江苏省科技支撑计划项目(BE2010604)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：周国华陈之遥刘云龙王建平马寅姣更多>>
- 相关机构：中国药科大学南京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 全血直接扩增结合焦磷酸测序法测定亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性被引量：7
- 2012年
- 亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C>T和1298A>C两个位点的多态性与临床常用抗肿瘤药物甲氨喋呤及氟尿嘧啶的作用密切相关,对这两个位点多态性的检测能指导临床合理用药。为进一步缩短检测时间,降低检测成本,本研究建立了基于全血直接PCR的焦测序检测方法,采用"HpH Buffer"直接扩增全血模板,仅需1μL全血样本即可对两个位点进行高效扩增。扩增产物经碱变性法制备单链模板后进行焦磷酸测序,经过条件优化,仅需5μL扩增产物和1μL微球即可完成高灵敏的焦测序反应。为验证方法的准确性,检测了12例临床样本,均能正确检测两个位点的基因多态性。本研究为临床基因多态性检测提供了一种操作简便,耗时短,成本低,准确度高的方法,本方法可用于指导甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶的个体化用药。
- 刘云龙陈之遥武海萍周国华
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因基因分型焦磷酸测序
- 重组大肠杆菌单链结合蛋白性质表征及其在提高焦磷酸测序准确性中的应用被引量：1
- 2011年
- 利用基因工程手段表达了分子量约为24 kDa的重组大肠杆菌单链结合蛋白(r-SSBP),通过凝胶阻滞电泳与DNA熔解温度(Tm)影响实验表征了r-SSBP与单链DNA(ssDNA)结合的特性,结果表明,r-SSBP可以与ssDNA结合,并且能够降低DNA的Tm值,同时还能增大含有单个错配碱基的DNA与完全匹配的DNA的Tm值差异,这一特性在提高单核苷酸多态性检测的特异性方面具有潜在的应用价值。此外,将r-SSBP应用于本课题组开发的高灵敏度焦磷酸测序体系中测定已知序列ssDNA模板,结果表明,r-SSBP能够有效降低非特异信号,改善信号峰比例,提高焦测序的准确度,为完善高灵敏度焦磷酸测序体系奠定了基础。
- 王建平邹秉杰陈之遥马寅姣徐澍周国华
- 关键词：大肠杆菌焦磷酸测序
