国家自然科学基金(30271493)
- 作品数：12 被引量：22H指数：5
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- 重组福安泰-03融合蛋白表达条件的优化及其生物学活性检测
- 2012年
- 福安泰-03(FAT-03)是从赤魟组织中分离得到,具有强抗血管生成活性的蛋白。本研究通过DNA重组技术获得了重组福安泰-03(rFAT-03)融合蛋白,运用响应面试验设计法优化表达条件,采用GST亲和柱分离纯化表达蛋白,比较分析不同培养时间、诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间对可溶性融合蛋白表达量的影响。结果表明,当培养时间为6.13h、诱导温度为19.71℃、诱导剂(IPTG)浓度为0.36mmol/L、诱导时间为13.60h条件下可获得较好的表达效果,可溶性目的蛋白GST-rFAT-03的得率为7.57mg/L。对获得的rFAT-03生物活性检测显示,rFAT-03能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成,且其效果与剂量相关。为后续对该蛋白的分离纯化和生物学功能研究奠定了基础。
- 张永平马润娣于立坚苏伟明廖铭能黄来珍于廷曦
- 关键词：生物活性
- 福安肽-03的分离纯化及其一级结构解析
- 2008年
- 通过盐析、离子交换、凝胶过滤和疏水层析等分离纯化,同步进行抗血管生成和抗肿瘤生长检测,从赤魟(Dasyatis akajei)组织获得强抗血管生成成分福安肽-03(Fuantai-03,FAT-03)的纯品(纯度>95%);使用Edman降解法测定FAT-03 N-末端氨基酸组成和序列,RACE系统技术解析FAT-03的一级结构。结果表明:FAT-03明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成和BALB/c裸小鼠Lewis肺癌的生长及肝转移,且其效果与剂量相关。FAT-03分子的一级结构即其氨基酸组成和序列已被确定。
- 张永平马润娣于立坚苏伟明廖铭能黄来珍张霄瑜于廷曦
- 关键词：分离纯化
- 赤魟组织粗提物的抗肿瘤作用被引量：9
- 2008年
- 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检查赤魟三种组织(皮肤、软组织和软骨)粗提物对体外培养的人癌细胞生长的影响,用腹腔注射或灌胃法检查赤魟三种组织粗提物对小鼠移植性肉瘤180(S180)和肝癌(H22)生长的影响。结果表明,赤魟组织粗提物对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响,赤魟组织粗提物无论腹腔注射还是灌胃均显著抑制小鼠肉瘤和小鼠肝癌的生长,且对体重无明显影响;当三种组织粗提物以500mg/kg/d(相当生药量,下同)的剂量连续腹腔注射(ip)15d时,对S180的抑制率分别为63.9%、47.2%和80.3%;以3500mg/kg/d连续灌胃(ig)15d时,对S180的抑制率分别为66.9%、61.5%和66.9%;以500mg/kg/d连续腹腔注射15d时,对H22的抑制率分别为43.3%、43.3%和80.4%。
- 廖铭能于立坚马润娣苏伟明黄来珍
- 关键词：软组织软骨粗提物体内抗肿瘤作用体外抗肿瘤作用
- 福安泰-03对人脐静脉内皮细胞凋亡和小鼠创伤愈合的影响
- 2012年
- 研究福安泰-03(Fuantai,FAT-03)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein en-dothelial cells,HUVECs)凋亡和小鼠创伤愈合的影响。MTT法检查FAT-03对HUVECs和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)生长的影响;聚碳酸酯膜小室趋化运动模型(Transwell model)检测FAT-03对HU-VECs运动能力的影响;荧光显微镜观察FAT-03作用下HUVECs的形态变化;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)双染检测FAT-03对HUVECs早期凋亡的影响;流式细胞术分析FAT-03对HUVECs周期及凋亡的影响;Western blot法分析FAT-03对HUVECs的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Bcl-2、Bax表达的影响;小鼠背部创伤模型检查FAT-03对组织修复的影响;免疫组化法检查FAT-03对创伤组织微血管密度(microvessel density,MVD)和VEGF表达的影响。结果显示,FAT-03明显抑制HUVECs细胞的增殖和迁移,其抑制效果与剂量和作用时间相关,作用HUVECs 24,48,72 h的IC50值为0.22,0.17,0.09 mg/mL,但FAT-03对CNE-2Z细胞的生长却无明显的影响;0.16 mg/mL FAT-03作用HUVECs 24 h对细胞迁移的抑制率为57.9%(P<0.01);FAT-03处理HUVECs 48 h,细胞的早期凋亡率增加(P<0.05);FAT-03阻滞HUVECs于G0/G1期,并呈现典型的凋亡峰;0.16 mg/mL FAT-03作用48,72 h,HUVECs的凋亡率分别为14.6%、41.7%;FAT-03下调HUVECs的VEGF和抑凋亡基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因Bax的表达,其效果与剂量相关。FAT-03明显延迟小鼠创伤的愈合,且其作用与剂量相关。FAT-03组小鼠创伤周围组织微血管密度和VEGF阳性表达细胞都明显减少。因此,可以推测,FAT-03抑制HUVECs增殖并诱导其凋亡;抑制创伤组织的血管生成,进而延迟创伤愈合;它的这些作用可能与其下调VEGF、Bcl-2的表达,上调Bax的表达相关。
- 苏伟明黄来珍马润娣于立坚王强张霄瑜于廷曦
- 关键词：细胞凋亡血管内皮细胞生长因子凋亡相关基因创伤愈合小鼠
- 福安泰-03对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭能力的影响被引量：4
- 2009年
- 应用噻唑蓝法检测从赤魟中分离到的福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03)对高转移人卵巢癌细胞HO-8910PM生长的影响;人工重组基底膜检测FAT-03对细胞侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测FAT-03对HO-8910PM细胞分泌MMP-9能力的影响。结果显示,FAT-03(20.0、40.0、60.0μg/ml)作用HO-8910PM细胞24h,对细胞生长的抑制率小于10%,对细胞与纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和Matrigel粘附的抑制率分别为15.1%、28.0%(P<0.05)、54.1%(P<0.01)和14.7%、34.3%(P<0.05)、40.5%(P<0.01),对细胞迁移的抑制率分别为16.4%、33.8%(P<0.05)和42.6%(P<0.01)。此外,FAT-03显著减少HO8910-PM细胞分泌MMP-9的量,并降低其活性。这些实验事实提示FAT-03能明显抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。
- 廖铭能徐海瑛马润娣于立坚苏伟明黄来珍张霄瑜于廷曦
- 关键词：MMP-9
- 一种新的源自赤的强血管生成抑制剂福安泰-03的分离和鉴定被引量：6
- 2009年
- 从赤软骨和去皮的软组织中分离并鉴定了一种新的强血管生成抑制剂福安泰-03(Fuantai-03,FAT-03).利用组织匀浆、盐析、离子交换层析、疏水层析和反向层析等方法进行分离和纯化.鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验检测FAT-03对血管生成的影响.SDS-PAGE分析揭示,FAT-03为单一银染条带,分子量大约为43000.层析洗脱实验证实,这一分子量蛋白质具有强抗血管生成活性.FAT-03的纯度进一步因其独特的N末端氨基酸序列(PFGNTHNKWKLNYSAEQEFP)而肯定.每日20、40和80μgFAT-03给药组(每胚给药3d)对血管生成的抑制率分别为23.6%、33.1%和50.8%.本研究首次证实,赤产生上述强血管生成抑制剂.
- 苏伟明马润娣于立坚张永平廖铭能黄来珍于廷曦
- 关键词：血管生成抑制剂
- 离子交换层析纯化重组福安泰-03功能域的工艺条件研究被引量：2
- 2010年
- 对阴离子交换树脂HiTrap DEAE Sepharose FF纯化重组福安泰-03功能域(rFAT-03)的合适条件进行了研究。通过试验,确定了柱层析的最佳操作条件,即在上样缓冲液为0.1mol/L Tris-HCl、洗脱缓冲液为1mol/L NaCl+0.1mol/L Tris-HCl、pH为8.8的条件下,利用HiTrap DEAE SepharoseFF琼脂糖凝胶吸附柱,先用洗脱缓冲液从30%到60%洗脱3个柱床体积,再用洗脱缓冲液从60%到100%洗脱2个柱床体积。在此试验条件下,rFAT-03得率为35.97%,最终纯化的rFAT-03达电泳纯,纯度为99.5%。
- 苏伟明马润娣于立坚于廷曦
- 关键词：离子交换层析纯化
- 从赤组织中分离到的福安肽的抗肿瘤活性的初步研究被引量：14
- 2008年
- 目的研究从赤组织中分离到的福安肽(Fuantai,FAT)的抗肿瘤活性及对促血管生成因子表达的影响。方法MTT法检测FAT对体外培养的人癌细胞生长的影响;小鼠移植性肝癌(H22)模型用于检查FAT对肿瘤生长的影响;免疫组化法检查福安肽对癌组织促血管生成因子表达的影响。结果FAT对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响;FAT无论腹腔注射还是灌胃都显著抑制小鼠移植性肝癌的生长,且对小鼠体重增长无明显影响。当FAT的用量为50.0 mg/(kg.d)(ip或ig)共21 d对H22的抑制率分别为67.5%和84.0%。免疫组化检测结果显示,FAT明显下调小鼠肝癌组织血管内皮细胞生长因子,碱性成纤维细胞因子和血小板衍生生长因子的表达。结论FAT的抗肿瘤活性可能与其抑制肿瘤血管生成有关。
- 苏伟明于立坚马润娣廖铭能黄来珍于廷曦
- 关键词：抗肿瘤活性血管生成抑制
- 一种新的源自赤魟的强血管生成抑制剂福安泰—03的分离和鉴定
- 一种新的强血管生成抑制剂福安泰-03（Fuantai-03,FAT-03）已经从赤魟软骨和去皮的软组织中分离得到并进行了鉴定.组织匀浆、盐析、离子交换层析、疏水层析和反向层析等用于分离和纯化。鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）试验...
- 苏伟明马润娣于立坚张永平廖铭能黄来珍于廷曦
- 关键词：血管生成抑制剂
- 文献传递
- 从赤魟组织中分离到的福安肽的抗血管生成作用被引量：6
- 2008年
- 目的研究从赤魟组织中分离到的福安肽(FAT)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成、人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成和小鼠肝癌组织血管生成的影响。方法用CAM法检测FAT对CAM血管生成和CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成的影响;用免疫组化法检查FAT对小鼠肝癌组织内微血管密度(MVD)的影响。结果FAT显著抑制CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×3时,其抑制率分别为30.8%,50.1%,64.0%;CNE-2Z细胞明显诱导CAM血管生成,当CNE-2Z细胞的接种量为1.9×106细胞/胚时,其血管生成诱导率为30.1%;FAT明显抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×4时,其抑制率分别为35.8%,43.1%,51.3%。FAT明显降低小鼠肝癌组织的MVD,FAT平均微血管数为(8.2±1.3)与对照组的(21.3±2.8)相比,差异显著(P<0.05)。结论FAT有显著的抗血管生成作用,这可能是其抑制小鼠肿瘤生长的重要原因。
- 廖铭能于立坚马润娣苏伟明黄来珍于廷曦
- 关键词：抗血管生成鸡胚绒毛尿囊膜微血管密度小鼠肝癌
