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博士科研启动基金(BS2006-14)

作品数：1 被引量：0H指数：0
相关作者：刘彦虹吴晓岩胡惠静张丽梅更多>>
相关机构：黑龙江省医院哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
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文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇点突变
  • 1篇突变
  • 1篇黏着斑
  • 1篇黏着斑激酶
  • 1篇磷酸
  • 1篇磷酸化
  • 1篇激酶
  • 1篇CP
  • 1篇GP

机构

  • 1篇哈尔滨医科大...
  • 1篇黑龙江省医院

作者

  • 1篇张丽梅
  • 1篇胡惠静
  • 1篇吴晓岩
  • 1篇刘彦虹

传媒

  • 1篇国际免疫学杂...

年份

  • 1篇2010
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
GPⅢa^T1565C点突变对FAK磷酸化的影响
2010年
目的建立稳定表达野生型CPⅡ b／Ⅲa和突变型GPⅡb／Ⅲa^T1565C的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系，探讨GPⅡb／Ⅲa^T1565C点突变对黏着斑激酶（FAK）磷酸化的影响。方法采用脂质体介导基因转移法将真核表达载体pcDNA3．1（＋）Ⅱb分别与pcDNA3．i（＋）Ⅲa或pcDNA3．1（＋）Ⅲa^T1565C共转染到CHO细胞中，经C,418筛选出稳定表达野生型GPⅡb／Ⅲa和突变型GPⅡb／Ⅲa^T1565C的CHO细胞系。流式细胞术（Flowcytom—etry，FCM）检测野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞表面CD41和CD61的表达。免疫沉淀、免疫印迹（Westernblot）和FCM细胞内染色等方法检测野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞经纤维蛋白原（Fbg）激活后发生的FAK酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化。结果野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞表面CD41和CD61均高效表达，分别为97．19％和99．71％。免疫沉淀、Western blot检测结果显示，野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞经Fbg激活90min后，分别有16．24％和20．44％的FAK发生酪氨酸磷酸化；FCM细胞内染色检测结果显示，经Fbg激活90min后，野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞均不发生FAK丝氨酸磷酸化；激活48h后，野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞分别有34．89％和73．84％发生FAK丝氨酸磷酸化。结论成功构建稳定表达野生型GPⅡb／Ⅲa和突变型GPⅡb／ⅢaaT1565C托的CIIO细胞系。GPIU／ⅢaaT1565C点突变能够增强FAK酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化，因此可能增强GPⅡb／Ⅲa介导的细胞外向内信号转导功能。
胡惠静刘彦虹吴晓岩张丽梅
关键词：点突变黏着斑激酶磷酸化
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