国家林业局948项目(2011-G23)
- 作品数：21 被引量：138H指数：8
- 相关作者：戚存扣陈松付三雄张洁夫浦惠明更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学湖南农业大学更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划江苏省农业科技自主创新基金国家油菜产业技术体系建设专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 甘蓝型油菜CRABS CLAW基因克隆及其RNA干扰载体的构建被引量：2
- 2015年
- CRABS CLAW(CRC)转录因子是YABBY基因家族成员,在植物花器官发育过程中起重要作用。为进一步研究CRC转录因子在调控油菜花器官发育过程中的作用,本研究以甘蓝型油菜品种宁油10号花蕾RNA为材料,通过反转录PCR克隆到1个580 bp长度的CRC基因,并利用p Hurricane中间载体构建CRC基因的反向重复序列表达框,将CRC基因片段以正向的方式连接在1个可剪切的内含子的5'末端,以反向的方式连接到该内含子的3'末端;然后将Ca MV35S启动子序列和CRC基因的反向重复表达框再克隆到植物双元载体p CAMBIAI1390的p UC18多克隆位点,构建了干扰表达载体p A6-CRCi,经过酶切鉴定和测序分析,所构建的载体正确。
- 周晓婴付三雄陈松张超戚存扣
- 关键词：油菜RNA干扰载体
- 甘蓝型油菜(Brassica napus L.)耐淹性状的QTL定位分析被引量：3
- 2014年
- 研究甘蓝型油菜苗期耐淹性的遗传规律,对选育耐淹性强油菜新品种,提高油菜产量有重要意义。本研究应用甘蓝型油菜品系WR-4（耐淹）和WR-5（不耐淹）杂交后代衍生的F2∶3家系群体为材料,于2012年和2013年连续2年进行淹水处理：全淹6 d后解除淹水恢复生长,解除淹水后第7 d调查死苗率,并以此作为油菜苗期耐淹性的鉴定指标,对该F2：3家系群体耐淹性进行鉴定。应用QTL Ici Mapping V3.2软件的完备区间作图法对该F2：3家系群体耐淹性进行QTL定位分析。结果表明,WR-4平均死苗率为31.0%（22.3%~39.7%）,而WR-5平均死苗率为72.1%（67.0%~77.2%）,亲本间死苗率差异显著（P〈0.01）。F2：3家系群体的死苗率呈偏正态分布,家系间死苗率平均为63.77%（2.0%~100.0%）。同一群体2年试验共检测到8个与耐淹性相关的QTL位点。2012年共检测到q WR1、q WR5、q WR9-1、q WR9-2和q WR17等5个QTLs,分别位于LG1、LG5、LG9和LG17连锁群上,贡献率为2.24%~47.58%;2013年共检测到q WR1、q WR9-1和q WR9-2等3个QTLs,分别位于LG1和LG9连锁群上,贡献率为3.02%~23.57%。其中q WR1、q WR9-1和q WR9-2在2年试验中均能检测到,其平均遗传贡献率分别为3.03%、15.87%和35.57%。表明,q WR1、q WR9-1和q WR9-2 3个QTLs位点可能与油菜苗期耐淹性相关,而q WR9-1和q WR9-2可能为控制油菜苗期耐淹性遗传的主效QTL。
- 金岩吕艳艳付三雄戚存扣
- 关键词：甘蓝型油菜耐淹性QTL
- 甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA 干扰载体的构建被引量：5
- 2013年
- 采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因。为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK基因长498 bp的siRNA靶序列,连接到pEASY-T1载体上,采用Not I和Xho I酶切,酶切产物连接到RNAi平台载体pHurricane的Not I和Xho I位点,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK基因反向重复框克隆到加入napin启动子的pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体。限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础。
- 付三雄张超陈松周晓婴戚存扣
- 关键词：甘蓝型油菜丙酮酸激酶RNA干扰
- 油菜B-box型锌指蛋白基因BnSTO的克隆和表达被引量：3
- 2016年
- B-box型锌指蛋白参与植物多种生长发育和非生物逆境胁迫响应过程。笔者通过RT-PCR克隆得到甘蓝型油菜2个B-box型锌指蛋白基因Bn STO-1和Bn STO-2。Bn STO-1的ORF长度为723 bp,推测编码240个氨基酸,定位于A8染色体。Bn STO-2的ORF长度为726 bp,推测编码241个氨基酸,定位于C8染色体。2个基因均由3个外显子和2个内含子构成,在氨基酸水平上的相似性达到了96.68%。系统进化分析表明Bn STO与拟南芥At STO的亲缘关系较近,同源性较高。荧光实时定量PCR结果表明Bn STO在检测的各个组织中均有表达,其中叶和蕾中的表达量最高;高盐、干旱和高温能显著诱导Bn STO-1和Bn STO-2的表达,但出现峰值的时间不同,推测2个基因均可能参与了油菜的非生物逆境胁迫响应。
- 胡茂龙龙卫华高建芹张洁夫陈松浦惠明
- 关键词：甘蓝型油菜非生物逆境
- 油菜苗期耐淹性快速筛选方法的建立及验证被引量：17
- 2012年
- 为建立一种快速准确的油菜苗期耐淹性鉴定方法,对油菜种质资源进行耐淹试验。通过调查幼苗期湿害/渍害、半淹、全淹三种处理下的死苗率,发现全淹(没顶淹水)6d、排水后7d的相对死苗率可作为幼苗耐淹性鉴定指标。具体过程如下:选取饱满种子,置于铺有1层湿润滤纸的培养皿中,25℃处理36h,取正常发芽的种子均匀移栽到塑料杯里的潮湿土壤中,培养条件为光照10h 25℃、黑暗14h 20℃,生长36h;待幼苗子叶平展时,每杯留苗20株全淹6d,排水后7d调查死苗率。用此方法对50份油菜种质资源进行耐淹性鉴定,获得3个较耐淹材料和5个淹水敏感材料。与已知耐湿系数的材料相比,它们的耐淹特性在形态和生理上均得到验证,表明本文方法可行,具有快速、准确的优点。
- 李云付三雄戚存扣
- 关键词：油菜苗期耐淹性淹水
- 转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测被引量：13
- 2014年
- W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系。本研究应用温度不对称PCR(TAIL-PCR)技术扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列。其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27%、A+T含量为68.73%;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6%、A+T含量为67.4%,表明该T-DNA整合在富含A/T区。依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计的2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485 bp和405 bp预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术。应用该检测技术可以从含有0.1%W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达到0.1%。表明应用该技术可对W-4转基因事件进行特异性检测。
- 申爱娟陈松周晓婴戚存扣
- 关键词：转基因油菜旁侧序列
- 甘蓝型油菜叶片蛋白质双向电泳体系优化被引量：5
- 2012年
- 比较了甘蓝型油菜叶片总蛋白质提取的2种不同方法,探讨了叶片蛋白质分离的双向凝胶电泳技术优化方案。结果表明:采用TCA/丙酮法较Tris-Cl法更适合蛋白质提取,选择pH为4～7的固相胶条和分离胶浓度为12%的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)能够使蛋白质得到充分分离,采用考马斯亮蓝G250染色剂进行2次染色,可提高2-DE分辨率和实验解析度,优化后的双向电泳体系能够分离出2 000个以上的蛋白点,并且重复稳定性好。
- 舒佳宾文李官春云
- 关键词：甘蓝型油菜叶片蛋白质双向电泳
- 油菜半矮秆新种质10D130株高主基因+多基因遗传模型分析被引量：8
- 2013年
- 株高是油菜重要的株型改良性状之一,与油菜的产量、抗倒伏能力和机械收获适应性紧密相关。本研究利用株高性状差异较大的半矮秆新种质10D130和常规品种中双11号进行杂交,构建6世代遗传分析群体(P1、P2、F1、F2、B1、B2),以主基因+多基因混合遗传模型对该组合株高进行遗传分析。结果表明:10D130×中双11号组合株高受到1对加性-显性主基因+加性-显性-上位性多基因控制(D-0模型)。其中,株高性状加性效应值为-8.58,显性效应值为7.44。在B1、B2和F23个分离世代群体中主基因遗传率分别为23.52%、0.91%和17.81%,多基因遗传率分别为30.05%、68.05%和39.35%。10D130半矮秆遗传分析表明在该材料的运用上不仅要考虑主基因的作用、还要考虑多基因与环境对株高性状的影响。
- 李军庆崔翠陈雪峰唐静卜海东李加纳周清元
- 关键词：油菜株高主基因+多基因
- 甘蓝型油菜裂角性快速鉴定的方法及其应用被引量：3
- 2014年
- 采用改良的随机碰撞法对162份常规油菜品种和219份高世代自交系材料的裂角性进行鉴定。结果发现,抗裂角材料的数量在常规品种中占比为25.3%,在自交系中占比为21.9%,与前人的研究结果相比,抗裂角性好的品种占比越来越高,抗裂角已经成为我国当前油菜育种的重要目标之一,而改良的随机碰撞法可以为油菜裂角性评价和抗裂角品种选育提供技术依据。
- 彭琦张洁夫张维陈松
- 关键词：甘蓝型油菜
- 油菜花色研究进展被引量：9
- 2013年
- 花色是重要的油菜性状之一,具有很大的实践价值和理论研究意义。对油菜花色的种类、来源、遗传、鉴定和呈色机理等研究现状进行了综述,为油菜花色的研究和选育提供参考。
- 阴长发官春云
- 关键词：油菜花色
