国家自然科学基金(81272688) 作品数:15 被引量:146 H指数:6 相关作者: 马宽生 别平 蒋家云 李晓武 闫军 更多>> 相关机构: 第三军医大学西南医院 第三军医大学第一附属医院 河南科技大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体制备及体外实验研究 被引量:1 2016年 目的制备聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体并研究其理化性质的表征参数和体外转染效率。方法通过化学还原法制备聚乙烯亚胺修饰的纳米金基因载体,用绿色荧光蛋白质粒(pAc GFPN1)做报告基因,纳米基因载体可通过静电吸附的方式结合质粒DNA。用紫外分光光度计检测其吸收光谱,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),1%琼脂糖凝胶电泳检测该基因载体与质粒DNA的结合稳定性,CCK-8实验检测聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体及DNA-纳米金复合物对HEK293细胞的细胞毒性作用,通过荧光显微镜观察聚乙烯亚胺纳米基因载体介导pAcGFP-N1在体外培养的HEK293细胞中的表达,并分析其转染效率。结果聚乙烯亚胺还原氯金酸可以得到带正电荷的纳米颗粒,呈单分散球形分布,其粒径为(12.3±3.3)nm。在pH=7.2时,Zeta电位为+(29.7±5.1)m V。1%琼脂糖凝胶电泳结果表明,当纳米金/质粒DNA≥0.5时,质粒DNA可完全结合到纳米金表面。体外转染实验表明,聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体能介导pAcGFPN1转染HEK293细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白,其转染效率可达25%。结论聚乙烯亚胺修饰纳米金是一种新型非病毒基因载体,具有转染效率高、对细胞毒性小等优势。 蒋家云 邹孟达 陈施瀚 邓青松 谭运华 夏峰 马宽生关键词:聚乙烯亚胺 纳米金 基因载体 转染 Habib4×辅助的联合肝脏分隔和门静脉结扎的二步肝切除术治疗原发性肝癌 2016年 <正>1病例介绍患者男,33岁,因'上腹胀痛2周余,体检发现右肝占位5天'入院。既往'乙型病毒性肝炎'20余年。无其他慢性病史。查体:心肺查体未见异常,右上腹轻压痛,右侧肋缘下2cm扪及肿大的肝脏,质硬,其余未见明显阳性体征。辅助检查:甲胎蛋白(AFP)20.89μg/L,乙肝病毒复制量HBV-DNA1.62×10~7 IU/ml,经抗病毒治疗,术前降至<500IU/ml。吲哚菁绿15分钟滞留率(ICG-R15)为4.8%。超声造影提示:(1)右肝下段低回声病灶, 王强 闫军 马宽生 别平关键词:肝脏 肝癌 肝脏肿瘤 肝切除术 原发性 手术切除与射频消融针对中等大小肿瘤疗效分析 被引量:5 2015年 目的 探讨两种不同治疗方法针对单发肿瘤直径介于3-6cm的肝癌疗效,为临床治疗方式的选择提供依据。方法回顾性分析2008年12月至2011年12月期间在第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所接受手术切除或射频消融治疗单发肿瘤直径介于3-6cm肝癌的近、远期疗效,比较两种手术方式的疗效差异。结果 手术组术后1年以内复发41例,复发率为32.5%,2年以内复发87例,复发率为69.1%,3年以内复发103例,复发率为81.7%,射频消融组术后1年内复发29例,复发率为40.8%,2年以内复发51例,复发率为71.8%,3年以内复发60例,复发率为84.5%,二者之间同时间段复发率差异有统计学意义(P=0.039);手术组存活率第1、2、3年内分别为84.6%,69.8%,56.3%,射频消融组存活率第1、2、3年内分别为85.3%,70.9%,53.4%,二者同时间段存活率差异无统计学意义(P=0.105)。结论 针对大小介于3-6cm的单发性肝癌,射频消融治疗可作为首选治疗方法。 肖冰 马宽生 冯凯关键词:肝肿瘤 导管消融术 手术 射频辅助肝切除术与单纯性肝切除术治疗肝细胞性肝癌的前瞻性随机对照研究 被引量:5 2015年 目的比较射频辅助肝切除术和单纯性肝切除术治疗肝细胞性肝癌的围手术期疗效。方法术前采用随机数字表法将2012年12月至2014年10月在第三军医大学西南医院住院的92例肝癌患者随机性分配到两个治疗组中,其中射频辅助肝切除术组(RF+LR)46例,单纯性肝切除术组(LR)46例。观察的主要疗效指标是各组患者术中的出血量和肝门阻断时间;次要疗效指标是术后肝功能、并发症发生率、死亡率和住院时间。结果平均失血量在射频辅助肝切除术组(RF+LR)低于单纯性肝切除术组(LR,300 m L vs 400 m L,P=0.049);肝门阻断的时间在RF+LR组明显降低(10 min vs15 min,P=0.014)。术后肝功能和总体的并发症发生率两组间无统计学差异(P>0.05),住院时间RF+LR组明显缩短(18.5 d vs 22.5 d,P=0.002)。两组均无死亡的患者。结论射频辅助肝切除术在肝细胞性肝癌的治疗中能够有效地减少术中出血量、肝门阻断时间和住院时间,但是对于肝硬化重的患者应慎用。 张璠 闫军 冯晓斌 夏锋 李晓武 马宽生 别平关键词:肝细胞性肝癌 出血量 并发症 长链非编码RNA抑制肝癌射频消融后残癌细胞增殖的作用机制研究 目的: 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC),以下简称肝癌,是第三位导致癌症相关死亡的疾病。射频消融(Radiofrequency ablation,RFA)术是列入肝癌诊治指南的临床常... 邓青松关键词:射频消融术 长链非编码RNA 细胞增殖 LncRNA RNU12上调热休克蛋白72抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡 被引量:2 2017年 目的探讨46~50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制。方法建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度(43、46、50℃)条件下分别处理10 min,Annexin-V/PI染色检测重组人TRAIL蛋白对肝癌细胞凋亡率的影响,以常温37℃作为对照组。根据前期肝癌细胞Agilent Human lnc RNA+mRNA Array V4.0芯片表达谱数据,选定50℃时特异性高表达的LncRNA RNU12作为研究对象。构建LncRNA RNU12-sh RNA慢病毒干扰载体,转染MHCC97-H细胞。qRT-PCR及Western blot检测感染前后不同温度组中热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)mRNA和蛋白的表达变化。利用流式细胞技术检测LncRNA RNU12慢病毒干扰载体对TRAIL蛋白诱导细胞凋亡的影响。采用荧光原位杂交(FISH)技术检测LncRNA RNU12亚细胞定位情况。结果温度在43℃时促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能,46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能。HSP72 mRNA在4个温度组中的表达均较干扰前明显降低(P<0.01);在蛋白水平,37、46、50℃组较干扰前显著降低(P<0.05)。转染后,46、50℃条件下TRAIL蛋白诱导MHCC97-H细胞凋亡分别上升7.36%、8.84%(P<0.01)。利用RNA-FISH技术确定50℃时LncRNA RNU12主要在MHCC97-H细胞细胞核中表达。结论 LncRNA RNU12在转录水平上调HSP72表达可能是46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白促肝癌细胞凋亡分子机制之一。 陈施翰 邓青松 蒋家云 邹孟达 谭运华 马宽生关键词:肝癌细胞凋亡 长链非编码RNA HSP72 载VEGF siRNA环五肽RGD偶联纳米金颗粒的基本特性及在射频消融中的应用 被引量:3 2015年 目的:探讨VEGF si RNA环五肽RGD偶联纳米金颗粒(GNP)复合物(GNP-Tyr RGD-VEGFsi RNA)的基本特性,以及对肝脏射频消融(RFA)毁损效应的影响。方法:利用化学和静电吸附的方法合成GNP-Tyr RGD-VEGFsi RNA;电镜观察复合物的离散性;凝胶电泳检测复合物中VEGF si RNA的稳定性;采用CCK-8法检测复合物对正常肝细胞的细胞毒性;电镜检测复合物与正常肝细胞、肝癌细胞共孵育后的结合能力;在离体猪肝上检测复合物对RFA毁损效果的影响。结果:复合物较单纯GNP有更好的离散性;复合物所含VEGF si RNA量基本等于最初VEGF si RNA加入量;复合物与单纯GNP在30%的浓度以下均对正常肝细胞几乎无毒性;复合物对肝癌细胞的结合力明显高于正常肝细胞(P<0.05),而单纯GNP对两种细胞的结合力无明显差异(P>0.05);经射频针注入复合物的射频毁损直径明显大于注入生理盐水的对照组[(2.19±0.24)cm vs.(1.71±0.14)cm,P<0.05)。结论:GNP-Try RGD-VEGFsi RNA复合物集靶向浓集与靶向治疗于一体,且可能有助于增强肝癌RFA的疗效。 熊青 邹孟达 邓青松 李晓武 马宽生 别平关键词:纳米复合物 药物载体 导管消融术 磁共振成像对原发性肝癌碘油栓塞治疗后的随访价值 2013年 目的探讨MRI对评判经碘油栓塞治疗后原发性肝癌(HCC)的疗效。方法选择我院收治的42例HCC患者,共49个病灶。在经碘油栓塞(TACE)治疗后,21例行MRI检查及病理切片观察,观察MRI影像表现及检出准确率。结果 MRI平扫表现为肿瘤组织在T1WI和T2WI上信号多样,有高、等、低信号或多种信号复合。切片观察显示,34个病灶中,18个有不同程度的坏死,7个完全坏死,9个无坏死。共有25个病灶MRI检查显示为坏死,6个检查为残留,检查准确率为91.2%(31/34)。结论 MRI在判断HCC碘油栓塞治疗的预后中,检出率高,能有效反映病灶特征,值得推广。 王小存 张哲菠 郑汉朋 熊青 王旭荣 吕金纯 邓青松 李晓武 别平 马宽生关键词:磁共振成像 原发性肝癌 碘油栓塞治疗 超声造影结合定量分析技术在鉴别诊断甲状腺良恶性结节中的应用价值 被引量:81 2019年 目的探讨超声造影联合定量分析技术鉴别诊断甲状腺良恶性结节的临床价值。方法回顾性分析2016年8月至2017年9月于陆军军医大学第一附属医院超声造影检查的114例(共计175个结节)甲状腺结节患者,分析甲状腺良恶性结节超声造影(contrast-enhanced ultrasonography, CEUS)增强模式及时间-强度曲线(time-intensity curve, TIC)特点。所有患者均经手术证实,并与手术病理结果对照。结果 CEUS检测结果中显示良性结节为93个,恶性结节为82个,而病理结果显示良性结节为98个(其中腺瘤29个,结节性甲状腺肿69个),恶性结节(乳头状癌)为77个,CEUS检查对甲状腺恶性结节的诊断敏感性为85.7%,特异性为83.6%,准确率为84.5%。CEUS显示58.1%(57/98)的甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿呈均匀整体高增强或等增强,71.4%(55/77)的甲状腺恶性结节呈不均匀低增强。TIC显示,甲状腺腺瘤CEUS较结节周边的甲状腺组织进入更为迅速,且上升较快,其PI相对较高(P<0.05)。结节性甲状腺肿表现出同样迅速进入的特点,且上升较快,其PI与周围组织较相近。而甲状腺癌CEUS则缓慢进入,且上升较慢,其PI相对较低(P<0.05)。甲状腺癌的PI明显低于甲状腺良性结节(P<0.05),但二者在达峰时间和增强开始时间上差异均无统计学意义。结论甲状腺常见的良恶性结节CEUS具有不同的图像特征,其中甲状腺癌(乳头状癌)主要呈缓慢不均匀低增强,而甲状腺良性结节则以快速高增强或等增强为主。在常规超声检查的基础上,CEUS联合定量分析技术有助于提高甲状腺癌的诊断准确性。 陈萍 朱连华 方可敬 郭燕丽 唐春霖 陈凯旋 谭鹰 吴峰 陈小情 陈朝辉 柳强维关键词:超声造影 甲状腺结节 环五肽RGD靶向的纳米金偶联VEGFsiRNA增强兔VX2肝肿瘤射频消融损伤效应的研究 被引量:2 2017年 目的:探讨环五肽RGD(Tyr RGD)靶向的纳米金颗粒(GNPs)偶联VEGF小干扰RNA(Tyr RGDGNPs-VEGFsi RNA)复合物对兔肝脏VX2肿瘤射频消融(RFA)损伤效应的影响。方法:采取开腹肝脏种植VX2肿瘤组织块的方法建立兔VX2肝癌模型。首先将6只肝癌兔均分为两组分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物和GNPs,注射48 h后,透射电镜检测两者在肿瘤标本中的聚集和分布情况。然后将30只肝癌兔均分为3组,分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物、GNPs、生理盐水48 h后,行RFA治疗,48 h后切取标本,行病理学观察,测量肿瘤毁损体积,TUNEL法检测残癌细胞凋亡。最后将27只肝癌兔均分为3组,分别行RFA+Tyr RGD-GNPsVEGFsi RNA注射,RFA+生理盐水注射、生理盐水注射,饲养至自然死亡,记录生存时间。结果:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物在肿瘤中的聚集明显优于GNPs(14.2颗/500 nm视野vs.0颗/500 nm视野,P<0.01)。注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物后的RFA治疗毁损体积明显大于注射GNPs和生理盐水(5.12 cm3 vs.1.78 cm3 vs.1.49 cm3,P<0.01),且前者残癌区肿瘤细胞凋亡数明显高于后两者(111.7个vs.36.3个vs.34.7个,P<0.01),而后两者上述指标差异均无无统计学意义(均P>0.05)。RFA+Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA治疗的肝癌兔较RFA+生理盐水治疗、单纯生理盐水治疗的肝癌兔的平均生存时间明显延长(70.9 d vs.51.2 d vs.43.9 d,P<0.01)。结论:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物能在肝脏肿瘤中靶向聚集,具有扩大RFA毁损范围和促进肿瘤细胞凋亡的作用,从而增强RFA疗效。 邹孟达 熊青 邓青松 蒋家云 陈施翰 夏锋 马宽生 别平关键词:纳米复合物 消融技术