福建省自然科学基金(D0810015)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：陈宏文方柏山王金良谢向前林艳更多>>
- 相关机构：华侨大学厦门大学更多>>
- 发文基金：福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划福建省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 米曲霉pyrG基因克隆及其同源转化系统的建立被引量：7
- 2010年
- 建立以乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶基因(pyrG)为选择标志,以米曲霉为宿主菌的同源转化系统。以米曲霉基因组为模板,通过PCR扩增获得pyrG基因,将该片段与表达载体pMD18-T相连,转化大肠杆菌DH5α,经蓝白斑筛选、PCR快速筛选、酶切和测序验证,获得重组质粒pMD-pyrG,完成pyrG基因的克隆。序列分析表明该基因与米曲霉KBN616的pyrG基因编码序列的同源性为99.9%,两者经推导的氨基酸的同源性为99.6%。以米曲霉pyrG营养缺陷株为受体菌,通过PEG/CaCl2诱导的原生质体转化方法,将重组质粒导入该受体菌,使米曲霉pyrG缺陷株发生基因转化,成为pyrG+,由此成功建立了以pyrG为筛选标记基因、同型米曲霉pyrG基因缺陷株为受体菌的基因转化系统。
- 王金良陈宏文
- 关键词：重组质粒克隆
- 克雷伯杆菌甘油脱氢酶和1,3-丙二醇氧化还原酶的动力学机制被引量：3
- 2010年
- 本研究主要对克雷伯杆菌甘油转化1,3-丙二醇代谢途径中的2个关键酶甘油脱氢酶(GDH)、1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)反应机制和动力学进行了研究。首先,通过初速度和产物抑制动力学研究确定了GDH、PDOR双底物酶促反应机制为有序BiBi机制,明确了由反应物消耗到产物生成之间的历程。其次,建立了GDH、PDOR双底物酶促反应动力学模型,由动力学模型可知,在偶合反应中,如果GDH和PDOR酶量相同,GDH氧化反应成为限速反应,而辅酶I将主要以氧化型NAD+形式存在。动力学信息为酶法合成1,3-丙二醇和代谢工程研究提供理论指导。
- 陈宏文聂金峰陈国方柏山
- 关键词：甘油脱氢酶动力学模型
- 农业废弃物木质纤维素化学组成数据库的建立被引量：6
- 2008年
- 选择常见的22种农业废弃物,采用碱抽提和醇沉方法分离得到半纤维素和纤维素,并对半纤维素进行酸水解处理得到单糖,通过高效液相色谱(HPLC)分析其糖组成成分,建立农业废弃物中主要成分(纤维素、半纤维素和木质素)及半纤维素中主要单糖(木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖)组成数据库,为农业废弃物的再利用提供参考依据。还对半纤维素碱抽提步骤进行了优化。
- 林艳谢向前陈宏文
- 关键词：农业废弃物纤维素半纤维素单糖
- 米曲霉木糖醇脱氢酶的分子模建与对接被引量：3
- 2011年
- 【目的】研究米曲霉木糖醇脱氢酶基因的结构与功能。【方法】克隆测序来源于米曲霉的木糖醇脱氢酶(XDH)基因,利用Swiss-MODEL和Modeller对XDH进行三级结构模建,通过PROCHECK和Prosa2003对得到的4个目标模型进行评价,从中得到一个最佳模型。在同源建模的基础上,通过分子对接软件MolsoftICM-Pro,对辅因子进行对接,预测了XDH与NAD+、Zn2+作用的相关残基。寻找底物木糖醇与XDH结合的可能活性口袋,用Molsoft模拟XDH与木糖醇的对接,预测了酶与底物作用的关键氨基酸残基。【结果】结构分析显示,米曲霉XDH含有醇脱氢酶家族锌指纹结构和典型醇脱氢酶Rossmann折叠的辅酶结合域,属于Medium-chain脱氢酶(MDR)家族。通过对接研究,预测了XDH与NAD+之间形成氢键的氨基酸有Asp206、Arg211、Ser255、Ser301和Arg303,这些氨基酸位于结合域,与Zn2+形成氢键的氨基酸有His72和Glu73,位于催化域,与天然底物木糖醇形成氢键的氨基酸有Ile46、Ile349、Lys350和Thr351,位于催化域。【结论】所得信息对XDH分子定向改造、拓展米曲霉工业应用范围有重要意义。
- 陈宏文苟元波张卡方柏山
- 关键词：木糖醇脱氢酶米曲霉同源建模分子对接
- 米曲霉木聚糖酶高产菌株选育
- 2011年
- 以米曲霉C-2为出发菌株,紫外诱变后,利用透明圈初筛,再分别以农业废弃物1%蔗渣-1%麸皮复合物、2%蔗渣、2%碱提蔗渣半纤维素和2%纤维素溶剂分馏法(CSLF)提取的蔗渣半纤维素为碳源摇瓶复筛,得到一株高产木聚糖酶的米曲霉菌株A73.结果表明:米曲霉A73在上述碳源培养基中,产木聚糖酶酶活力比出发菌株分别提高了281.15%,82.81%,56.09%和33.11%;CSLF蔗渣半纤维素诱导米曲霉C-2及其诱变菌株产酶能力较弱,明显低于其他3种诱导物.
- 李晨陈宏文
- 关键词：木聚糖酶米曲霉紫外诱变半纤维素
