fgroup=7.351,P=0.013),各时间点的串珠素mRNA表达水平差异有统计学意义(Ftime=9.098,P=0.000)。生后第13、17、21天的高氧诱导组小鼠视网膜串珠素mRNA的表达水平与正常对照组相应时间点,差异均有统计学意义(P=0.048,P=0.000,P=0.003)。伴随着视网膜新生血管的增多和消退,HPA在基因和蛋白水平及串珠素在基因水平的表达均呈先升高后降低的趋势。结论HPA及其作用底物可能是促进视网膜新生血管生长的重要因素。
- 万磊董晓光刘廷程钧谢立信
- 关键词：视网膜新生血管乙酰肝素酶串珠素
- 眼部疾病中上皮细胞转型相关信号通路的研究进展被引量：1
- 2010年
- 上皮细胞间质转型(EMT)是一种基本的病理生理现象,参与胚胎发育、组织重构和肿瘤转移等过程,以上皮细胞表型的缺失及间质特性的获得为重要特征,主要表现为具有极性的上皮细胞转化成具有活动能力、能够在细胞基质间自由移动的间质细胞。研究发现,各种刺激通过多种不同的信号途径诱导上皮细胞发生EMT是许多眼部疾病,如视网膜母细胞瘤、创伤后白内障、视网膜新生血管形成等重要的病理变化过程。就眼部疾病中与EMT有关的信号通路进行综述。
- 马健利刘廷董晓光
- 关键词：上皮细胞间质细胞细胞运动
- Twist基因干扰抑制猴视网膜微血管内皮细胞的迁移被引量：2
- 2010年
- 目的 观察Twist基因干扰对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A）迁移及磷酸化Akt（pAkt）蛋白表达的影响.方法 体外培养的RF/6A细胞系,并构建Twist干扰质粒和对照质粒.分为Twist干扰质粒组、阴性对照组、磷酸盐缓冲液（PBS）组,各组应用脂质体基因转染方法,转入相应的质粒表达载体,采用Transwell小室法检测发生迁移的内皮细胞并计数;铺Matrigel胶,行内皮细胞体外成管实验,观察Twist基因干扰对内皮细胞成管的抑制作用;蛋白质免疫印迹检测Twist基因干扰对RF/6A细胞pAkt蛋白表达的影响.结果 Transwell小室计数结果表明,转染Twist干扰质粒后,迁移的细胞数显著低于阴性对照组和PBS组（F=23.786,P=0.000）.体外成管实验结果表明,Twist干扰质粒组内皮细胞成管数显著低于阴性对照组和PBS组（F=7.159,P=0.014）.Ttwist干扰质粒组的pAkt蛋白表达明显减少.结论 Twist基因干扰可显著抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移,可能机制是通过抑制pAkt蛋白的表达发挥作用.
- 张珊珊董晓光刘廷陈鹏孟丽娜
- 关键词：TWIST转录因子基因转移技术细胞运动
- 血管能抑素基因转移抑制视网膜新生血管的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的 观察血管能抑素真核表达质粒（pCMV-HA）对小鼠视网膜新生血管RNV形成的抑制作用.方法 将鼠龄为7 d的56只C57BL/6J新生小鼠随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、治疗组和空载体组,每组14只.后3组小鼠置于（75±2）%浓度的氧环境中饲养5 d后,回到正常空气环境中建立氧诱导的RNV动物模型.治疗组小鼠在出生后第12天出氧箱时行玻璃体腔注射血管能抑素pCMV-HA,空载体组注射等量空质粒.出生后第17天行伊凡思蓝（Evans blue）灌注血管造影视网膜铺片观察血管变化.石蜡切片行苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数.结果 视网膜铺片结果显示,治疗组较OIR模型组和空载体组视网膜血管分布均匀,新生血管和无灌注区显著减少.治疗组突破内界膜的内皮细胞核数与OIR模型组及空载体组比较,差异有统计学意义（F=39.006,P〈0.001）.结论 血管能抑素pCMV-HA对氧诱导的RNV有显著的抑制作用.
- 孟丽娜董晓光王晔刘廷张珊珊
- 关键词：细胞因子类基因转移技术
- 上皮-间质转化在眼科的研究进展
- 2008年
- 上皮-间质转化（EMT）是胚胎发育、肿瘤转移和组织修复过程中起关键作用的细胞转型机制。EMT主要表现为上皮细胞的极性、细胞间连接消失，上皮细胞表达间质成分并具有迁移的表型。在眼科疾病中，角膜细胞再生、纤维化以及创伤愈合过程存在EMT机制。EMT也是晶状体外伤、晶状体前囊混浊、后发性白内障以及增殖性玻璃体视网膜病变等疾病的重要发病机制，本文综述眼科领域中EMT机制的研究进展。
- 刘廷董晓光
- 关键词：上皮细胞间质干细胞细胞运动眼科发病机制
- TERT在视网膜新生血管模型中的动态表达及与Bcl-2的关系被引量：4
- 2009年
- 目的观察小鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)模型中端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)的动态表达以及与抗凋亡基因Bcl-2表达的关系,验证TERT对RNV形成的重要作用。方法选择生后7d龄C57BL/6J小鼠50只随机分为高氧模型组、正常对照组,每组25只,高氧模型组置于体积分数75%±2%高氧环境中生活5d,然后正常氧环境中饲养。正常对照组小鼠置于正常氧环境中饲养。于生后19d、24d、27d、30d,用20g.L-1伊凡思蓝灌注进行视网膜铺片,观察各组小鼠视网膜血管形态变化;RT-PCR检测各组生后19d、24d、30d TERTmRNA的表达变化及生后19d各组Bcl-2mRNA的表达变化。结果灌注铺片显示,高氧模型组生后19d RNV最多,生后21-30d RNV逐渐减少。RT-PCR显示高氧模型组小鼠视网膜TERT mRNA灰度比值19-30d逐渐减少,生后19d(1.03±0.07)与30d(0.59±0.07)差异有统计学意义(t=8.232,P=0.010);生后19d,高氧模型组Bcl-2mRNA灰度值为1.25±0.14,明显高于正常对照组的0.48±0.26(t=4.505,P=0.011)。结论TERT基因对RNV形成起重要调控作用,RNV的形成可能与抗凋亡基因Bcl-2高表达有关。
- 闵晓洁周庆军刘廷董晓光谢立信
- 关键词：BCL-2端粒酶逆转录酶视网膜新生血管凋亡
- 小鼠视网膜组织石蜡切片制作方法的探讨被引量：18
- 2009年
- 目的寻找一种效果好的视网膜固定方法。方法30只小鼠取出眼球后在角巩膜缘刺一小口,A组24只眼球,用体积分数10%中性甲醛固定;B组16只眼球,用FAA固定液(体积分数10%中性甲醛10mL、体积分数95%乙醇85mL、冰醋酸5mL混合)固定;C组20只眼球,置于FAA固定液中浸泡1min后用体积分数10%中性甲醛固定过夜,脱水后去除角膜、虹膜和晶状体,分别做HE染色和免疫组织化学染色,镜下观察其差异。结果大体观察A组大部分眼球皱缩变形,视网膜脱离率高;B组、C组眼球形态均无明显变化,无视网膜脱离发生。HE染色示A组标本视网膜结构疏松,有较多裂隙,且易发生视网膜碎裂;B组标本视网膜过度压缩,视网膜各层结构不清晰;C组标本视网膜结构清晰,细胞排列紧密,色泽艳丽。免疫组织化学染色3组均显示神经元特异性烯醇化酶NSE阳性,但C组标本染色效果优于A组、B组,且脱片程度低,适用于视网膜组织的固定。结论采用FAA先浸泡再用体积分数10%中性甲醛固定视网膜组织的效果优于单独使用体积分数10%中性甲醛和FAA固定液。
- 程钧万磊刘廷刘伟吉董晓光
- 关键词：视网膜石蜡切片
- Twist基因干扰抑制小鼠视网膜新生血管形成的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 通过RNA干扰技术抑制小鼠视网膜新生血管形成过程中Twist基因的表达,观察视网膜新生血管内皮细胞的迁移变化和细胞转型规律,寻找抑制视网膜新生血管发生的新靶点.方法 实验研究.取健康C57BL/6J新生小鼠建立高氧诱导小鼠视网膜新生血管动物模型.小鼠生后第12天,分别给予Twist干扰质粒和无关对照质粒玻腔注射治疗.第17天取材,行视网膜Evans蓝灌注铺片、组织病理学检查、新生血管内皮细胞计数和免疫组织化学检测及Real-Time PCR检测.对各组视网膜新生血管内皮细胞计数和Real-Time PCR检测目标基因的表达变化,采用单因素方差分析进行统计学比较.结果 光镜下观察突破内界膜的视网膜新生血管,正常对照组、高氧诱导组、干扰质粒组和对照质粒组突破内界膜的血管内皮细胞平均每眼分别为0.34±0.11、32.73±6.38、4.56±2.02和20.17±6.49.小鼠视网膜Evans蓝灌注铺片观察和石蜡切片HE染色观察显示Twist干扰质粒组小鼠第17天较高氧诱导组视网膜血管迂曲渗漏减轻,新生血管明显减少.Twist干扰质粒组视网膜新生血管内皮细胞计数较高氧诱导组显著减少.免疫组织化学检测可见Twist干扰质粒组小鼠视网膜Twist和波形蛋白表达较高氧诱导组明显减少.使用Real-Time PCR方法检测各组小鼠第17天视网膜Twist基因和波形蛋白基因的表达,Twist干扰质粒组表达较高氧诱导组下调（F=27.214,31.211;P＜0.05）.结论 在小鼠视网膜新生血管形成过程中,细胞转型调控的Twist基因发挥重要作用,通过RNA干扰技术抑制Twist基因的表达,可阻遏细胞转型的发生,抑制视网膜新生血管的形成.
- 李君董晓光刘廷
- 关键词：RNA干扰视网膜新生血管化波形蛋白
- 增生性糖尿病视网膜病变增生前膜的观察及细胞表型的检测被引量：2
- 2009年
- 目的探讨增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)的视网膜增生前膜的病理形态改变和细胞表型的变化。方法视网膜前膜组织来自10例PDR患者玻璃体切割手术中取出的视网膜前增生膜,直接铺片进行光镜暗视野模式下观察形态变化。视网膜前增生膜组织包埋在冷冻胶中,冰冻切片后进行转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、上皮细胞钙黏蛋白和波形蛋白免疫组织化学研究。结果PDR患者的视网膜前膜内含大量毛细血管,并包含有色素上皮细胞成分,可观察到无管腔的内皮细胞条索和微血管瘤。免疫组织化学观察表明TGF-β1在8例Ⅴ期PDR患者血管增生膜中强表达,而对照组正常视网膜中表达阴性。增生膜内钙黏蛋白E表达较弱,而波形蛋白表达呈强阳性。结论PDR的视网膜前膜内含丰富血管和细胞,TGF-β1表达的升高可能是细胞表型变化的原因之一。
- 刘廷原公强于滨董晓光
- 关键词：糖尿病视网膜病变视网膜前膜转化生长因子-Β1细胞表型
- 暗视野显微镜在眼科实验研究中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨暗视野显微镜在眼科实验研究中的应用。方法使用Nikon E800研究显微镜,透射光模式和暗视野模式下直接观察眼科常见的实验标本,包括培养1周的角膜上皮细胞爬片、小鼠角膜缘血管网、视网膜铺片和玻璃体手术中切取的视网膜前膜组织。结果显微镜透射光模式观察培养角膜上皮细胞胞浆内结构不清;暗视野模式下可观察到细胞内微丝的走行和排列方式,细胞立体感明显增强。显微镜透射光模式观察可见细胞层次不清,血管形态不清晰;暗视野模式下观察可见小鼠角膜缘组织血管网立体感强,色彩对比良好,细胞层次清晰,细胞形态和界限明显,血管走行和形态非常清楚。暗视野显微镜模式与透射光模式相比较,可清晰观察到视网膜前膜内增生的新生血管,血管走行和分布规律均可得到较好的显示。结论暗视野显微镜简便易行,提高对病变的观察和认识,可广泛用于眼科科研工作中。
- 刘廷王瑶王宜强董晓光
- 关键词：角膜视网膜
