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排序方式：

大鼠4-1BB基因shRNA表达质粒的构建、鉴定和筛选: 2013年; 目的为研究小干扰RNA（siRNA）在移植免疫、肿瘤防治等方面的应用，构建针对大鼠T细胞4-1BB基因编码区的短发夹RNA（shRNA）表达质粒。方法根据RNA干扰（RNAi）作用原理，设计、合成4条T细胞4-1BB基因的shRNA（shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758）DNA片段，插入质粒pGPU6，构建4个编码目的shRNA的表达质粒（p441、p540、p621、p758），酶切及测序鉴定。设对照组，利用电穿孔法在体外将目的基因片段导入BN大鼠T细胞，48h后，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术（FCM）检测其对T细胞4-1BB基因表达的抑制作用，并筛选、确定最佳效果的干扰质粒。结果酶切及测序证实成功构建重组干扰质粒v441、p540、p621和p758，转染T细胞后，4-1BB相对表达量分别为（33．4±2．3）％、（53．0±2．3）％、（62．1±3．1）％、（40．9±1．5）％，对照组4-1BB相对表达量为（67．2±1．5）％。其中p441沉默效果最佳（P〈0．01）。结论siRNA具有抑制活化T细胞4-1BB基因表达的作用，干涉靶点具有选择性。; 侍阳宋庆伟于生才周晓俊殷骏钱海鑫; 关键词：小干扰RNA 基因沉默

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徐州市科技计划项目(XM098092)