山西省自然科学基金(20051099)
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 相关作者：杨晓峰刘晶韩国梁田平贵张晓俊更多>>
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- 活体红色荧光成像评估Ag85A／B DNA疫苗联合抑瘤效应的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨可视、直观评估Ag85A/B DNA疫苗联合抑瘤效应的科学方法。方法:采用红色荧光蛋白基因DsRed-Express标记小鼠膀胱癌细胞BTT739,经G418抗性筛选获得稳定表达RFP的细胞克隆BTT739-RFP,将BTT739-RFP细胞接种到615小鼠皮下,建立可视化膀胱癌移植瘤模型。将建模成功的32只小鼠随机分为pVAX1-Ag85A/B联合组:BCG组;空白质粒(pVAX1);生理盐水(NS)。建模后第7、14、21天注射相应的药物。分别于给药前即第7和第28天进行活体荧光成像,进行统计学处理。并于第28天检测血清特异性抗体水平和脾淋巴细胞的增殖活性。结果:构建了稳定表达RFP的BTT739细胞;成功建立可视化膀胱癌模型,成瘤率100%;经治疗后,pVAX1-Ag85A/B组的荧光强度明显低于pVAX1组和NS组,与BCG组无统计学差异。pVAX1-Ag85A/B组的抗体滴度为1:1 000,BCG免疫组的抗体滴度为1:800。pVAX1-Ag85A/B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性,二者差异无统计学意义。结论:应用Ag85A/B DNA疫苗可提高膀胱癌小鼠的免疫功能,其效果与BCG差异无统计学意义;活体红色荧光体外成像的评估体系与细胞水平的分析一致。
- 汪海龙杨晓峰付奎杨彬王炜王晔
- 关键词：膀胱癌DNA疫苗
- Ag85A DNA疫苗对移植性小鼠膀胱肿瘤免疫功能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨A4985ADNA疫苗对移植性小鼠膀胱肿瘤的免疫治疗影响。方法将5～6周龄T739小鼠随机分成Ag85ADNA疫苗组（pcDNA．3．1-Ag85A组）、空白质粒组（pcDNA．3．1组）、生理盐水组和卡介苗组（13CA3组）4组，将生长旺盛的BTF739小鼠膀胱肿瘤细胞接种于各组小鼠左后肢内侧皮下，每只1×100个细胞，荷瘤第7、14和21天于小鼠右后肢肌肉分别注射0．1mL pcDNA．3．1-Ag85A，pcDNA．3．1，生理盐水或BCG。荷瘤第28天处死小鼠，剥离肿瘤称重，依据公式计算肿瘤生长抑制率。利用流式细胞仪分析荷瘤小鼠脾脏T细胞亚群数量。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测荷瘤小鼠血清干扰素（IFN）-7含量。结果Ag85ADNA疫苗组肿瘤生长抑制率和T细胞亚群数量检测较空白质粒组和生理盐水组均无增高，Ag85ADNA疫苗组血清IFN-7水平较空白质粒组和生理盐水组有所增高，但尚达不到BCG的效果。而空白质粒组和生理盐水组之间未见有意义的变化。结论尚不能认为肌肉注射Ag85ADNA疫苗可以有效提高移植性小鼠的免疫功能。
- 刘晶杨晓峰王鹏张晓俊田平贵韩国梁
- 关键词：膀胱肿瘤卡介苗疫苗
- 试验剂量Ag85A与Ag85B DNA疫苗对膀胱癌大鼠血液系统及肝肾功能的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨试验剂量Ag85A与Ag85BDNA疫苗对膀胱癌大鼠血液系统及肝肾功能的影响。方法致癌剂N-甲基亚硝基脲(MNU)膀胱灌注雌性Wistar大鼠制备膀胱肿瘤模型。将建模成功的48只大鼠随机分为Ag85A+DNAAg85BDNA疫苗组,Ag85BDNA疫苗组,Ag85ADNA疫苗组,卡介苗(BCG)组,空白质粒组和生理盐水组,各8只,建模后第7、14、21天于大鼠右后肢肌肉注射给药。第28天处死大鼠,腹主动脉采血进行血细胞学检测,血清学检测。结果成功建立大鼠膀胱癌模型,致瘤率100%。经治疗后,治疗组大鼠血中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)数较空白质粒组和生理盐水组均增高,差异有统计学意义(P<0.05);Ag85ADNA+Ag85BDNA疫苗组较单用Ag85ADNA,Ag85BDNA疫苗组增高幅度较大,与单用Ag85ADNA疫苗组相比有统计学意义(P<0.05),与Ag85BDNA疫苗组、BCG组相比无统计学意义(P>0.05);尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)测定值无论是单独使用还是联合使用DNA疫苗组变化均不明显,与生理盐水组比较无统计学意义(P>0.05)。而BCG组变化明显,与生理盐水组比较有统计学意义(P<0.05),与Ag85ADNA,Ag85BDNA,Ag85ADNA+Ag85BDNA组比较均有统计学意义(P<0.05)。其余血液学指标实验组与对照组相比差异均无统计学意义。结论试验剂量Ag85A与Ag85BDNA疫苗免疫膀胱癌大鼠不会引起肝肾功能的损害和红细胞系的改变,白细胞的变化与其发挥细胞免疫功能相一致。
- 田平贵韩国梁杨晓峰刘晶
- 关键词：膀胱肿瘤血液疫苗
- Ag85A与Ag85B DNA疫苗对膀胱肿瘤免疫效应的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究单独及联合应用Ag85A与Ag85B DNA疫苗对膀胱肿瘤的免疫效应。方法选择6～8周龄雌性Wistar大鼠作为实验对象。以膀胱灌注MNU建立膀胱原位癌模型，左后肢皮下注射BTF739细胞株建立种植性膀胱肿瘤模型。于末次膀胱灌注后14d随机处死10只大鼠，以确定模型是否成功建立。每种模型均随机分为6组（每组8只）：生理盐水（NS）组、pcDNA3．1组（空白质粒组）、pcDNA3．1-Ag85A（Ag85A）组．pcDNA3．1-Ag85B（Ag85B）组、pcDNA3．1-Ag85A＋Ag85B组（联用组）、卡介苗（BCG）组。并予相应干预治疗。计算各组肿瘤生长抑制率、荷瘤鼠脾脏T细胞亚群数量变化，检测血清干扰素（IFN）-γ水平，剥离肿瘤进行病理组织学检查。结果肿瘤生长抑制率：BCG组最高达63．53％。其余依次为联用组53．56％、Ag85B组33．08％、Ag85A组11．50％、空白质粒组1．10％；干预治疗后空白质粒组T细胞亚群无明显变化，其余各组CD4^＋T细胞与CD8^＋T细胞亚群的数量及CD4^＋／CD8^＋比值均有增加（P〈0．05或P〈0．01）；空白质粒组血清IFN-γ水平无变化，BCG组升高最明显，其余依次为联用组、Ag85B组,Ag85A组。病理组织学观察显示BCG组、联用组、Ag85B组肿瘤坏死明显，而Ag85A组、NS组和空白质粒组肿瘤坏死不明显。结论Ag85A与Ag85B DNA疫苗对大鼠原位及种植性膀胱癌有明显的免疫效应，Ag85BDNA疫苗的免疫效力强于Ag85ADNA疫苗；两者联用效果更显著，但不及BCG的抗肿瘤效果。
- 韩国梁田平贵刘晶杨晓峰
- 关键词：膀胱肿瘤卡介苗AG85ADNA疫苗AG85BDNA疫苗
- Ag85A和Ag85B DNA疫苗对大鼠膀胱癌免疫治疗的效果被引量：7
- 2008年
- 目的:探讨Ag85A和Ag85BDNA疫苗对大鼠膀胱癌免疫治疗的效果。方法:致癌剂N-甲基亚硝基脲(methyl nitrosourea,MNU)膀胱灌注雌性Wistar大鼠制备膀胱癌模型。将建模成功的48只大鼠随机分为生理盐水组、空白质粒组、卡介苗组、Ag85A DNA疫苗组、Ag85B DNA疫苗组、Ag85A+Ag85B DNA疫苗组(每组各8只),建模后第7、14、21天于大鼠右后肢肌内注射相应药物。第28天处死大鼠,流式细胞仪检测各组大鼠脾脏细胞的CD4+和CD8+T细胞亚群数量并计算CD4+/CD8+比值;ELISA法检测大鼠血清中IFN-γ分泌水平;剥离膀胱肿瘤进行组织病理学检查。结果:成功建立大鼠膀胱癌模型,致瘤率100%。经疫苗治疗后,Ag85A组、Ag85B组和Ag85A+Ag85B组膀胱肿瘤体积均有所减小、病理分级也有所减轻,但效果不及卡介苗组。Ag85A组、Ag85B组、Ag85A+Ag85B组和卡介苗组CD4+T细胞亚群数量分别为(17.27±2.95)%、(23.15±1.56)%、(30.80±1.83)%、(38.05±1.48)%;CD8+ T细胞亚群数量分别为(9.03±1.06)%、(10.28±0.39)、(11.29±0.74)、(13.14±1.24);CD4+/CD8+比值分别为(1.90±0.10)、(2.25±0.08)、(2.73±0.19)、(2.97±0.23);血清IFN-γ含量分别为(96.94±12.38)、(131.03±26.68)、(179.20±28.88)、(240.53±32.17)pg/ml;与生理盐水、空白质粒组相比,Ag85A组、Ag85B组、Ag85A+Ag85B组能够显著提高以上4项检测指标(P<0.01),但均低于卡介苗组;Ag85A+Ag85B组效果强于Ag85B组、更强于Ag85A组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:应用Ag85A和Ag85BDNA疫苗均可提高膀胱癌大鼠的免疫功能,其效果为Ag85A+Ag85B>Ag85B>Ag85A,但总体上都达不到卡介苗的抗癌免疫效果。
- 刘晶韩国梁杨晓峰田平贵王鹏张晓俊
- 关键词：膀胱癌DNA疫苗AG85AAG85B卡介苗
- pVAX1-Ag85B的构建及其免疫原性的初步探索
- 2012年
- 目的构建以Ag85B基因为基础的DNA疫苗,并对其在小鼠体内的免疫原性进行初步分析。方法以pET28a-Ag85B基因组DNA为模板,PCR扩增获得Ag85B全长基因;将PCR产物构建成pUCm-Ag85B亚克隆;经限制性内切酶消化后克隆入pVAX1载体中构建真核表达质粒pVAX1-Ag85B,酶切、DNA测序鉴定。并将构建的DNA疫苗经肌肉免疫荷瘤小鼠,检测血清特异性抗体水平和脾淋巴细胞的增殖活性,并与BCG组、空白质粒组、生理盐水组相比较。结果经NheⅠ和HindⅢ双酶切、DNA测序鉴定后证实,Ag85B基因定向克隆入pVAX1载体,碱基无突变,序列完全正确。免疫荷瘤小鼠后,pVAX1-Ag85B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性,但效果不及卡介苗;pVAX1-Ag85B组的抗体滴度为1∶400,BCG免疫组的抗体滴度为1∶800。结论成功地构建了pVAX1-Ag85B质粒,为膀胱肿瘤的基因免疫治疗提供可靠的实验依据。免疫小鼠后,可提高小鼠免疫水平,但效果不及卡介苗。
- 汪海龙张宗平王安果唐硕李云祥杨晓峰
- 关键词：DNA疫苗PVAX1AG85B膀胱肿瘤
- pVAX1-Ag85B质粒的构建及其免疫原性的可视化研究
- 2011年
- 构建以Ag85B基因为基础的DNA疫苗,并用活体红色荧光成像探讨其在动物体内免疫原性。方法:以pET28a-Ag85B基因组DNA为模板,用PCR扩增获得Ag85B全长基因;将PCR产物构建成pUCm-Ag85B亚克隆;经限制性内切酶消化后克隆入pVAX1载体中构建pVAX1-Ag85B,酶切、DNA测序鉴定。并将构建的DNA疫苗经肌肉免疫可视化膀胱癌移植瘤模型,通过活体红色荧光成像,从整体上直接、可视地观测Ag85B的免疫原性。结果:经NheⅠ和HindⅢ双酶切、DNA测序鉴定后证实,Ag85B基因定向克隆入pVAX1载体,碱基无突变,序列完全正确。免疫小鼠后,pVAX1-Ag85B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性,但效果不及卡介苗。结论:成功地构建了pVAX1-Ag85B质粒,为膀胱肿瘤的基因免疫治疗提供可靠的实验方法。免疫小鼠后,可提高膀胱癌小鼠免疫水平,但效果不及卡介苗。
- 汪海龙杨晓峰张宗平王安果唐硕
- 关键词：激素疗法膀胱肿瘤DNA疫苗PVAX1AG85B
- Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫对可移植性鼠膀胱肿瘤的免疫调节效应被引量：4
- 2009年
- 目的探讨联合应用Ag85A与Ag85B DNA疫苗抗膀胱肿瘤的免疫效应。方法采用小鼠膀胱癌BTT739细胞株,构建可移植性T739小鼠膀胱肿瘤模型。随机法分为6组:生理盐水组、BCG组、pcDNA3.1+组、pcDNA-Ag85A组、pcDNA-Ag85B组及pcDNA-Ag85A和pcDNA-Ag85B联合组。荷瘤后第7天、14天和21天各肌注1次,末次注射后第7天检测各组小鼠脾脏的CD4+和CD8+T细胞亚群数量及CD4+/CD8+比值、小鼠血清IFN-γ、肿瘤体积重量并进行组织病理学检查。结果Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫组CD4+和CD8+T细胞亚群数量及CD4+/CD8+比值、血清IFN-γ明显高于DNA疫苗单独免疫组;小鼠的肿瘤重量明显低于DNA疫苗单独免疫组,差异有显著性(P<0.05);肿瘤组织病理学分析Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫组肿瘤坏死较DNA疫苗单独免疫组明显,且瘤体周围及瘤体内炎性细胞浸润较多。但Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合、pcDNA-Ag85A、pcDNA-Ag85B DNA疫苗单独应用组均不及单纯应用BCG的免疫调节效应。结论Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫在抗膀胱肿瘤过程中具有明显的免疫效应,明显优于DNA疫苗单独免疫,二者联用具有协同增强免疫效应;但Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫效应尚达不到BCG的作用。
- 杨晓峰张晓俊王鹏
- 关键词：卡介苗DNA疫苗AG85AAG85B
