陕西省自然科学基金(2009JQ4012)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
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- 骨髓间充质干细胞移植对糖尿病大鼠的治疗作用被引量：4
- 2010年
- 目的观察同种大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对糖尿病的治疗作用及其可能机制。方法分离、培养和扩增供者（3～4周龄的SD大鼠）的BMSC。将成年SD大鼠分为正常对照组（12只）和糖尿病组（44只，制作糖尿病模型）；糖尿病组大鼠又分为不移植对照组（12只）和移植组（32只）。将分离纯化的同种大鼠BMSC经移植组大鼠尾静脉植入体内，每只大鼠移植BMSC约3×10^6个。移植后动态观察各组的血糖和胰岛素水平；移植后28d制备胰腺组织切片，通过激光共聚焦显微镜观察移植的BMSC对内源性胰岛细胞再生的影响。结果正常对照组血糖在4．0mmol／L左右波动；不移植对照组血糖显著升高，维持在23～27mmol／L；移植组血糖明显降低，术后72h平均血糖值为（11．7±2．4）mmol／L，并维持稳定至35d[血糖值（15．4±6．3）mmol／L]。移植组血清胰岛素水平较不移植对照组明显增高，术后12d时分别为（0．90±0．14）μg／ml和（0．35±0．06）μg/ml（P〈0．01），但仍明显低于正常对照组的（1．32±0．14）μg/ml，差异有统计学意义（P〈0．05）。正常对照组大鼠胰腺组织切片内胰岛素阳性细胞聚集，但增殖的细胞极少，约为（11±6）个／mm^2，内源性增生的胰岛素阳性细胞约（7±4）个／mm^2。不移植对照组大鼠胰腺组织中胰岛素阳性细胞较正常对照组少，但存在明显的增生，增殖细胞约（25±4）个/mm^2，其中内源性增生的胰岛素阳性细胞约（13±5）个／mm^2，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。移植组胰岛体积较不移植对照组增大，增殖细胞和内源性增生的胰岛素阳性细胞均明显增多，分别为（45±9）个／mm^2和（23±11）个／mm^2，与正常对照组、不移植对照组之间比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论糖尿病大鼠经同种BMSC移植后，可能通过促进内�
- 孙吉平尹爱萍吕晶谭峰杨世峰
- 关键词：骨髓间质干细胞胰岛糖尿病
- 阻断Notch信号通路促骨髓间质干细胞体外分化为胰岛样细胞被引量：1
- 2014年
- 目的通过Notch信号途径抑制剂DAPT构建Notch信号敲除模型，探讨Notch信号通路在骨髓问质干细胞（BMSCs）体外分化为胰岛样细胞中的作用。方法体外分离培养BMSCs并鉴定，体外诱导其分化。用ν-分泌酶特异性抑制剂DAPT阻断Notch信号通路。采用双硫腙（DTZ）染色法鉴定胰岛细胞；间接免疫荧光染色，RT—PCR和Western印迹等方法检测诱导后细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰十二指肠同源框1基因（Pdx-1）和神经元素3（Ngn3）的表达。ELISA法检测细胞葡萄糖刺激后分泌胰岛素水平。结果（1）BMSCs鉴定：间接免疫荧光染色结果显示：BMSCs表达CD59和CD90抗原，体外可表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）等神经细胞标记物，证实其具多向分化潜能。（2）MTr结果显示：ν-分泌酶抑制剂（DAPT）可抑制BMSCs增殖，其效应有时间和剂量依赖性。并以剂量和时间依赖性方式抑制Notch信号通路靶基因Hcsl的表达。用1、5、20μmol DAPT处理96h后细胞的Hesl表达分别为对照组的92．06％、71．40％、46．89％，提示其对Notch信号通路阻断率分别达到7．94％、28．6％和53．11％（均P＜0．05）。（3）间接免疫荧光结果显示：DAPT阻断组的胰岛素和胰高血糖素阳性细胞百分比较对照组明显增多[分别为（74．03±3．96）％比（36．49±3．24）％；（64．81±4．37）％比（37．50±3．69）％，均P＜0．051。提示阻断Notch信号通路后BMSCs体外分化效率增加。（4）RT-PCR和Western印迹结果提示：BSMCs诱导14d后可以检测到胰岛素、胰高血糖素表达，DAPT阻断后上述蛋白表达上调；BMSCs诱导早期（7d）即表达Pdx-1和Ngn3，14d后达到高峰，之后逐渐下降。DAPT阻断后Pdx-1和Ngn3的表达增加。（5）ELISA结果显示：诱导后细胞对葡萄糖刺激有分泌胰岛素反应，DAPT阻断后诱导细胞的反应更好。结论大鼠BM
- 张一婷尹爱平李利利孙吉平
- 关键词：间质干细胞骨髓胰岛NOTCH信号
- miR-384-5p通过阻断BMP7转录后调控促进肾纤维化被引量：3
- 2019年
- 目的研究miR-384-5p是否通过调节肾小管上皮细胞BMP7转录而影响肾纤维化。方法建立小鼠单侧输尿管阻塞模型(unilateral ureteral obstructive,UUO),流式细胞仪荧光激活细胞分选(FACS)分离肾组织获取肾小管上皮细胞进行培养,通过脂质体转染表达miR-384-5p的质粒、表达反义miR-384-5p的质粒及空白质粒;静脉注射空质粒( n =10)或反义-miR-384-5p质粒( n =10),14周后处死UUO模型小鼠,肾组织切片进行Masson三色染色评估肾纤维化程度;Western blot和实时定量PCR检测miRNA靶基因(miR-384-5p、miR-30、miR-92和miR-128)表达。结果 UUO模型14 d时肾脏出现明显纤维化,肾组织BMP7 mRNA明显增加,但BMP7蛋白无明显增加。miR-384-5p没有影响肾小管上皮细胞中BMP7 mRNA表达,但是过表达miR-384-5p的肾小管上皮细胞中BMP7蛋白明显减少,过表达反义miR-384-5p的肾小管上皮细胞中BMP7蛋白明显增加。免疫组化和定量PCR检测结果显示,UUO小鼠14 d肾组织纤维化显著增加,而注射反义miR-384-5p组肾组织纤维化程度明显减轻。虽然反义-miR-384-5p处理后不影响BMP7 mRNA水平,但能明显增加肾脏组织BMP7蛋白表达,提示抑制miR-384-5p能减轻UUO大鼠的肾损伤。结论 miR-384-5p是调节肾损伤后纤维化机制的关键因子,靶向miR-384-5p有希望成为防治肾脏纤维化的新方法。
- 张文静孙吉平吕佳李燕耿瀛洲邵耀中尹爱萍路万虹
- 关键词：肾小管上皮细胞肾纤维化
