国家自然科学基金(81272683)
- 作品数：12 被引量：53H指数：4
- 相关作者：王凤泽费洪荣王桂玲赵莹焦鹏更多>>
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- Perifosine通过抑制PI3K/Akt途径调节人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡与自噬被引量：11
- 2016年
- 目的:探讨Akt激酶抑制剂perifosine对人胶质瘤U251细胞凋亡、细胞周期和自噬的影响,确定perifosine诱导的细胞自噬与其促进胶质瘤细胞凋亡的相关性。方法:Perifosine处理U251细胞后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析perifosine对U251细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双标法检测perifosine对胶质瘤细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测细胞内P21、P27和cyclin B1等细胞周期调控相关蛋白以及caspase-9、PARP等细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过观察细胞内自噬标志分子LC3-II的分布与表达来确定perifosine对自噬的诱导作用。结果:Perifosine剂量依赖性地抑制U251细胞活力,能够通过抑制cyclin B1的表达而阻滞胶质瘤细胞周期于G_2期。Perifosine促进了U251细胞内caspase-9和PARP的剪切,抑制survivin表达,从而诱导胶质瘤细胞发生凋亡。同时,perifosine与自噬抑制剂氯喹联用后,U251细胞凋亡数量明显增加。结论:Perifosine能够抑制U251细胞的增殖,同时诱导细胞发生凋亡与自噬,抑制自噬促进了perifosine诱导的胶质瘤细胞凋亡。
- 李若彤王丽曹亭陈圣文费洪荣王凤泽
- 关键词：PERIFOSINEAKT胶质瘤自噬
- 告达庭下调β-catenin/survivin抑制神经胶质瘤C6细胞迁移实验研究被引量：3
- 2014年
- 目的观察告达庭对大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖和迁移能力的影响,并初步探讨其内在的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对C6细胞存活力的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕实验及Transwell迁移小室检测告达庭对C6细胞体外迁移能力的抑制作用;免疫印迹实验检测告达庭对C6细胞内β-catenin、Survivin以及细胞周期相关蛋白CyclinD1和Cdk4蛋白表达的影响。结果告达庭能够剂量依赖性地抑制C6细胞的增殖并阻滞细胞于G1期,其机制与下调细胞周期素CyclinD1和Cdk4的表达相关;告达庭给药后,C6细胞的迁移能力明显受到抑制,同时β-catenin及其下游因子Survivin的表达呈显著下降趋势。结论告达庭具有抑制C6细胞的增殖和体外迁移能力的作用,其机制可能与抑制β-catenin蛋白及Survivin的表达相关。
- 费洪荣王桂玲赵莹周洪雷
- 关键词：神经胶质瘤细胞迁移细胞周期Β-CATENINSURVIVIN
- 地昔帕明逆转人脑胶质瘤耐药细胞U251/TR对替莫唑胺的耐药作用（英文）被引量：2
- 2016年
- 目的探讨抗抑郁药地昔帕明(DMI)对人脑胶质瘤耐药细胞(U251/TR)对替莫唑胺(TMZ)耐药作用的影响及其机制。方法 DMI 20~80μmol·L^(-1)或TMZ 0.5~10 mmol·L^(-1)处理U251/TR细胞24 h,用CCK-8法测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量(IC50)。CCK-8检测TMZ(1和2 mmol·L^(-1))和DMI(20,30和40μmol·L^(-1))联合或单独处理U251/TR细胞24 h对细胞增殖抑制的影响,用金正均法计算Q值来评价两种药物的协同效应。TMZ(1 mmol·L^(-1))和DMI(30μmol·L^(-1))联合或单独处理U251/TR细胞24 h,以Hoechst33258染色观察细胞核形态,发光法检测胱天蛋白酶3活性;实时定量PCR和Western蛋白印迹法检测C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达;小干扰RNA(si RNA)沉默CHOP的表达后,观察TMZ(1 mmol·L^(-1))和DMI(30μmol·L^(-1))联合给药对U251/TR增殖抑制的影响。结果 DMI或TMZ单用对U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性(r2=0.983,0.982,P<0.05),IC50分别为(33.6±0.5)μmol·L^(-1)和(2.5±0.6)mmol·L^(-1)。TMZ(1和2 mmol·L^(-1))和DMI(20,30和40μmol·L^(-1))联合给药能24 h对U251/TR细胞的增殖抑制率明显强于单独给药,以金正均法计算联合给药的Q值均>1.15,证实TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时,DMI 30μmol·L^(-1)和TMZ 1 mmol·L^(-1)联和应用可诱导U251/TR细胞凋亡,主要表现为细胞核固缩、染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给药的效果(P<0.05)。DMI和TMZ联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白CHOP的表达(P<0.05)。以si RNA沉默CHOP表达后,DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱,联合给药组细胞生存率由51.8%升至62.2%(P<0.05)。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞U251/TR对TMZ的耐药性,其机制可能与激活CHOP表达有关。
- 马健杨艳茹刘景景李芳芳陈美华王浩王蕾孙立立王凤泽王德才张汉霆
- 关键词：地昔帕明替莫唑胺逆转耐药C/EBP同源蛋白
- 蛋白激酶B抑制剂CCT128930对人骨肉瘤U2-OS细胞凋亡与自噬的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:研究蛋白激酶B抑制剂CCT128930对人骨肉瘤U2-OS细胞凋亡与自噬的影响。方法:体外培养U2-OS细胞,经0(空白对照,下同)、10、20μmol/L CCT128930作用24 h后采用DNA片段末端标记法观察U2-OS细胞的凋亡情况;经0、5、10、20μmol/L CCT128930作用24 h后采用Western blot法检测细胞中半胱氨酸氨基转移酶3(Caspase-3)、Caspase-8、Caspase-9、Caspase切割底物PARP蛋白表达及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例;将质粒绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(GFP-LC3)转染U2-OS细胞,经0、5、10μmol/L CCT128930作用24 h后采用荧光观察GFP-LC3融合蛋白在细胞内的表达;采用MTT法和Western blot法检测20μmol/L氯喹、CCT128930及二者联合作用于细胞24 h后的细胞活力及Caspase-3、PARP蛋白的表达。结果:与空白对照比较,CCT128930作用后U2-OS细胞凋亡率升高(P<0.01),Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP蛋白表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例升高(P<0.05或P<0.01),GFP-LC3融合蛋白表达增强;与氯喹联用后,使U2-OS细胞活力和Caspase-3、PARP蛋白表达均下降。结论:CCT128930可诱导U2-OS细胞发生凋亡和自噬,抑制自噬可能促进CCT128930对U2-OS细胞的毒性作用。
- 周运生王凤泽
- 关键词：蛋白激酶B细胞凋亡
- Akt激酶抑制剂MK-2206诱导U2OS人骨肉瘤细胞凋亡与自噬被引量：4
- 2014年
- 目的:研究Akt抑制剂MK-2206对U2OS细胞凋亡和自噬的影响。方法:采用MTT法检测MK-2206对U2OS细胞活力的影响,DNA片段末端标记试剂盒检测细胞凋亡的变化,免疫印迹法检测细胞内蛋白的表达,用LC3-II的表达量用来确定细胞的自噬水平。结果:MK-2206剂量依赖性地降低了U2OS细胞的活力;MK-2206能够促进caspase-9、caspase-3和PARP的活化切割而诱导U2OS细胞发生凋亡;MK-2206给药后可促进细胞内LC3-II的表达,氯喹阻断自噬后明显增强了MK-2206对U2OS细胞活力的抑制作用。结论:Akt抑制剂MK-2206能够诱导U2OS细胞发生凋亡和自噬;抑制自噬可促进MK-2206对U2OS细胞的毒性。
- 王雪莹李照梅周运生郭文莉王凤泽
- 关键词：细胞凋亡细胞自噬
- PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡被引量：16
- 2013年
- 目的:检测PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法:MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞周期变化;Annexin V-FITC/PI双标法测定细胞凋亡;免疫印迹分析细胞内蛋白表达的变化。结果:PF-04691502处理SGC-7901细胞后,降低细胞的活力并促进细胞阻滞于G1期,同时抑制cyclin D1的表达并上调p21的蛋白水平。PF-04691502可明显诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制与其促进caspase家族成员的活化并切割聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]底物密切相关。结论:PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502能够通过阻滞细胞周期来抑制SGC-7901细胞的增殖,同时能够激活细胞内caspase,使PARP发生剪切而诱导细胞凋亡。
- 费洪荣赵莹王桂玲曲晓兰王凤泽
- 关键词：P13KMTOR细胞凋亡
- CP466722抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡被引量：4
- 2017年
- 目的:研究共济失调毛细血管扩张症突变蛋白(ATM)抑制剂CP466722对人肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:MTT法检测CP466722对HepG2细胞活力的抑制作用,细胞集落形成实验观察CP466722对细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期的变化,TUNEL染色观察CP466722对细胞凋亡诱导作用,Western blotting检测细胞内蛋白的表达水平。结果:CP466722能够剂量依赖性地抑制HepG2细胞活力与细胞增殖;HepG2细胞经CP466722作用24 h后,细胞周期明显阻滞于G_2/M期,同时磷酸化细胞分裂周期蛋白2(p-Cdc2)、细胞分裂周期蛋白25 C(Cdc25C)和磷酸化Cdc25C(p-Cdc25C)的蛋白水平下降,而p27的蛋白表达则上调。较高浓度的CP466722诱导HepG2细胞发生凋亡,促进胱天蛋白酶3(caspase-3)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切。此外,CP466722抑制β-联蛋白(β-catenin)及其下游因子生存素(survivin)的表达,上调p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化水平。结论:CP466722抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞发生凋亡,其机制可能与其抑制β-catenin信号途径和激活p38 MAPK相关。
- 孙珂褚翠英郑梦琦高远齐由坤王凤泽
- 关键词：肝细胞癌细胞增殖细胞凋亡P38丝裂原活化蛋白激酶
- PI3Kα抑制剂BYL719抑制脐静脉血管内皮细胞增殖及血管生成的研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨PI3Kα抑制剂BYL719对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖与血管生成的影响。方法采用MTT法测定BYL719对HUVEC活力的抑制作用;用流式细胞术检测BYL719对其细胞周期的影响;体外小管形成实验观察BYL719对血管生成的影响;Western blot检测Akt、p-Akt、cyclin D1和CDK4蛋白表达水平的变化。结果 BYL719抑制了HUVEC中Akt的磷酸化水平;BYL719作用细胞后,HUVEC的细胞活力显著降低;BYL719能够通过下调cyclin D1和CDK4的表达而阻滞细胞于G1期,进而抑制HUVEC的增殖;HUVEC经BYL719处理后,体外小管形成能力受到显著抑制。结论 BYL719降低了HUVEC中Akt的磷酸化水平,能够抑制HUVEC的细胞增殖和血管生成。
- 王西双庄梦玮姜文艳张翠王凤泽
- 关键词：人脐静脉血管内皮细胞细胞增殖细胞周期血管生成
- CHK1抑制剂SCH900776抑制胶质瘤细胞U251的增殖及迁移被引量：2
- 2018年
- 目的:本研究以胶质瘤细胞U251为实验用细胞株,探讨细胞周期检测点激酶1(CHK1)抑制剂SCH900776对其增殖及迁移的影响。方法:MTT法和细胞集落形成实验观察SCH900776对细胞增殖的影响;流式细胞术分析SCH900776对细胞周期分布的影响;划痕实验观察SCH900776对细胞迁移的影响;Western blot实验检测相关蛋白的表达水平。结果:SCH900776能够明显抑制U251细胞的增殖,诱导细胞发生S期或G2/M期阻滞,同时下调细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)和p-Cdc2的水平;SCH900776对细胞迁移表现出明显的抑制作用;Western blot结果表明,SCH900776可升高p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平,同时抑制蛋白激酶B(Akt)的磷酸化激活。结论:CHK1抑制剂SCH900776能够抑制胶质瘤细胞U251的增殖与迁移,其机制可能与其激活p38MAPK和抑制Akt活性相关。
- 李召君李荣耀王茹费洪荣王凤泽
- 关键词：细胞增殖细胞迁移胶质瘤
- 抑制自噬促进MK-2206诱导SGC-7901胃癌细胞发生DNA损伤被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)抑制剂MK-2206对胃癌细胞SGC-7901DNA损伤的影响。方法:不同浓度的MK-2206作用于SGC-7901细胞后,免疫荧光检测细胞内DNA损伤标记分子磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)焦点的生成,Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平,同时观察MK-2206对自噬标志蛋白LC3-II表达量的影响,用以确定MK-2206是否促进细胞发生自噬。结果:MK-2206能够诱导SGC-7901细胞发生DNA损伤,促进细胞内γ-H2AX焦点生成,并且激活DNA损伤相关蛋白的表达;MK-2206作用细胞后,LC3-II的生成增加;抑制细胞的自噬显著增强了MK-2206诱导的H2AX磷酸化水平。结论:Akt抑制剂MK-2206能够诱导细胞发生DNA损伤和自噬,抑制自噬促进了MK-2206诱导的DNA损伤。
- 张翠姜文艳吴玉梅庄梦玮王西双焦鹏
- 关键词：DNA损伤Γ-H2AX细胞自噬
