国家重点基础研究发展计划(2005CB523003)
- 作品数：6 被引量：41H指数：4
- 相关作者：金梅林周红波刘金华陈焕春丛彦龙更多>>
- 相关机构：华中农业大学中国农业大学广西大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H1N1亚型猪流感病毒的拯救被引量：11
- 2008年
- 利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒,为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。
- 彭亚平周红波李春金梅林
- 关键词：猪流感病毒拯救共转染
- AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究被引量：4
- 2007年
- 应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY)。在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY。同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验。结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1∶640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力。以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗。
- 伍海芽喻正军陈剑锋宋云峰周明光杨俊兴周红波金梅林陈焕春
- 关键词：H5N1高免卵黄抗体理化特性
- 整合HA蛋白的HIV假病毒展示禽流感病毒感染宿主细胞机制被引量：5
- 2008年
- 通过将高致病性禽流感病毒HA蛋白整合到HIV颗粒,包装成表达HA蛋白的假病毒粒子(命名为HIV/H5-HA),并对所包装的假病毒的生物学功能进行了研究.通过RT-PCR获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因(HA)并克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)上,通过与假病毒构建体系的2种质粒pCMV△8·2和pHR′-CMVLacZ共转染293T细胞,包装成假病毒颗粒.利用LacZ染色和HA假病毒颗粒感染MDCK等6种细胞株并对标记基因LacZ进行检测.结果表明,HIV/H5-HA与天然的禽流感病毒相似,具有广泛的细胞嗜性;Western印迹和FACS检测结果,和HA假病毒颗粒的电镜照片确认了HA基因在假病毒颗粒表面得到了表达;HIV/H5-HA能够凝集鸡红细胞,并且pH值依赖性测定表明,HA假病毒需要低pH值才能实现正确的入侵宿主细胞.本研究结果显示:禽流感病毒H5N1亚型的HA基因得到了有效的包装,并且所包装的假病毒颗粒能够表达具有高度生物活性的HA蛋白.同时,假病毒模型的建立为进一步研究禽流感病毒与宿主之间的免疫应答提供了一种新的途径.
- 张松林金梅林肖凌云陈焕春
- 关键词：禽流感病毒血凝素蛋白假病毒
- 流感病毒血凝素在宿主特异性转变中的分子基础被引量：11
- 2008年
- 丛彦龙刘金华
- 关键词：流感病毒宿主特异性
- 广西狂犬病分子流行病学的研究
- 本研究从2000年开始从广西各地采集了1563份犬脑、4份发病牛脑、1份发病猪脑和1份猫脑组织,通过对这些动物脑组织的PCR检测,分离出42株狂犬病毒株,并对N基因3′端455个核苷酸片段进行测序分析。根据核苷酸同源性及...
- 熊毅刘棋盘龙波王雯罗廷荣朱伟韦友传陆专灵郭建刚李华明
- 关键词：狂犬病N基因分子流行病学
- 文献传递
- 关于进一步加强禽流感防控工作的认识被引量：3
- 2006年
- 高致病性禽流感不仅对我国的养殖业造成了严重的经济损失,而且对人类健康造成了威胁。在对禽流感的防控中,我国取得了很大的成绩,但由于高致病性禽流感的不断发生,再加上野禽高致病性禽流感的严重污染,而我国又包含候鸟迁徙的三条主要路线,几乎覆盖了我国的全部领域,野鸟污染高致病性禽流感的事实,这些情况决定了当前禽流感的防控形势依然严峻,为了将防控工作做的更好,本文从区域性禽流感参考实验室的建设、加快BSL-3实验室的验收、加强基础研究、正确认识病毒抗原变异等方面提出了一些观点,以期能够对禽流感彻底防控起到抛砖引玉的作用。
- 刘金华赵继勋
- 关键词：禽流感
- 广西狂犬病分子流行病学的研究被引量：7
- 2008年
- 自2000年起从广西各地采集1563份犬脑、4份发病牛脑、1份发病猪脑和1份猫脑组织。通过对这些动物脑组织进行PCR检测及用小白鼠脑内接种试验分离出42株狂犬病毒株，并对N基因3’端455个核苷酸片段进行测序分析。根据核苷酸同源性及遗传进化树分析结果，广西狂犬病流行毒株可分成4个群。Ⅰ群有GX01、GX08、GX09、GX014、GX019、GX091、GX123、GX173、GX174、GX195、GX260、GX443、GX452、GXSIO、GX520、GXBS、GXSL、GXGG、GXLA、GXHX、GXGL、GXNniu、GXWXp共23株，它们的核苷酸同源性在97．6％-100％之间；Ⅱ群有Gx074、Gx219、GX304、GX441、GX442、GX496、GX0510、GXBX、GXBM、CXQZ共10株，它们的核苷酸同源性在98．5％-100％之间；Ⅲ群只有GXN119；Ⅳ群有G）（506、GXS08、GXS09、GX120、GXB03、GXeat、GX201、GX102共8株，它们的核苷酸同源性在99．1％-99．6％之间。进一步氨基酸变异分析得知，与兽用疫苗株E1LA比较，所有42个毒株的第58位氨基酸由P变为S，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群的34株共同发生了H26Y、C40S、S61N、V95L、G106D和P135S位点的变异，Ⅰ群发生了T90N和E110D、Ⅱ群发生了T42S的群特异性变异。氨基酸分析结果与核苷酸同源性、遗传进化树分析结果一致。各群毒株呈现明显的地域分布特征，Ⅰ群主要分布在桂东地区，Ⅱ群主要分布在桂西地区。Ⅳ群主要分布在桂南地区。
- 熊毅刘棋盘龙波王雯罗廷荣朱伟韦友传陆专灵郭建刚李华明
- 关键词：狂犬病N基因分子流行病学
- H5亚型禽流感病毒血凝素基因在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定
- 本研究利用RT—PCR技术扩增了H5亚型低致病性禽流感病毒的血凝素基因,并将其克隆到pGEM—T载体中,利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统构建了含有H5 HA基因的重组杆状病毒rBacmid—HA,用重组杆状病毒转...
- 周迎春魏卉玲蒲娟吴清民刘金华
- 关键词：禽流感病毒血凝素杆状病毒表达系统
- 文献传递
