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国家自然科学基金(81272648)
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1
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绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞在体内外定向分化的潜能
被引量:1
2014年
目的探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞(FLSCs)在体内及体外定向分化的潜能。方法取孕13d绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J小鼠胚胎肝脏,经机械消化和胶原酶消化获得FLSCs并扩大培养;成熟肝细胞来自于同品系小鼠成体肝脏,通过两步灌注胶原酶消化法提取,流式细胞仪鉴定其干细胞标志物的表达及自我增殖能力,RT—PCR及Westernblot测定AFP表达;分别将FLSCs经肝细胞生长因子(HGF)及TGF-β诱导分化后,Real—timePCR检测Alb、角蛋白CK一7、8、19mRNA以及Westernblot检测Alb、角蛋白CK-7、8、19蛋白在诱导前后的表达变化,鉴定其向肝细胞和胆管细胞双向分化的能力;经尾静脉注射FLSCs到野生型C57BL/6J肝切除小鼠体内,观察其在肝内重构肝组织的能力。计量资料采用t检验,各时相点比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD—t检验。结果成功克隆FLSCs细胞。流式细胞仪检测分离的FLSCs表达上皮细胞黏附分子(EpCAM)、CDl33、CD49f干细胞标志物,其阳性表达率分别为78.6%±3.3%、31.7%±2.5%、47.6%±1.8%。AFPmRNA在FLCs和成熟肝细胞中的相对表达量分别为0.640±0.115和0.053±0.012,蛋白相对表达量分别为1.3834±0.265和0.243±0.227,两者比较,差异有统计学意义(t=8.772,5.354,P〈0.05)。超低黏附培养皿培养FLPCs和成熟肝细胞,其形成克隆球数目分别为(234.04±57.0)个和(5.04±2.0)个,两者比较,差异有统计学意义(t=12.711,P〈O.05)。体外HGF诱导FLSCs分化,Alb、CK-8mRNA表达分别在8、10d到达峰值,分别为0.851±0.030和0.771±0.031;两者蛋白水平于第10天达峰值,分别为4.573±0.015和1.562±0.029。体外TGF—B诱导FISCs分化,CK-7、CK-19mRNA在第12天达峰值,分别为15.454±2.152和10.675±1.822;两者蛋白水平于第14天达峰�
黄启科
党立力
阮柏
张卓超
刘杰
王兴
郑志刚
陶开山
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胎肝干细胞
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