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国家科技支撑计划(2006BAD06A14): 作品数：67 被引量：315H指数：10; 相关作者：常惠芸独军政高闪电丛国正邵军军更多>>; 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所中国检验检疫科学研究院中国农业大学更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

细胞凋亡信号传导通路的研究进展被引量：23: 2010年; 细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活靶分子而产生细胞效应,引发细胞凋亡。一般认为,细胞凋亡存在3条主要通路:线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,各通路间互相联系,共同调节细胞凋亡。; 刘萍丛国正独军政邵军军林彤常惠芸; 关键词：细胞凋亡信号传导死亡受体线粒体内质网

抗流感病毒药物研究进展被引量：4: 2011年; 流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属，根据病毒核蛋白分A、B和C三型。A型流感病毒能感染多种动物包括家禽、马、猪和人，B型和C型则主要感染人。当前致死率最高的高致病性禽流感H5N1病毒和2009年暴发的H1N1甲型流感病毒均为A型流感病毒。; 张涛王承宇高玉伟杨松涛王铁成夏咸柱; 关键词：抗流感病毒 A型流感病毒药物 H5N1病毒正粘病毒科核蛋白

Integrin Activation and Viral Infection: 2008年; Integrins are members of a ubiquitous membrane receptor family which includes 18 different α subunits and 8 β subunits forming more than 20 α/β heterodimers. Integrins play key functions in vascular endothelial cell and tumour cell adhesion, lymphocyte trafficking, tumor growth and viral infection. Current understanding of the molecular basis of integrins as viral receptors has been achieved through many decades of study into the biology of transmembrane glycoproteins and their interactions with several viruses. This review provides a summary of the current knowledge on the molecular bases of interactions between viruses and integrins, which are of potential practical significance. Inhibition of virus-integrin interactions at the points of virus attachment or entry will provide a novel approach for the therapeutic treatment of viral diseases.; Shan-dian GAO Jun-zheng DU Jian-hua ZHOU Hui-yun CHANG Qing-ge XIE; 关键词：整联蛋白病毒感染细胞受体

亚欧型及南非型口蹄疫一步法多重荧光RT-PCR检测方法建立被引量：7: 2010年; 【目的】口蹄疫是一种严重的"政治经济病",世界各国面临的口岸疫情防控形势均十分严峻。针对南非型(SATⅠ,SATⅡ,SATⅢ型)潜在入侵中国的严峻态势,为了防止疫情跨境传播,迫切需要建立有效甄别亚欧型(A、O、C及亚洲Ⅰ型)与南非型口蹄疫的检测方法,以进一步提高防控工作的准确性。【方法】选择口蹄疫病毒(FMDV)基因组保守的5'非翻译区(5'UTR)基因为靶序列,分别设计亚欧型及南非型FMDV特异的荧光PCR引物及Taqman探针,通过对反应体系和反应条件的优化,以插入扩增目的片段的阳性克隆质粒为模板,建立多重荧光PCR检测体系;进一步以体外转录cRNA作为阳性质控品,建立亚欧型及南非型FMDV一步法多重荧光RT-PCR鉴别方法,并进行敏感性、特异性确定及田间样本检测。【结果】本研究建立的FMDV多重荧光PCR检测方法,对亚欧型及南非型FMDV阳性质粒的扩增效率均在90%以上;以倍比稀释的体外转录cRNA作为模板,进行敏感性测试表明,本方法最低可检测至7.6×10-9ng南非型cRNA和6.3×10-8ng亚欧型cRNA;特异性试验结果显示本方法可以有效甄别亚欧型与南非型FMDV;田间样本检测结果与样品实际感染情况一致。【结论】本研究建立的FMDV一步法多重荧光RT-PCR检测方法敏感、特异而且快速,为亚欧型与南非型口蹄疫的鉴别诊断及流行病学调查提供了新的方法。; 吴绍强查成刚邓俊花林祥梅刘建梅琳; 关键词：口蹄疫病毒荧光RT-PCR

鸡传染性囊病病毒青岛分离株VP2基因的克隆及序列分析被引量：1: 2009年; 为了克隆传染性囊病病毒青岛分离株(IBDV-QD)的VP2基因及对其高变区序列进行分析,首先根据GenBank上已经发表的传染性囊病病毒(IBDV)UK661株的核苷酸序列,设计并合成了一对特异性的扩增IBDV-QDVP2基因的引物。以IBDV-QD株基因组为模版,利用RT-PCR技术扩增出长约1.5kb的基因片段,将其连接到pGEM-T-Easy载体上。经酶切分析、PCR鉴定及核苷酸序列测定,成功获得该分离株VP2基因的重组质粒。将IBDV-QD株VP2基因的高变区核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的14株IBDV相应序列应用软件进行同源性比较,并构建系统进化树。同源性比较和进化树分析表明,IBDV-QD与IBDV超强毒株(vvIBDV)关系最近,与标准强毒株、弱毒株、变异株相差较远;并且我国不同地区的vvIBDV存在差异,这为我国传染性囊病的流行病学调查奠定了基础。; 苏晓鸥乔俊文李玉荣赵德明杨利峰尹晓敏周向梅杨建民; 关键词：VP2基因

PrP106-126诱导的N2a细胞神经毒性中神经营养因子受体p75^NTR的表达变化研究: 2009年; 神经元死亡是朊病毒病的主要病理学特征。朊蛋白多肽PrP106-126能够对神经细胞表现神经毒性,引起细胞凋亡。细胞表面蛋白神经营养因子受体p75NTR的胞外区域可以与PrP106-126结合并产生促凋亡作用。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用荧光定量RT-PCR和Western Blot技术,以及DNA Ladder和AnnexinV-FITC/PI双重染色流式细胞凋亡检测技术对p75NTR介导的PrP106-126神经毒性分子机制进行了研究。结果发现在PrP106-126诱导的N2a细胞凋亡过程中,p75NTR的mRNA转录水平和蛋白表达水平均显著升高,以p75NTR多克隆抗体sc-6189阻断PrP 106-126与p75NTR的相互作用后,减弱了PrP106-126诱导的N2a细胞凋亡效果。该研究揭示了PrP106-126诱导的N2a细胞毒性中p75NTR受体的表达变化,为解释朊病毒病的发病机制提供了重要数据。; 白瑜李玉荣周向梅尹晓敏赵德明; 关键词：朊病毒 P75NTR 神经毒性

不同脱乙酰度壳寡糖促胰岛细胞增殖、胰岛素分泌及调节餐后血糖作用的研究被引量：4: 2009年; 试验旨在探讨N-乙酰化反应制备的不同脱乙酰度壳寡糖对胰岛β细胞系NIT-1的促增殖及胰岛素分泌作用,并进一步探讨在体内壳寡糖降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠餐后2h血糖的作用。通过N-乙酰化反应制备得到水溶性的不同脱乙酰度的壳寡糖,在细胞水平上,通过形态学观察、MTT比色法、放射免疫等方法研究不同浓度的壳寡糖对胰岛β细胞系NIT-1细胞的增殖及促胰岛素分泌作用;通过一般状态观察、餐后2h血糖、尿糖、糖耐量测定研究了不同脱乙酰度壳寡糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠降低餐后2h血糖和改善葡萄糖耐量的作用。结果表明,对β细胞体外增殖具有明显的促进作用,并可以显著促进原代培养胰岛细胞的胰岛素分泌。因此,壳寡糖在体内能有效改善糖尿病大鼠的体重减轻、多饮、多食等症状,降低餐后2h血糖值和尿糖,改善葡萄糖耐量。; 刘冰秦贞奎林祥梅梅琳刘万顺韩宝芹; 关键词：壳寡糖 2H血糖糖耐量试验胰岛细胞链脲佐菌素

特异性干扰PB-1基因对H5N1高致病性禽流感病毒复制的影响被引量：1: 2013年; 针对H5N1高致病性禽流感病毒PB-1基因,通过RNA干扰技术,设计siRNA,研究其抑制病毒复制的效果.siRNA转染MDCK细胞并接毒后,病毒滴度测定、Real-time PCR和间接免疫荧光试验结果显示,所设计的siRNA(ps-PB1-777)具有明显的抑制病毒复制的效果,PB-1基因的拷贝数和病毒蛋白表达都下降.设计的siRNA可显著抑制高致病性禽流感病毒的复制.因此,本研究中PB-1基因的有效siRNA可为预防和治疗H5N1高致病性禽流感提供合理的技术支持和物质储备.; 张伟王铁成王承宇杨松涛高玉伟夏咸柱; 关键词：禽流感干扰RNA

绵羊朊病毒受体37kD/67kD LRP/LR实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建被引量：2: 2009年; 为实时相对荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体LRP/LRmRNA表达水平,构建目的基因LRP/LR、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线;根据GeneBank中绵羊37 kD/67 kDLRP/LR（LRP/LR）和β-actin基因编码区保守序列,设计特异引物;提取肠道组织mRNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后,与pGEM-T-easy载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定后,获得阳性LRP/LR,β-actin重组质粒;将阳性重组质粒107～102梯度稀释作为模板,然后进行实时荧光定量PCR;系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;LRP/LR和-βactin标准曲线相关系数分别为r2=0.999,r2=0.997,说明线性关系好;重复性试验结果显示所构建的重组质粒10次同条件扩增均Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5%,说明标准曲线重复性好,稳定性高。说明成功构建目的基因LRP/LR,内参基因β-actin标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体mRNA表达水平提供了基础。; 乔俊文苏晓鸥赵德明李玉荣王伊琴; 关键词：REAL-TIME PCR 绵羊重组质粒

用protein G纯化口蹄疫病毒单克隆抗体的特性分析被引量：3: 2009年; 目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG亲和层析柱进行亲和层析纯化单体,并用SDS-PAGE和单抗检测方法分析其纯化抗体的纯度和活性。结果经3次亚克隆获得了一株杂交瘤细胞株(10E6),抗体亚类鉴定为IgG2a;SDS-PAGE电泳显示,纯化的抗体纯度较高,只有IgG2a的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;单抗ELISA检测方法显示,纯化的抗体具有良好的活性,其效价为1∶102400,高于腹水效价。结论用proteinG亲和层析法获得了高纯度和高效价的单克隆抗体,将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究奠定基础。; 宋帅林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸; 关键词：O型口蹄疫病毒单克隆抗体

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