福建省自然科学基金(2013J01048)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 相关作者：张光亚葛慧华林源清沈婷婷王金丹更多>>
- 相关机构：华侨大学国家海洋局第三海洋研究所更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术化学工程医药卫生更多>>
- 类弹性蛋白多肽长度对不溶活性ELPs-木聚糖酶聚集体酶学性质的影响
- 2016年
- 为了系统研究ELPs的长度对不溶活性ELPs-木聚糖酶聚集体(IAEXA)的影响,构建带有木聚糖酶与不同长度ELPs融合基因的克隆及表达载体,经表达、纯化得到不同长度ELPs与木聚糖酶的不溶活性聚集体,并考察其酶学性质.结果表明:所有IAEXA的最适温度均为70℃,比未连接ELPs的自由木聚糖酶提高了20℃,其最适反应p H均为7.0,比自由酶提高了1个p H单位,且在p H为8-9时仍保持80%以上活力,其耐碱能力也有较大提升.其中,由40个重复ELPs形成的IAEXA热稳定性最好,80个重复的ELPs的p H稳定性最好,其重复使用性也最佳,而60个重复的ELPs形成的IAEXA与底物的亲和性最佳.因此,较长ELPs有助于提高IAEXA的催化效率及重复使用率,拓展其应用范围.
- 葛慧华吴姝羽沈婷婷张光亚
- 关键词：木聚糖酶酶学性质固定化酶
- β-甘露聚糖酶理化性质与其最适pH的相关性被引量：1
- 2014年
- 为了探究影响GH5家族β-甘露聚糖酶最适pH的各种因素,利用该酶的序列信息,构建了基于氨基酸组成的β-甘露聚糖酶理化性质与其最适pH的相关性模型。结果表明:该酶N端氨基酸序列是影响其最适pH的重要因素,在243个理化性质中有17个呈极显著相关,其中7个呈正相关。优化的转移能量参数相关性最高,为0.78:7个正相关的理化性质中,与螺旋相关的理化性质占3个。优化的转移能量参数和螺旋是影响pH稳定性的最重要的因素。所建立的模型为研究该酶酸碱适应性机理提供了一种简单有效的方法。
- 林源清王粲张光亚
- 关键词：Β-甘露聚糖酶最适PH理化性质
- 基于分段氨基酸组成预测β-琼胶酶的最适温度
- 2015年
- 为了探究氨基酸组成对β-琼胶酶催化底物时的最适温度的影响,分别统计分析了酶全长、N端、M段及C端序列中20种氨基酸出现的频次。以支持向量机回归构建了氨基酸组成与β-琼胶酶最适温度的模型,10-倍交叉验证获得最小平均绝对误差(MAE),线性核函数的M端为4.36℃,RBF核函数的M端为4.16℃,独立样本测试得到N端的MAE分别为3.12℃和4.43℃。上述结果表明,该酶N端和M端是影响其最适温度的重要因素。通过比较最适温度为60℃和30℃β-琼胶酶的高级结构,推测M端和N端中3个螺旋结构是影响该酶最适温度的重要因素。
- 楚云猛易志伟产竹华曾润颖张光亚
- 关键词：Β-琼胶酶氨基酸组成最适温度支持向量机回归
- 以分子动力学模拟探究苹果酸脱氢酶的嗜极机制被引量：1
- 2014年
- 为了研究嗜热酶、嗜冷酶在极端温度下维持稳定性和活性的机制,本文通过分子动力学模拟的方法,从原子尺度上分析了嗜热苹果酸脱氢酶及其同源嗜冷酶的分子动力学特性。数据显示嗜热酶所形成的盐桥和氢键明显多于嗜冷酶。通过比较均方根偏差、回旋半径、氨基酸残基的柔性等值,发现嗜热酶的结构较非嗜热酶更具刚性。盐桥、氢键数目的不同和整体结构的刚柔性,很可能会是嗜热、嗜冷酶在极端温度下能维持结构稳定的主要原因。
- 沈婷婷王四华孟菲张光亚
- 关键词：苹果酸脱氢酶嗜热酶分子动力学模拟
- 黄鳍金枪鱼抗菌肽YFGAP在大肠杆菌中融合表达及其活性检测被引量：3
- 2015年
- 【目的】抗菌肽YFGAP由32个氨基酸组成,分子量为3.4 k D,对革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)表现出强效的抑制作用,不具有溶血活性。在大肠杆菌中表达抗菌肽YFGAP,分离纯化抗菌肽并鉴定其生物学活性。【方法】化学合成EK-YFGAP和L-EK-YFGAP基因序列,构建表达载体p ET22b-ELP20-EK-YFGAP、p ET22b-ELP40-EK-YFGAP和p ET22b-ELP40-L-EKYFGAP,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,可逆相变循环纯化融合蛋白。肠激酶酶切,经Vivaspin Turbo纯化柱纯化,测定重组抗菌肽的抑菌活性和溶血活性。【结果】纯化出两种融合蛋白ELP40-EK-YFGAP和ELP40-L-EK-YFGAP,肠激酶酶切纯化后获得重组抗菌肽YFGAP,对4种病原菌均有抑制效果,溶血活性较低。【结论】以ELPs作为非色谱纯化标签,实现了抗菌肽YFGAP的融合表达,具有操作简单、成本低、易于扩大的优势,为重组抗菌肽的量化制备及应用提供了理论基础和技术支持。
- 李慧陈云华张光亚李夏兰
- 关键词：抗菌肽融合蛋白抑菌活性
- G/11木聚糖酶最适pH值的预测及其与氨基酸位置的关系被引量：2
- 2014年
- 把木聚糖酶全序列均分为N端,中间端(I端)及C端3个部分,并分别以全序列及分段氨基酸的组成作为模型输入值.通过主成分分析(PCA)方法探讨全序列及分段氨基酸组成和最适pH值的相关性,运用均匀设计法分别优化支持向量机和BP神经网络运行参数.研究结果表明:支持向量机获得的预测模型优于神经网络,其中RBF支持向量机是最佳的模型.主成分分析结果显示:I端主成分跟最适pH值相关性最高;相关系数R绝对值为0.68,得到的结果与支持向量机结果一致.
- 林源清张光亚
- 关键词：木聚糖酶氨基酸BP神经网络均匀设计主成分分析
- 蛋白质环化的研究进展被引量：3
- 2016年
- 天然蛋白质在生物体内主要以线性形式存在,由于多数蛋白质(酶)热稳定性较差,制约了其在工业催化、食品制造、医药领域的高效应用。自然界中发现的天然环肽类物质具有首尾相连的环化结构,使蛋白质具有较高的稳定性,为改造酶的结构、提高其热稳定性及拓宽其应用范围提供了新思路。本文根据国内外在蛋白质环化领域的新动态并结合本实验室的研究,系统介绍了内含肽介导的蛋白质反式剪接、表达蛋白连接、转肽酶催化的转肽作用等几种传统蛋白质环化方法,着重介绍了基于新型超强分子粘合剂Spy Tag/Spy Catcher介导的蛋白质环化的研究。
- 王心哲张光亚
- 关键词：蛋白质反式剪接SPY
- 影响类弹性蛋白多肽自组装成微球的因素及其作用机制被引量：4
- 2014年
- 影响类弹性蛋白多肽(ELPs)自组装成微球的因素较多,目前尚缺乏系统研究。以类弹性蛋白多肽[KV8F]n为对象,利用动态光散射仪测定了不同条件下其自组装成微球的粒径。结果表明:随着分子量的增加ELPs形成的微球粒径也随之增大,粒径的均一度减小;当盐浓度低于0.4 mol/L时,盐浓度的增加,微球粒径相应增加,而盐浓度高于0.4 mol/L则呈减少的趋势,但粒径均大于1.1μm;而当ELPs末端融合木聚糖酶和1,3-丙二醇氧化还原酶后,其自组装形成的微球粒径急剧减小,约为游离ELPs的1/10,分别为151.0 nm和174.2 nm。导致这种现象的原因可能是酶分子和ELPs通过静电引力相互作用后,酶分子的空间位阻妨碍了ELPs分子的聚集。
- 葛慧华王文研张光亚王士斌
- 关键词：空间位阻自组装融合蛋白
- 多酶共固定化的研究进展被引量：7
- 2015年
- 固定化酶技术是现代生物催化的核心技术。过去几十年里,固定化酶技术的研究主要集中在单酶固定化。近年来,多酶共固定化由于具有可增加反应的局部浓度、提高反应收率等优点而得到研究者的广泛关注。本文根据国内外研究现状并结合本实验研究从多酶非特异性共价共固定化、非特异性非共价共固定化、非共价包埋固定化以及位点特异性固定化四个方面阐述多酶固定化方法的研究进展,并分析和展望了其在工业上的应用前景。
- 王金丹张光亚
- 关键词：包埋固定化
- 嗜冷嗜盐菌Halorubrum lacusprofundi中蛋白质稳定性机制的探讨被引量：2
- 2016年
- 研究嗜冷嗜盐菌H.lacusprofundi中蛋白质在不同结构区域的特点,对了解其稳定的结构基础及设计新型嗜冷嗜盐蛋白具有重要意义。通过对991对同源嗜冷嗜盐菌和嗜温嗜盐菌的序列及高级结构信息进行统计学对比分析,结果表明:嗜冷嗜盐菌和嗜温嗜盐菌氨基酸组成中亮氨酸、天冬酰胺、含硫氨基酸、带电氨基酸差异显著;苏氨酸差异很显著;丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、小分子氨基酸差异极显著。其中苯丙氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、中性氨基酸在嗜冷嗜盐菌蛋白的含量较高,亮氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、含硫氨基酸、小分子氨基酸在嗜温嗜盐菌中的含量较高。嗜冷嗜盐蛋白含有更多的中性氨基酸、小分子氨基酸和非极性氨基酸,从而降低蛋白质中氢键等非共价键的相互作用,提高蛋白质结构的柔韧性和可变性。
- 张丹丹蔡征文姚谦豪张光亚
- 关键词：氨基酸蛋白质稳定性疏水性
