国家自然科学基金(30170970)
- 作品数：10 被引量：114H指数：6
- 相关作者：杨大平郭铁芳韩雪峰张颖郝晨光更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学更多>>
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- 脱细胞基质与血管内皮细胞体外相容性的研究被引量：14
- 2003年
- 目的 将猪血管内皮细胞和异体猪血管脱细胞基质相结合 ,探讨开发一种制备血管移植物的新方法。方法 分别利用 0 .1%胰蛋白酶、0 .0 2 %乙二胺四乙酸钠 (EDTA)和 1.0 % Triton X- 10 0对猪主动脉作用 2 4小时和 176小时进行脱细胞。异体猪血管内皮细胞分离出来并进行体外细胞扩增 ,再将脱细胞的血管内表面种植上血管内皮细胞。通过光镜和扫描电镜检测脱细胞血管基质是否存在细胞成分和内皮细胞是否生长其上。 结果 酶 -化学除垢剂的脱细胞方法几乎使细胞完全脱落 ,且基质纤维的三维结构变得疏松。体外扩增的异体猪血管内皮细胞可以种植在脱细胞基质上并且具有伸展和增殖功能。 结论 Triton X- 10 0和胰蛋白酶制备的脱细胞基质与异体猪血管内皮细胞具有良好的生物相容性 ,能结合到一起并在体外生成血管移植物。
- 郭铁芳杨大平韩雪峰杜金荣张颖
- 关键词：血管疾病血管移植脱细胞基质血管内皮细胞体外相容性血管移植物
- 软骨微粒脱细胞基质微载体的制备及其特性研究被引量：7
- 2004年
- 目的制备以软骨微粒脱细胞基质为原料的微载体,为体外大量培养软骨细胞提供实验依据。方法利用胰蛋白酶等试剂制备直径为0.100～0.154mm的软骨微粒脱细胞基质并寻找胰蛋白酶的最佳含量及时间。取绵羊的新鲜膝、肘关节软骨600g,随机分为5组,每组8例,用不同含量的胰蛋白酶作用2～36h。标本进行大体观察,苏木精-伊红、胶原染色,光镜及扫描电镜观察,密度、含水量测定。结果微粒软骨脱细胞基质微载体无抗原性成分存在,主要含有胶原,氨基葡聚糖等混合细胞外基质成分。微粒呈不规则形,表面粗糙。软骨微粒脱细胞基质干重密度为0.6547g/mL,湿重密度为1.0627g/mL,含水量为72%。胰蛋白酶的最佳含量为0.25g/L,最适作用时间为(18.3±1.6)h。结论以软骨微粒为原料的微载体具有天然细胞外基质成分,是一种体外培养软骨细胞的良好载体。
- 韩雪峰杨大平郭铁芳方冬云张颖孟娟
- 关键词：软骨微粒体细胞培养
- 纤维蛋白胶塑形、异体微粒软骨脱细胞基质支架的人工软骨研究被引量：15
- 2005年
- 目的:利用软骨微粒脱细胞基质这种新型支架材料及纤维蛋白胶,体外构建可塑形及具有良好生物相容性的组织工程化软骨。方法:制备绵羊关节软骨微粒脱细胞基质并与体外扩增的异体关节软骨细胞及纤维蛋白胶混合,塑成圆柱形,体外培养。结果:软骨微粒脱细胞基质及纤维蛋白胶与异体软骨细胞有良好的生物相容性,软骨细胞生长和分泌功能良好,塑成的复合物具有一定的硬度和弹性。结论:塑成的圆柱形软骨细胞-异体软骨微粒脱细胞基质-纤维蛋白胶复合物可于体外形成软骨样组织,可进一步应用于体内修复关节软骨缺损。
- 韩雪峰杨大平郭铁芳郝晨光谷守滨王立春张颖
- 关键词：生物医学工程细胞外基质纤维蛋白组织粘着剂
- 脱细胞血管基质与血管平滑肌细胞的体外相容性被引量：2
- 2006年
- 目的:酶-化学除垢剂制备脱细胞血管基质,检测其与平滑肌细胞的相容性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法:实验于2003-12/2005-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。①脱细胞血管基质制备:在37℃水浴振荡条件下,犬总动脉先后用1g/L胰蛋白酶+0.2g/L乙二胺四乙酸钠和1.0%TritonX-100进行脱细胞处理24h和176h,充分漂洗,冷冻干燥后备用。②平滑肌细胞的提取:应用组织块贴壁法体外培养扩增犬隐静脉的平滑肌细胞。③四甲基偶氮唑盐法测定脱细胞血管基质浸提液对平滑肌细胞的毒性:设浸提原液、75%、50%和25%浸提液组,阴性对照组(DMEM+体积分数为0.1的胎牛血清培养液)。以阴性对照组的吸光度作为100%细胞增殖率,增殖百分率(P%)=犤实验组A值/阴性对照组A值犦×100%,按ISO和医学生物材料标准评定材料毒性。④急性毒性试验:取成年大鼠8只,将备用脱细胞血管基质研磨成粉末,生理盐水配成2g/L的混悬液,无菌条件下向大鼠腹腔内注入1mL脱细胞血管基质混悬液,观察72h,记录动物有无死亡及不良反应。⑤亚急性毒性试验:取成年大鼠12只,随机分成2组。实验组用脱细胞血管基质混悬液灌胃,剂量为500mg/kg质量,隔日1次,共10次;对照组给等量生理盐水灌胃。实验期间观察记录体质量变化及动物活动情况。21d取血检查血常规。⑥溶血试验:取抗凝兔血8mL,加入生理盐水10mL,稀释备用。取脱细胞血管基质粉末,加生理盐水中,再加入稀释兔血离心后取上清测定545nm处的吸光度。阴性对照为生理盐水10mL加入稀释兔血;阳性对照为蒸馏水加入稀释兔血。溶血率=犤(试验材料的吸光度-阴性对照的吸光度)/(阳性对照的吸光度-阴性对照的吸光度)犦×100%。⑦凝血试验:血库健康献血员新鲜血浆,用自动血液凝固测定仪进行凝血酶原凝固试验、测定部分凝血活酶凝固时间、凝
- 郭铁芳杨大平韩雪峰王冬艳郝晨光马辉许杰
- 关键词：生物相容性材料细胞外基质
- 兔软骨细胞与脱细胞软骨基质的生物相容性被引量：1
- 2006年
- 目的:将体外培养的兔软骨细胞种植到脱细胞软骨基质上,进行细胞形态学观察、细胞黏附及增殖活性的测定,检测制备的脱细胞软骨基质与软骨细胞的相容性,分析脱细胞软骨基质作为软骨组织工程支架的可能性。方法:实验于2005-03/09在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心完成。选取兔龄6个月的清洁级健康雄性日本大耳白兔,麻醉后无菌条件下显露兔双侧膝关节,切取股骨远端和胫骨近端关节软骨,经脱细胞处理制备成脱细胞软骨基质微粒作为软骨支架,并分离培养软骨细胞。将培养至第2代的软骨细胞用于实验,随机分为脱细胞基质组和空白对照组,每组复孔为6孔。脱细胞基质组将脱细胞基质颗粒单层铺满培养板孔底,接种软骨细胞。空白对照组单纯接种软骨细胞。倒置显微镜及扫描电镜观察软骨细胞与脱细胞软骨基质的黏附情况,通过四甲基偶氮唑盐法检测细胞接种2,6,12,24h细胞黏附性,测定细胞接种后1,3,5,7d时细胞的增殖活性,测定细胞培养1,2,3d时上清液中的羟脯氨酸含量。结果:①软骨细胞在脱细胞基质上黏附的形态学观察:扫描电镜观察脱细胞基质颗粒呈不规则多角形,软骨巢内的软骨细胞消失,表面粗糙不平。倒置相差显微镜下观察软骨细胞刚开始为小圆形,折光性较强,接种2h后有少量细胞开始黏附于脱细胞基质上,随时间的延长细胞黏附数量增加。②接种后不同时间点两组软骨细胞黏附情况的测定结果:与空白对照组比较,接种2h时脱细胞基质组软骨细胞黏附性明显降低(P<0.05),而在接种6,12,24h时两组基本相似(P>0.05)。③接种后不同时间点两组软骨细胞增殖能力的比较:接种1,3,5,7d时,脱细胞基质组软骨细胞增殖活性分别高于空白对照组21.4%,32.7%,32.5%,25.4%,差异显著(P<0.05)。④接种后不同时间点两组软骨细胞羟脯氨酸含量的比较:接种后第1,2天,脱细胞
- 王冬艳杨大平关德宏韩雪峰郭铁芳
- 关键词：生物医学工程组织学技术细胞外基质生物相容性材料
- 曲拉通X-100对制备脱细胞血管基质影响的实验研究被引量：72
- 2002年
- 目的 为将内皮细胞和平滑肌细胞种植于脱细胞血管基质 (ACTM)上形成组织工程化血管提供实验依据。方法 用曲拉通 (Triton)X 10 0等试剂制备猪胸主动脉ACTM ,并寻找曲拉通X 10 0的最佳浓度。取家猪的新鲜去除外膜胸主动脉 5 6根 ,随机分成 7组 ,每组分别浸入不同浓度的曲拉通X 10 0中作用 14 4～ 2 4 0h。标本作HE弹力纤维染色 ,大体、光镜及透射电镜观察。结果 经上述试剂处理后 ,光镜及透射电镜检查显示 ,制备出的猪胸主动脉脱细胞血管基质由胶原纤维、弹力纤维和某些不可溶的、变性细胞器构成。曲拉通X 10 0最佳浓度为 1%。时间为 176 2 5h± 5 5h。结论 本方法可成功制备猪胸主动脉ACTM ,1%曲拉通X 10
- 韩雪峰杨大平郭铁芳
- 关键词：人工血管动物实验
- 软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质体外相容性的研究被引量：13
- 2005年
- 目的探索以异体软骨微粒脱细胞基质为支架构建组织工程化软骨。方法多步骤酶法将绵羊关节软骨制成微粒脱细胞基质,行大体、光镜(苏木素伊红、胶原、甲苯胺蓝染色)、扫描电镜观察,同时测定微粒的胶原、氨基葡聚糖、DNA含量。异体绵羊关节软骨细胞分离、体外扩增,并与软骨微粒脱细胞基质混合体外培养0～35d,倒置显微镜及扫描、透射电镜观察,同时测定羟脯氨酸,氨基葡聚糖,DNA含量及细胞黏附率。结果软骨微粒脱细胞基质只含有基质成分,直径0.100～0.154mm,胶原,氨基葡聚糖及DNA含量分别为204.4±3.1μg/mg,18.3±2.0μg/mg和0.042±0.013μg/mg。异体软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周,二者形成的复合物中胶原、氨基葡聚糖及DNA含量于第7d与0d相比具有统计学意义(P<0.05),分别与14d(胶原、DNA)和21d(氨基葡聚糖)达高峰,随后维持在高水平。细胞黏附率为92%。结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性,为组织工程方法再造软骨提供又一支架材料。
- 韩雪峰杨大平郭铁芳方冬云徐学武张颖
- 关键词：脱细胞基质体外相容性氨基葡聚糖苏木素-伊红甲苯胺蓝染色组织工程方法
- 利用同种异体脱细胞血管基质预构小口径血管的研究
- 2007年
- 目的通过观察狗腹腔内预植同种异体脱细胞血管基质（ACVM）所形成的结缔组织管作为替代血管的力学性能，以及移植于自体股动脉后的组织结构变化，探讨利用同种异体ACVM预构小口径血管的可行性。方法在狗腹腔内埋植长8～12cm用硅胶棒支撑的已制备好的同种异体ACVM，3周后将硅胶棒周围形成的管状物作为血管替代物桥接移植于自体股动脉后，进行力学、组织学检查及与颈动脉、股静脉自体移植的对比分析。于移植术后6个月观测作为替代血管的通畅情况，组织学观察其组织结构变化。结果血管替代物的力学性能弱于正常动脉而强于正常静脉。组织学观察：形成的管状物内腔有少量的间皮细胞黏附；弹性纤维、胶原纤维结构较完整；纤维网中充满成纤维细胞。6个月后内皮细胞在替代物内壁连续覆盖，平滑肌细胞与对照组相近。移植6个月后异体ACVM组血管全部通畅。结论用同种异体ACVM预构的血管替代物，力学性能符合血管移植、血运重建的需求。所形成的结缔组织管作为血管替代物移植6个月后，管壁厚度及组织结构已接近正常血管。
- 马辉杨大平郝晨光郭铁芳韩雪峰刘国锋
- 关键词：脱细胞血管基质
- 利用脱细胞基质预构小口径组织工程血管的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的在犬腹腔内预置脱细胞基质后形成结缔组织管，观察将其作为血管替代物的力学特征及移植于自体股动脉后的组织结构变化。方法在犬腹腔内埋置长8～12cm用硅胶棒支撑的制备好的脱细胞基质，3周后将硅胶棒周围形成的管状物作为血管替代物移植于自体股动脉，同时对此管状物作力学、组织学检测及与颈动脉、股静脉的对比分析。在移植术后6个月观察血管通畅情况，光镜、透射及扫描电镜观察替代物的组织结构。结果①血管替代物的力学性能弱于正常动脉而强于正常静脉。②组织学观察：形成的管状物内腔有少量的间皮细胞黏附；弹性纤维、胶原纤维结构较完整；纤维网中充满成纤维母细胞。6个月后内皮细胞在替代物内壁覆盖连续。平滑肌细胞与对照组相近。③移植6个月后脱细胞基质组血管全部通畅。结论①用脱细胞基质预构的血管替代物力学性能符合血管移植、血运重建的需要。②所形成的血管替代物移植6个月后组织相容性良好，替代物管壁厚度及组织结构已接近正常血管。
- 马辉杨大平郝晨光郭铁芳刘国锋
- 关键词：脱细胞基质
- 新型天然血管支架:猪胸主动脉脱细胞血管基质的制备被引量：9
- 2002年
- 目的研究用酶-化学除垢剂联合法制备猪胸主动脉脱细胞血管。方法猪的新鲜胸主动脉经消毒后,于离心管中经过胰蛋白酶+EDTA,曲拉通X-100溶液作用后取标本。血管体积与各作用溶液体积比为3∶7。标本作苏木素—伊红、弹力纤维染色,大体、光镜及扫描电镜观察。结果胸主动脉中的细胞成分被除去,留下成分主要包括胶原纤维、弹性蛋白等。结论酶-化学除垢剂联合法可将猪胸主动脉细胞成分除去。胰蛋白酶,曲拉通X-100是制备血管脱细胞基质(ACTM)的良好试剂。
- 韩雪峰杨大平郭铁芳徐学武张颖
- 关键词：脱细胞基质血管胰蛋白酶
