国家自然科学基金(30170983)
- 作品数：12 被引量：51H指数：4
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- 相关机构：第三军医大学重庆医科大学附属第一医院清华大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠STAT3基因干扰质粒的构建及其效果鉴定
- 2006年
- 目的构建小鼠STAT3基因的特异性RNA干扰质粒,并鉴定其在细胞水平的抑制效果。方法采用DNA载体介导的RNA干扰技术构建小鼠STAT3基因的特异性RNAi质粒(pBS/U6/STAT3siRNA),并通过RT PCR、免疫印迹、免疫细胞化学染色等技术对pBS/U6/STAT3siRNA的抑制效率进行鉴定。结果经双酶切鉴定筛选出4个阳性干扰质粒,分别转入293T细胞后均可明显降低STAT3的表达,尤以靶向(+2334～+2351)位点的质粒干扰效率最高,达70%。结论小鼠STAT3基因的特异性干扰质粒(pBS/U6/STAT3siRNA)能从蛋白及mRNA水平上特异和高效地抑制STAT3基因的表达。这种DNA载体介导的双链RNA干扰质粒为进一步探究STAT3与胚胎发育的相关功能提供一种有效的研究工具。
- 星懿展李泽桂李红丽李铁石丁震宇
- 关键词：RNAI小鼠干扰质粒
- 信号传导及转录活化因子3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达(英文)
- 2005年
- 背景:信号传导及转录活化因子3(signaltransducerandactivatoroftran-scription3,STAT3)蛋白广泛表达于不同类型的细胞和组织中,是重要的信号转导及转录级联成分,参与调控细胞的增殖分化等多种生理功能。但是在胚胎肝脏发育中是否有STAT3的表达,STAT3是否参与了胚胎肝脏中期发育过程,目前国内外尚无文献报道。目的:通过研究STAT3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达,试图揭示STAT3信号转导通路在胚胎肝脏发育过程中的作用和可能机制。设计:以STAT3蛋白为研究对象随机对照的基础研究。单位:一所军医大学的组胚教研室。材料:本实验于2004-01/2004-06在解放军第三军医大学组胚教研室的实验室完成。KM种小鼠(清洁级)由解放军第三军医大学动物中心提供。随机取雄鼠10只,雌鼠20只,体质量25～30g。方法:分别取交配后13.5d(n=8)、交配后14.5d(n=9)、交配后15.5d(n=7)鼠胚做冰冻连续切片。每2张切片中取1张用0.01mol/LPBS代替STAT3一抗设阴性对照实验。利用免疫细胞化学技术和免疫荧光细胞化学技术显示STAT3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达。主要观察指标:鼠胚冰冻连续切片STAT3蛋白的表达情况。结果:在孕13.5d(E13.5d)鼠胚中,STAT3蛋白在肝细胞中的表达较强,孕14.5d(E14.5d)和孕15.5d(E15.5d)STAT3蛋白在肝脏中的表?
- 马路李泽桂纪华丁震宇星懿展
- 关键词：DNA结合蛋白质类
- STAT3在小鼠胚胎神经系统发育中的表达被引量：4
- 2005年
- 目的 观察STAT3在小鼠胚胎神经管发生和神经上皮分化迁移阶段的时空表达规律,为探讨STAT3在胚胎神经系统发生和发育过程的作用及可能机制提供形态依据。方法 采用全胚胎原位杂交技术和免疫组织化学技术,观察STAT3在神经胚形成和神经上皮分化迁移阶段的表达。结果 ①E8.75d整个鼠胚几乎没有观察到STAT3mRNA的表达,在E9.5d ,STAT3mRNA在前脑泡急剧增多,到E10 .5d ,阳性信号出现在中脑泡,E11.5d时在后脑泡的一狭窄区域有STAT3mRNA的表达;②E13 .5d ,在侧脑室周围即未来大脑新皮层区域、间脑、发育中的视网膜、第四脑室周围的脑组织(未来的脑桥)、脊髓、三叉神经节和背根神经节C1均可观察到较强的STAT3蛋白阳性信号,E14 .5d和E15 .5d时,大脑皮层、间脑、视网膜、第四脑室周围以及发育中的脑桥和脊髓等部位观察到中等强度的STAT3蛋白表达。结论 STAT3可能参与了神经管的关闭和神经上皮的分化和迁移。
- 纪华李泽桂马路丁震宇蔡文琴傅新元常智杰刘力
- 关键词：STAT3神经上皮
- FGF与中枢神经系统被引量：6
- 2004年
- 成纤维细胞生长因子 (fibroblastgrowthfactor ,FGF)是一类结构上相类似的多肽家族。家族许多成员在中枢神经系统表达 ,它们与其特异性受体 (FGFRs)结合发挥广泛的生理作用。尤其对中枢神经系统的发育、损伤、修复以及神经干细胞的增殖和分化方面有重要意义。本文综述了GFFs及其受体的研究进展及其在中枢神经系统发育及损伤修复中作用。
- 纪华李泽桂
- 关键词：FGF中枢神经系统成纤维细胞生长特异性受体信号转导
- 低氧诱导因子-1在小鼠胚胎神经胚形成阶段的发育学表达被引量：3
- 2005年
- 为研究低氧诱导因子-1(HIF-1)在小鼠胚胎神经胚形成阶段的时空表达规律,探讨HIF-1在胚胎神经系统发生和发育过程中的作用。本研究以地高辛标记的HIF-1αcRNA为探针,采用全胚胎原位杂交技术,观察HIF-1α在神经胚形成阶段的表达规律。结果显示在E8.5d,整个鼠胚神经管的头端和尾端均可观察到HIF-1αmRNA的表达,此时表达较弱。在E9.5d,随着神经管的逐渐关闭,HIF-1αmRNA在前脑泡、第一鳃弓、第二鳃弓、后脑泡处急剧增多,并在发育中的眼部有较强的表达;此外在中脑泡以及心脏原基有较弱的表达。到E10.5d,阳性信号除在E9.5d检测到的部位继续富集外,在端脑、间脑、发育中的肢芽以及尾部也出现较强的HIF-1αmRNA的表达,且在心脏原基的表达亦进一步增强。E11.5d时在连合板、喙区、第一鳃弓、第二鳃弓、后脑、延脑、发育中的肢芽以及尾部末端可检测到HIF-1αmRNA的明显表达。以上结果提示HIF-1可能参与了小鼠神经胚形成的发育过程。
- 丁震宇李泽桂星懿展纪华马路
- 关键词：低氧诱导因子-1小鼠胚胎发育
- 突变人CD59分子真核表达体系的构建和功能的初步研究
- 2005年
- 构建突变人CD59分子(HMCD59)真核表达体系,探讨HMCD59糖基化前后抗补体活性的变化。采用重组PCR定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点构建CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。G418压力筛选稳定转染细胞克隆,检测筛选HMCD59蛋白高表达株。免疫印迹技术(Western blot)检测出HMCD59蛋白分子量约为20kDa。2,7-二羧乙基-5,6羧基荧光素(BCECF)释放实验初步证实HMCD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖症的发生机制提供了线索。
- 任书荣高美华
- 关键词：基因定点突变CHO细胞真核表达CD59中国仓鼠卵巢细胞
- STAT3在小鼠胚胎肝脏的表达被引量：4
- 2005年
- 目的 探讨STAT3在胚胎肝脏发育中的作用。方法 应用免疫组化技术观察STAT3在小鼠胚胎肝脏中期发育中的表达。结果 STAT3蛋白在E13.5d鼠胚肝脏中出现较强表达 ;在E14 .5d和E15 .5d鼠胚肝脏中的表达有所下降。结论 STAT3可能参与了胚胎肝脏中期发育的调控 ,并可能涉及胚胎肝脏的造血功能。
- 马路李泽桂纪华丁震宇星懿展
- 关键词：肝脏发育STAT3
- FGF8在神经胚形成和NTD中的表达变化及其与STAT3的关系研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨FGF8在神经胚形成和神经管缺陷(NTD)发生过程中的作用及其可能的分子调控机制。方法采用全胚胎原位杂交技术观察FGF8在胚胎神经胚形成中的表达;通过喂服过量的维甲酸(retinoicacid,RA)诱导NTD模型,观察NTD鼠胚FGF8和STAT3的表达变化。结果①在E8·75d整个鼠胚几乎没有FGF8的表达;到E9·5d、E10·5d,在前脑泡的前缘、脑峡部位和神经管的末端观察到较局限的紫蓝色阳性区域,但到E10·5d时,上述3个部位的染色较E9·5d减弱;E11·5d时阳性信号主要集中在中脑部位。②FGF8在NTD鼠胚的表达,E9·5d时脑峡部位的染色减弱,前脑泡的前缘和神经管的尾端染色略有减弱;E10·5d,脑峡部位染色加深,且范围扩大,前脑泡的前缘和神经管的尾端染色较正常减弱。③STAT3在NTD鼠胚的表达,E9·5d和E10·5d时,STAT3的表达较正常鼠胚明显减少,在前脑泡和中脑泡均无明显的STAT3mRNA表达的阳性信号。结论FGF8可能作为STAT3的上游分子,二者共同参与了神经管的关闭。
- 纪华李泽桂丁震宇马路李红丽蔡文琴常智杰刘力傅新元
- 关键词：STAT3神经管缺陷
- RNAi的机制及在医学研究中的应用被引量：2
- 2007年
- RNAi干扰即一些小双链RNA可高效、特异地阻断体内特定基因的表达,导致特异mRNA降解,从而引起生物体内特异基因的沉默,使细胞表现出某种基因表型的缺失。近年来,RNAi这种技术作为一种简单有效的代替基因敲除的遗传工具在医学研究中得到了广泛的应用并有望成为攻克病毒、肿瘤等疾病的有效手段。
- 星懿展李泽桂
- 关键词：RNAI特异基因生物体内RNA降解基因表型基因敲除
- 低氧诱导因子-1的生物学特性与胚胎发育被引量：11
- 2004年
- 低氧诱导因子-1(hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1)是由α,β两个亚单位形成的二聚体,其中的HIF-1α受低氧的调节,通过与靶基因特定序列DNA结合而调控制它们的转录,这些基因包括血管内皮生长因子,红细胞生成素和其他的一系列与机体氧代谢有关的基因。文章着重论述了HIF-1的生物学特性及其与胚胎发育的关系。
- 丁震宇李泽桂
- 关键词：胚胎学内皮生长因子红细胞生成素
